向上移动: 一个简单而灵活的体外三维入侵检测协议

这种侵袭测定的总体目标是在 3D 环境中量化稀有和敏感细胞的迁移和侵袭能力，而不会将细胞从其微环境中移出。该方法可以帮助回答癌症研究领域中有关敏感和 oray 事件（例如癌细胞融合产物）的侵袭能力的关键问题。该技术的主要优点是使用 3D 设置在其原始微环境中分析细胞。

该技术的意义延伸到癌症治疗，因为它可用于筛选能够抑制癌细胞侵袭和转移的药物。这种技术的视觉演示至关重要。在胶原蛋白混合物的温度和 pH 值中抽吸会影响其聚合，粗暴处理会导致凝胶分离。

首先用 1 毫升 1 摩尔盐酸处理具有 10 毫米玻璃底孔的 35 毫米培养皿，以降低玻璃的疏水性。15 分钟后，用每次洗涤 1 毫升 PBS 洗涤板 2 次，然后用 1 毫升 70% 乙醇洗涤 1 次。接下来，用 1 毫升对要使用的目标细胞具有特异性的培养基冲洗板。

并在平板上接种感兴趣的细胞。然后将板放入细胞培养箱中。当细胞达到 100% 汇合时，将 114.5 微升新鲜制备的大鼠尾胶原、16.6 微升 10 X DMEM 培养基和 33.1 微升补充有目标化疗引诱剂的培养基混合在冰上的微量离心管中。

用 14 微升碳酸氢钠中和胶原蛋白混合物，并用 80 微升凝胶覆盖细胞。让胶原蛋白在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳的加湿培养箱中聚合 30 分钟。然后将 2 mL 还原的 2% 血清细胞培养基铺在凝胶上，并小心地将细胞放回培养箱中适当的实验时间，而不会使胶原蛋白脱落。

孵育结束时，轻轻去除培养基，并用 1 毫升 PBS 小心冲洗凝胶。用 1 毫升 4% 多聚甲醛固定细胞 15 分钟，然后用 1 毫升 PBS 洗涤两次，每次洗涤。然后在室温下用 DAPI 溶液标记细胞 20 分钟，并通过共聚焦显微镜对体外三维胶原蛋白侵袭进行成像。

在这里，显示了在 48 小时迁移期内乳腺癌细胞系和乳腺癌细胞融合产物响应化疗引诱剂对胶原凝胶侵袭的定量。值得注意的是，还观察到罕见的乳腺癌细胞融合产物响应化疗引诱剂而迁移到胶原凝胶中。细胞在整个胶原凝胶实验中保持健康，凝胶聚合后 48 小时它们保持稳健的细胞数量和形态证明了这一点。

这种垂直胶原凝胶测定还允许通过对 Z 系列中的细胞迁移进行成像来分析侵袭时细胞迁移的动力学以及原位捕获的迁移细胞的形态。尝试此程序时，请务必记住使用与您的显微镜兼容的培养皿。按照此程序，可以引入其他变量，如改变胶原蛋白的强度或使用不同的化疗引诱剂，以分别回答有关 ECM 参与对细胞侵袭的影响或不同化疗引诱剂对细胞侵袭的影响的其他问题。

开发后，这项技术为生物学和癌症领域的研究人员筛选转移的药理学抑制剂以及探索体内所有炎症反应的伤口愈合铺平了道路。观看本视频后，您应该对如何在 3D 环境中评估稀有和敏感细胞的迁移和侵袭能力有一个很好的了解，而不会扭曲微受累的细胞。不要忘记，与人类癌细胞、盐酸、多聚甲醛和 DAPI 一起行走可能非常危险，并且在执行此程序时应始终采取预防措施，例如使用二号生物化粪池柜和烟雾储存装置。