Name: 体内研究基于 TurboID 的邻近标记在黑腹果蝇中的应用 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: 了解基于TurboID的邻近标记技术，用于研究黑腹果蝇生殖细胞中zucchini蛋白的相互作用。该方法通过优化生物素标记和质谱分析，鉴定出参与蛋白质折叠、膜组织和转运的新型互作蛋白。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

感谢实验室成员的讨论与帮助。本工作由韩国政府（MSIT）资助的国家研究基金会（NRF）支持（M.L. 项目编号 RS-2024-00345327；M.L. 项目编号 RS-2023-00219563）。

<ol><li>Kim, D. I., Roux, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filling+the+void%3A+Proximity-based+labeling+of+proteins+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Filling the void: Proximity-based labeling of proteins in living cells.</a> Trend Cell Biol. 26 (11), 804-817 (2016).</li>
<li>Mair, A., Xu, S. L., Branon, T. C., Ting, A. Y., Bergmann, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity+labeling+of+protein+complexes+and+cell-type-specific+organellar+proteomes+in+Arabidopsis+enabled+by+turboid%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Proximity labeling of protein complexes and cell-type-specific organellar proteomes in Arabidopsis enabled by turboid.</a> eLife. 8, e47864(2019).</li>
<li>Qi, Y., Katagiri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+low-abundance+Arabidopsis+plasma-membrane+protein+complexes+and+identification+of+candidate+components%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Purification of low-abundance Arabidopsis plasma-membrane protein complexes and identification of candidate components.</a> Plant J. 57 (5), 932-944 (2009).</li>
<li>Branon, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+proximity+labeling+in+living+cells+and+organisms+with+turboid%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient proximity labeling in living cells and organisms with turboid.</a> Nat Biotechnol. 36 (9), 880-887 (2018).</li>
<li>Rhee, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+mapping+of+mitochondria+in+living+cells+via+spatially+restricted+enzymatic+tagging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Proteomic mapping of mitochondria in living cells via spatially restricted enzymatic tagging.</a> Science. 339 (6125), 1328-1331 (2013).</li>
<li>Roux, K. J., Kim, D. I., Raida, M., Burke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+promiscuous+biotin+ligase+fusion+protein+identifies+proximal+and+interacting+proteins+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A promiscuous biotin ligase fusion protein identifies proximal and interacting proteins in mammalian cells.</a> J Cell Biol. 196 (6), 801-810 (2012).</li>
<li>Quantitative Proteomics. , 
 <a target="_blank" href="https://case.edu/medicine/nutrition/centers-and-collaborations/case-center-proteomics-and-bioinformatics/proteomics-and-small-molecule-mass-spectrometry-core/quantitative-proteomics">https://case.edu/medicine/nutrition/centers-and-collaborations/case-center-proteomics-and-bioinformatics/proteomics-and-small-molecule-mass-spectrometry-core/quantitative-proteomics</a> (2025).</li>
<li>Udeshi, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+to+biotin+enable+large-scale+detection+of+biotinylation+sites+on+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Antibodies to biotin enable large-scale detection of biotinylation sites on proteins.</a> Nat Meth. 14 (12), 1167-1170 (2017).</li>
<li>Ummethum, H., Hamperl, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity+labeling+techniques+to+study+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Proximity labeling techniques to study chromatin.</a> Front Genet. 11, 450(2020).</li>
<li>Han, S., Li, J., Ting, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity+labeling%3A+Spatially+resolved+proteomic+mapping+for+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Proximity labeling: Spatially resolved proteomic mapping for neurobiology.</a> Curr Opin Neurobiol. 50, 17-23 (2018).</li>
<li>Nishimasu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+zucchini+endoribonuclease+in+pirna+biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure and function of zucchini endoribonuclease in pirna biogenesis.</a> Nature. 491 (7423), 284-287 (2012).</li>
