Cell Membrane Repair Assay Using a Two-photon Laser Microscope

Joshua J. A. Lee; Rika Maruyama; Hidetoshi Sakurai; Toshifumi Yokota

doi:10.3791/56999

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Cell Membrane Repair Assay Using a Two-photon Laser Microscope

双光子激光显微镜在细胞膜修复中的应用

Full Text

13,550 Views

06:35 min

January 2, 2018

DOI: 10.3791/56999-v

Joshua J. A. Lee¹, Rika Maruyama¹, Hidetoshi Sakurai², Toshifumi Yokota¹

¹Department of Medical Genetics,University of Alberta Faculty of Medicine and Dentistry, ²Center for iPS Cell Research and Application,Kyoto University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

双光子激光的细胞膜损伤是一种广泛应用的评价膜加盖能力的方法, 可应用于多种细胞类型。在这里, 我们描述了一个协议的体外活成像膜加盖在 dysferlinopathy 患者细胞后双光子激光消融。

该程序的总体目标是量化肌营养不良患者细胞中的质膜可修复性。这种方法可以帮助回答肌营养不良症的关键问题，例如给定突变与膜再密封动力学之间的关系是什么。该技术的主要优点是它允许实时定量活细胞中的膜重密封动力学。

首先在 37 摄氏度的二氧化碳培养箱中，在含有 40 毫升生长培养基的 T225 培养瓶中培养成纤维细胞。当培养物达到 70% 至 80% 汇合度时，用每次洗涤 40 毫升 PBS 冲洗细胞两次，然后在 37 摄氏度下加入 5 毫升 0.05% 胰蛋白酶 5 分钟。当细胞分离后，用 40 毫升新鲜生长培养基终止反应，并以每毫升 100， 000 个细胞的浓度将 2 毫升细胞接种到 35 毫米胶原蛋白涂层玻璃底板中，在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育过夜。

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos