Applications of pHluorin for Quantitative, Kinetic and High-throughput Analysis of Endocytosis in Budding Yeast

Derek C. Prosser; Kristie Wrasman; Thaddeus K. Woodard; Allyson F. O&rsquo;Donnell; Beverly Wendland

doi:10.3791/54587

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Biology

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Applications of pHluorin for Quantitative, Kinetic and High-throughput Analysis of Endocytosis in Budding Yeast

pHluorin的申请在芽殖酵母细胞内吞的定量，动力学和高通量分析

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10:02 min

October 23, 2016

DOI: 10.3791/54587-v

Derek C. Prosser¹, Kristie Wrasman¹, Thaddeus K. Woodard¹, Allyson F. O’Donnell², Beverly Wendland¹

¹Department of Biology,The Johns Hopkins University, ²Department of Biological Sciences,Duquesne University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

囊泡运输事件的准确定量通常为特定蛋白质的作用和突变的影响提供关键见解。本文介绍了使用超黄道 pHluorin（一种 pH 敏感的 GFP 变体）作为使用定量荧光显微镜和流式细胞术定量活细胞中内吞事件的工具的方法。

该程序的总体目标是量化活细胞内吞途径中的囊泡运输事件。这种方法可以帮助回答囊泡运输领域的关键问题，例如蛋白质表达的突变或变化如何影响运输事件的速率和效率。该技术的主要优点是它允许通过测量荧光标记的货物蛋白的强度来直接定量内吞运输和活细胞。

根据文本方案制备溶液和培养基后，在 5 毫升 YNB 培养基中接种 2 至 3 个酵母细胞菌落，缺乏维持质粒选择的额外营养物质。在 30 摄氏度下振荡培养物 16 至 24 小时。成像前大约三小时，测量每个过夜培养物的 OD 600。

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