Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Melaku Garsamo; Yun Zhou; Xing Liu

doi:10.3791/59038

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

利用体外荧光共振能量转移研究毫秒时间尺度蛋白质配合物的动力学

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10:50 min

March 14, 2019

DOI: 10.3791/59038-v

Melaku Garsamo^1,3, Yun Zhou^2,3, Xing Liu^1,3

¹Department of Biochemistry,Purdue University, ²Department of Botany and Plant Pathology,Purdue University, ³Center for Plant Biology,Purdue University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

蛋白质-蛋白质相互作用对生物系统至关重要, 对结合动力学的研究为蛋白质复合物的动力学和功能提供了见解。我们描述了一种利用荧光共振能量转移和停止流动技术量化蛋白质复合物动力学参数的方法。

我们的方法有助于研究蛋白质复合物的形成动力学。它描述了蛋白质复合物有多紧，以及蛋白质复合物是否受到其他蛋白质的干扰。该技术能够以荧光为报告，以定量方式研究蛋白质-蛋白质相互作用，我们的测定可以实时监测蛋白质复合物的关联与分离。

首先，从蛋白质数据库中的 COL1 CAND1 复合物数据开始设计 FRET 检测。加载 PyMOL 中的结构，然后转到向导菜单并使用测量功能估计 CAND1 的第一个氨基酸与 COL1 的第一个氨基酸之间的距离。然后，加载在线光谱查看器，并同时查看7-氨基-4-甲基二甲酸酯和FlASH的激发和发射光谱。

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