<li>Zamudio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+methylation+restrains+transposons+from+adopting+a+chromatin+signature+permissive+for+meiotic+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">DNA methylation restrains transposons from adopting a chromatin signature permissive for meiotic recombination.</a> Genes Dev. 29 (12), 1256-1270 (2015).</li>
<li>Cha, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+modulation+of+gsto+activity+rescues+fus-associated+neurotoxicity+via+deglutathionylation+in+als+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Therapeutic modulation of gsto activity rescues fus-associated neurotoxicity via deglutathionylation in als disease models.</a> Dev Cell. 57 (6), 783-798.e8 (2022).</li>
<li>Pulver, S. R., Berni, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fundamentals+of+flying%3A+Simple+and+inexpensive+strategies+for+employing+Drosophila+genetics+in+neuroscience+teaching+laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22J+Undergrad+Neurosci+Educ%22%5BJournal%5D)">The fundamentals of flying: Simple and inexpensive strategies for employing Drosophila genetics in neuroscience teaching laboratories.</a> J Undergrad Neurosci Educ. 11 (1), A139-A148 (2012).</li>
<li>Feizy, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+identification+of+Drosophila+rhodopsin+interaction+partners+by+biotin+proximity+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo identification of Drosophila rhodopsin interaction partners by biotin proximity labeling.</a> Sci Rep. 14 (1), 1986(1986).</li>
<li>Zhang, B., Zhang, Y., Liu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+effective+proximate+labeling+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">Highly effective proximate labeling in Drosophila.</a> G3. 11 (5), jkab077(2021).</li>
<li>Hudson, A. M., Cooley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+oogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for studying oogenesis.</a> Methods. 68 (1), 207-217 (2014).</li>
<li>Waring, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+of+the+eggshells+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis of the eggshells in Drosophila.</a> Int Rev Cytol. 198, 67-108 (2000).</li>
<li>Weil, T. T., Parton, R. M., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparing+individual+drosophila+egg+chambers+for+live+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparing individual drosophila egg chambers for live imaging.</a> J Vis Exp. (60), e3679(2012).</li>
<li>Nguyen, T. T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+profiling+of+the+zucchini+proximal+proteome+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">In vivo profiling of the zucchini proximal proteome in the Drosophila ovary.</a> Development. 150 (4), dev201220(2023).</li>
<li>Ahmadi, S., Winter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+poly%28ethylene+glycol%29+and+poly%28ethylene+glycol%29-based+detergents+using+peptide+search+engines%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Identification of poly(ethylene glycol) and poly(ethylene glycol)-based detergents using peptide search engines.</a> Anal Chem. 90 (11), 6594-6600 (2018).</li>
<li>Zada, A., Khan, I., Zhang, M., Cheng, Y., Hu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airid-based+proximity+labeling+for+protein-protein+interaction+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Airid-based proximity labeling for protein-protein interaction in plants.</a> J Vis Exp. (187), e64428(2022).</li>
<li>Fang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lowering+sample+requirements+to+study+tyrosine+kinase+signaling+using+phosphoproteomics+with+the+tmt+calibrator+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Lowering sample requirements to study tyrosine kinase signaling using phosphoproteomics with the tmt calibrator approach.</a> Proteomics. 20 (24), 2000116(2020).</li>
<li>Park, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-stage+tip+method+for+tmt-based+proteomic+analysis+of+a+minimal+amount+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">One-stage tip method for tmt-based proteomic analysis of a minimal amount of cells.</a> ACS Omega. 8 (22), 19741-19751 (2023).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turboid-based+proximity+labeling+for+in+planta+identification+of+protein-protein+interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Turboid-based proximity labeling for in planta identification of protein-protein interaction networks.</a> J Vis Exp. (159), e60728(2020).</li>
