Marginating肝白细胞的选择性收获

该程序的总体目标是通过小鼠或大鼠肝脏的强制灌注选择性地收获边缘肝白细胞，即粘附在肝脏肝窦上的免疫细胞。该方法允许研究肝白细胞，与其他白细胞群相比，肝白细胞表现出独特的特征和不同的免疫功能。该技术的主要优点是它仅从肝窦产生白细胞，而不受其他肝区室（如实质细胞）的细胞污染。

演示该程序的是 Liat Sorski 和 Lee Shaashua，他们是我实验室的两位了不起的研究生。在开始肝脏灌注程序之前，通过蠕动泵管路和蝶形针冲洗肝素化 PBS 以去除任何气泡。然后，在呼吸停止后立即使用无菌剪刀和牙组织镊子做一个腹部中线切口，从安乐死大鼠的下腹部开始，直到剑突，注意不要损伤内脏器官。

接下来，用镊子提起胸骨，小心地切开两侧的横膈膜和肋骨。将止血钳夹在胸骨上，将胸腔向鼻子折叠，露出心肺复合体。然后，准备一根 21 号蝶针，连接到 10 毫升注射器，并将其插入心脏的右心室。

接下来，使用 10 毫升注射器收集尽可能多的血液。收集完所有血液后，使用止血钳将尾腔静脉夹在尽可能靠近心脏的位置。然后，将肠道从腹腔移到动物的左侧，以暴露门静脉。

接下来，准备一根连接到蠕动泵流出管的 25 号静脉导管，并将其尽可能尾部插入门静脉，同时保持对脾静脉的嘴部。然后，准备一根连接到 5 毫升注射器的 21 号蝶针，并将其插入止血钳的下腔静脉尾部。以大约每分钟 3 毫升的速度打开蠕动泵，并将第一毫升被血液污染的灌注液收集到注射器中。

当灌注液变成淡红色时，将 5 毫升收获注射器与 20 毫升收获注射器放在一起，不要停止泵。然后，以每分钟 7 毫升的速度收集至少 20 毫升的肝脏灌洗液。当整个肝脏呈浅棕色时，终止灌注。

然后，离心灌注液并吸出上清液。为了收集小鼠边缘肝白细胞，在呼吸停止后立即使用无菌剪刀和牙组织镊子在腹部中线切口直至剑突。接下来，用镊子提起胸骨，小心地切开两侧的横膈膜和肋骨。

止血钳夹在胸骨上，将胸腔向鼻子折叠，露出心肺复合体。将肠道从腹腔外移动到动物的左侧，露出门静脉。然后，将 30 号针头连接到蠕动泵，并将其插入脾静脉的门静脉喙部。

切开隔膜上方的下腔静脉，以便从胸腔引流和收集灌注液。然后，以大约每分钟 3 毫升的速度打开蠕动泵，并从胸腔池中收集第一毫升受血液污染的灌注液。收集 3 毫升后，关闭泵。

然后，将 21 号蝶针插入 10 毫升注射器后，以每分钟 4 毫升的速度重新启动灌注，直到从胸腔收集 10 毫升灌注液。当肝脏变成浅棕色时，终止灌注。接下来，将灌注液转移到 15 毫升试管中。

离心它。然后吸出上清液。虽然边缘肝 NK 细胞对同种异体靶细胞系表现出严重的细胞毒性，但整个肝细胞群和循环白细胞都显示出极低水平的细胞毒性，并且对同基因靶细胞系几乎没有杀伤性。

当机械加工的肝脏经过洗涤和密度梯度分离时，相同的相对较低的细胞毒性水平是显而易见的。特定白细胞群的事实分析揭示了免疫细胞群与循环细胞和肝细胞区室组成的巨大差异。一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在几分钟内完成。

在此程序之后，该细胞可用于流式细胞计数、PCR 或任何其他表征这一重要白细胞群的方法。该技术能够选择性收获边缘肝白细胞，以促进我们对生物学和临床意义的理解。具体来说，我们希望控制循环异常细胞和肝脏相关疾病。

看完这个视频，你应该对如何收集棉花肝白细胞有了很好的了解。