通过粪便定量聚合酶链反应分析检测 幽门螺杆菌 感染和抗生素耐药性

这项研究展示了一种基于 qPCR 的粪便测试，可以检测幽门螺杆菌感染和抗生素耐药性，从而实现个性化治疗并提高人群水平的幽门螺杆菌根除率。

粪便样本与定量 PCR 相结合，无需细菌培养即可延迟检测幽门螺杆菌感染和抗生素耐药性，将诊断时间从三周缩短到一天。

[旁白]首先，倒置标本保存管并充分混合。然后将一毫升粪便标本溶液转移到微量离心管中。倒置混合离心管。将试管放入设置为 80 摄氏度的金属浴中 10 分钟，并在第 5 分钟间歇混合 30 秒。将试管冷却至室温后，以 10,000 G 离心五分钟。收集上清液进行进一步处理。取一个含有裂解缓冲液的96孔板，将其倒置数次以重悬磁珠。小心地取下铝箔密封件，不要摇晃板，以防止溢出。将 200 微升制备的样品添加到 96 孔板的每个孔中，确保每个孔对应于单个样品。将96孔板放入核酸提取仪指定样品室中进行自动提取。将剩余的标本和提取的核酸样品储存在零下20摄氏度，以便长期保存和将来使用。离心装有冻干试剂的试管，以确保冻干粉末沉淀在试管底部。小心打开试剂管的盖子，以免粉末溢出。从待测样品中加入25微升提取的核酸。每个孔的阳性对照和阴性对照。紧紧关闭管子。涡旋 qPCR 试剂 8 到 10 秒。然后将它们短暂离心三到五秒，以避免气泡形成。将 96 孔 qPCR 板放入 qPCR 机器中。如屏幕上所示设置骑行程序。然后设置荧光检测参数，如图所示。保存数据后，使用 qPCR 专用软件进行分析，因为仪器会自动选择基线阈值。设定所有诊断标准，包括存在幽门螺杆菌感染或对小于或等于 30 的 CT 值的耐药性。确认它们表现出特征性的 S 形曲线。阴性和阳性对照的质量qPCR对照结果如图所示。结果证实阴性对照没有扩增，阳性对照中所有检测通道的扩增曲线清晰，验证了测定的可靠性。该图像描绘了通过qPCR分析的五个粪便样本的扩增曲线，以检测幽门螺杆菌感染及其使用颜色编码的荧光探针对克拉霉素和喹诺酮类药物的耐药性。样品S1在任何检测通道中均无明显扩增，证实不存在幽门螺杆菌感染。样品 S2 仅在 ROX 通道中显示扩增，表明存在无抗生素耐药性的幽门螺杆菌。样品S3在ROX和HEX通道中显示扩增，但在FAM中没有扩增，表明喹诺酮类药物耐药。样品S4在ROX和FAM通道中显示扩增，但在HEX中没有扩增，表明克拉霉素耐药。样品S5在所有三个通道中均显示扩增，表明对克拉霉素和喹诺酮类药物具有双重耐药性。