人胰岛染色方案

本实验的总体目标是通过苏木精和伊红染色以及免疫组织化学方法，对人胰腺胰岛进行表征。该目标通过从包埋在石蜡块中的胰腺样本制备连续切片来实现。随后将切片按原始方向置于载玻片上。

部分切片使用伊红-苏木精染色，其余切片则通过免疫组织化学染色；最后一步是扫描染色后的切片并按病例进行归类。最终，这些图像可上传至在线病理学数据库，供本领域的其他研究人员查看。该技术相较于现有方法的主要优势在于，切片在保持原始方向的同时进行连续染色。

本实验操作将由本实验室的组织技术员 Linda Snyder、生物科学家 Emily Montgomery 和实验室技术员 Tiffany Hippo 进行示范。首先，按照石蜡切片的标准操作程序设置水浴锅和切片机。随后，使用病例编号、胰腺区域和玻片编号标记带正电荷的载玻片。

一切准备就绪后，将石蜡包埋块放入切片机夹具中，确保包埋盒标签位于左侧。按照常规切片操作，对包埋块进行切片，直至组织均匀暴露。当组织切面均匀后，连续切取约四微米厚的连续切片带。

根据初始染色所需的数量，需要准备三到六个切片。接下来，将条带上的切片分开。按顺序依次拾取每个切片，并将其放置在载玻片上。

用铅笔记录切片编号。若某一切片无法使用，请跳过该编号，并按正确顺序继续对后续切片进行编号。将切片置于载玻片上时，应保持其在包埋盒中的原始方向，且载玻片标签朝向左侧。

接下来，将切片放入切片架中，在室温下过夜晾干。在室温下，用一层薄薄的石蜡重新封固石蜡包埋块的表面，以保存组织，并将组织块在室温或-20摄氏度条件下存档。对下一个样本重复此操作步骤。

对于连续切片的编号，每个级别的编号顺序必须保持一致，例如上述的 H 和 E 染色。将每个组织块的第一张切片放入载玻片架中，然后将玻片架放入自动染色机的第一个染色槽中。选择标准的 HE 染色程序并启动染色过程。

染色完成后，将载玻片从自动染色机中取出，放入通风橱中进行盖片。采用标准技术为每张载玻片加盖盖玻片。最后，使用打印标签标记载玻片，并在通风橱中彻底干燥。

首先设置自动染色机并准备所有必要的试剂。选择用于双重染色的Daco程序。输入玻片数量及每张玻片将接受的处理方案。

根据制造商的建议将所有试剂加入自动染色机中。接着，配制本实验步骤所需的 TBST 和柠檬酸缓冲液、抗体及其他试剂。将切片放入二甲苯中孵育 5 分钟以脱蜡。

切勿让玻片干燥，否则会导致背景染色过强以及在脱蜡过程中出现孔隙染色。使用前将柠檬酸缓冲液倒入蒸锅中预热。随后，将脱蜡后的玻片依次进行系列乙醇洗涤。

用去离子水将玻片再冲洗一次。将玻片放入预热的柠檬酸盐缓冲液中，蒸汽处理30分钟。处理结束后，立即将玻片转移至室温水浴中，直至完全冷却。

冷却后，将切片转移至 Dayco 自动染色机的染色架上，注意保持正确的顺序。最后，运行先前加载的双重染色程序；程序完成后，将切片从自动染色机中取出，并在脱水前使其干燥至少一小时。

为了继续脱水，将切片转移至80%乙醇中处理一分钟。随后将切片浸入95%乙醇，再进入100%乙醇中继续脱水。最后，将切片浸入二甲苯中并保持一分钟。

立即使用细胞封片剂（cyto seal）加盖盖玻片封片，以完成该操作步骤。打印包含病例信息的标签，内容包括器官、组织块编号、染色类型及日期。在每张切片上粘贴标签，以便扫描染色切片。

将它们放置在扫描仪托盘上，并按照标准操作流程进行。将染色的切片在室温下存档，其余未染色的切片则在零下20摄氏度保存，以备后续使用。最后，根据所见的供体和组织类型对染色图像进行整理。

以下是低倍和高倍放大下 KI 67 与胰岛素染色的示例。染色后的胰腺组织切片图像被提交至在线病理学数据库，从而建立一个虚拟生物样本库。利用该数据库，研究人员可以快速获取开展研究及1型糖尿病相关工作所需的信息。

观看本视频后，您应充分了解如何制备和染色高质量的人类胰腺组织切片。