新生小鼠骨髓分离和骨髓来源巨噬细胞的制备
May 24th, 2024
该方案描述了一种非酶和直接的方法，用于分离 7-9 日龄的新生小鼠骨髓细胞，并使用 L929 细胞的上清液作为粒细胞集落刺激因子 （M-CSF） 的来源来产生分化的巨噬细胞。进一步分析骨髓来源的巨噬细胞表面抗原 F4/80 、 CD206 、 CD11b 和功能能力。
本研究的范围是了解早期生命对细菌感染的免疫反应的一些局限性。为了实现这一目标，我们需要开发和使用特定于新生儿的研究模型。从 7 日龄幼犬中分离骨髓具有挑战性且尚未得到充分证实。
与其他 BMDM 相比，新生儿骨髓来源的巨噬细胞敏感且容易受到压力。该协议中使用的技术简单且可重复。该方法指导用户在不使用任何酶的情况下从 7 至 9 日龄的新生小鼠中分离骨髓。
本研究提供了一种从新生小鼠生成骨髓来源的巨噬细胞的标准化策略，可用于解决有关新生儿免疫学的问题。这种可重复的方法为在许多专业领域推进新生儿免疫研究提供了一种针对特定年龄的模型。
概述
本协议概述了一种分离新生小鼠骨髓细胞并产生分化巨噬细胞的非酶法。该研究重点关注处理7-9日龄新生小鼠的挑战，以及它们的骨髓源巨噬细胞的敏感性。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 免疫学
- 细胞生物学
背景
- 了解早期生活对细菌感染的免疫反应。
- 从新生小鼠分离骨髓的挑战。
- 新生小鼠骨髓源巨噬细胞敏感且容易受到压力。
- 新生儿研究中对可重复技术的需求。
研究目的
- 开发一种从新生小鼠中分离骨髓的可靠方法。
- 为免疫反应研究产生功能性巨噬细胞。
- 加深对新生儿免疫反应的理解。
使用的方法
- 从7-9日龄新生小鼠中分离骨髓。
- 用于细胞分离的非酶技术。
- 使用L929细胞上清液作为M-CSF的来源。
- 分析巨噬细胞的表面抗原和功能能力。
主要结果
- 成功分离新生骨髓源巨噬细胞。
- 使用表面抗原F4/80、CD206和CD11b对巨噬细胞进行表征。
- 证明了所生成巨噬细胞的功能能力。
- 验证该方法简单且可重复。
结论
- 该协议提供了一种研究新生儿免疫反应的可靠方法。
- 分离的巨噬细胞可用于进一步的免疫学研究。
- 该技术可能促进新生儿健康研究的进展。
常见问题
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
