Assessment of DNA Double Strand Break Repair Activity Using High-throughput and Quantitative Luminescence-Based Reporter Assays

Diego Grande; Eeson Rajendra; Bethany Mason; Alessandro Galbiati; Simon J. Boulton; Graeme C. M. Smith; Helen M. R. Robinson

doi:10.3791/66969

JoVE Journal
Cancer Research

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JoVE Journal Cancer Research

Assessment of DNA Double Strand Break Repair Activity Using High-throughput and Quantitative Luminescence-Based Reporter Assays

使用基于高通量和定量发光的报告基因分析评估 DNA 双链断裂修复活性

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June 14, 2024

DOI: 10.3791/66969-v

Diego Grande*¹, Eeson Rajendra*¹, Bethany Mason¹, Alessandro Galbiati¹, Simon J. Boulton^1,2, Graeme C. M. Smith¹, Helen M. R. Robinson¹

¹Artios Pharma Ltd, Cambridge, ²The Francis Crick Institute, London

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

我们提出了使用一套基于发光的染色体外报告基因底物评估细胞中双链断裂修复途径熟练程度的方案。

Artios 正在开发针对 DNA 损伤反应的新型抗癌药物。为了实现这一点，我们开发了一系列新的检测方法来测量细胞 DNA 修复活性。这些检测对我们的项目产生了重大影响，导致临床阶段的资产在医疗需求高度未满足的患者中进行测试。

准确测量靶向细胞活性对于推进新型靶向治疗至关重要。无论是需要高通量、稳定的信噪比、快速周转，还是理想情况下需要到不同生物系统的便携性，生成具有所需特性的 DNA 修复因子分析一直是一项挑战。我们开发了一套稳健、定量和可滴定的基于发光的报告基因分析，用于测量四种主要双链断裂修复途径、同源重组、非同源末端连接、微同源介导的末端连接和单链退火的熟练程度。

这些报告基因检测经验证为读出通路依赖性修复，对药理学调节敏感，并且周转时间短。我们开发的修复底物是染色体外的，因此它们可以瞬时转染到目标模型中，并轻松放大到高通量形式中。我们相信我们的检测系统在实现 DDR 药物发现方面发挥着重要作用，而且在更广泛地促进我们对 DDR 生物学的理解方面也发挥着重要作用。

在这方面，我们希望这些方法有助于加速新药物靶点的识别和起诉，从而为医疗需求未得到满足的癌症等疾病提供药物。