<li>Trinkle-Mulcahy, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+proximity-based+labeling+methods+for+interactome+mapping%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Res%22%5BJournal%5D)">Recent advances in proximity-based labeling methods for interactome mapping.</a> F1000Res. 8, Faculty Rev-135 F1000(2019).</li>
<li>Wei, X. F., Li, S., Hu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+turboid-based+proximity+labelling+approach+for+identifying+the+DNA-binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A turboid-based proximity labelling approach for identifying the DNA-binding proteins.</a> STAR Protoc. 4 (1), 102139(2023).</li>
<li>Bosch, J. A., Chen, C. L., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity-dependent+labeling+methods+for+proteomic+profiling+in+living+cells%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Proximity-dependent labeling methods for proteomic profiling in living cells: An update.</a> WIREs Dev Biol. 10 (1), e392(2021).</li>
<li>Rayaprolu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+type-specific+biotin+labeling+in+vivo+resolves+regional+neuronal+and+astrocyte+proteomic+differences+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cell type-specific biotin labeling in vivo resolves regional neuronal and astrocyte proteomic differences in mouse brain.</a> Nat Commun. 13, 2927(2022).</li>
<li>Uckun, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+profiling+of+the+alk+proximitome+in+the+developing+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo profiling of the alk proximitome in the developing Drosophila brain.</a> J Mol Biol. 433 (23), 167282(2021).</li>
<li>Xiong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+proteomic+mapping+through+gfp-directed+proximity-dependent+biotin+labelling+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">In vivo proteomic mapping through gfp-directed proximity-dependent biotin labelling in zebrafish.</a> Elife. 10, e64631(2021).</li>
<li>Holzer, E., Rumpf-Kienzl, C., Falk, S., Dammermann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+turboid+approach+identifies+tissue-specific+centriolar+components+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">A modified turboid approach identifies tissue-specific centriolar components in C. elegans.</a> PLoS Genet. 18 (4), e1010150(2022).</li>
<li>Artan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactome+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+synapses+by+turboid-based+proximity+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interactome analysis of Caenorhabditis elegans synapses by turboid-based proximity labeling.</a> J Biol Chem. 297 (3), 101094(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turboid-based+proximity+labeling+reveals+that+ubr7+is+a+regulator+of+n+nlr+immune+receptor-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Turboid-based proximity labeling reveals that ubr7 is a regulator of n nlr immune receptor-mediated immunity.</a> Nat Comm. 10 (1), 3252(2019).</li>
<li>Baumgartner, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+zad+zinc+finger+protein+kipferl+guides+rhino+to+pirna+clusters%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">The Drosophila zad zinc finger protein kipferl guides rhino to pirna clusters.</a> eLife. 11, e80067(2022).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

本文提供了一种在黑腹果蝇（Drosophila）卵巢中进行基于TurboID的邻近标记（PL）的完整实验流程，该流程经过大量排查优化，以克服多种技术挑战。其中一个关键问题涉及遗传构建体的设计，不同的融合结构显著影响了蛋白表达水平和生物素化效率。例如，NES-V5-TurboID的表达水平和生物素化效果弱于其他转基因形式，有时会干扰下游实验结果的解读。然而，将核输出信号（NES）融合至TurboID的C末端所构建的改良型载体（V5-TurboID-NES）表现出更强的表达水平和更高的生物素化效率。这些结果强调了在研究早期优化目的基因（GOI）排列方式以实现有效细胞表达的重要性。可利用现有的生物信息学工具预测目标蛋白与TurboID之间的结构兼容性；或者，建议构建并比较多种转基因构型（如N末端与C末端融合）。另一个重要挑战是质谱（MS）结果中持续出现聚乙二醇（PEG）峰污染，这类污染通常来源于塑料离心管和去垢剂21。一旦引入，PEG污染可能干扰肽段离子化过程，增加质谱数据分析难度，并可能长期损害质谱仪器。在我们的实验中，使用有机溶剂洗脱肽段似乎会增加磁珠释放的类PEG物质污染...

传统的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）作图方法，如亲和纯化-质谱法（AP-MS）和酵母双杂交（Y2H）系统，通常难以捕获低丰度、瞬时表达或膜结合的蛋白质。这一局限性源于这些方法无法模拟活细胞内的天然生理环境1,2,3。为克服这些挑战，邻近标记（PL）技术应运而生，成为一种可在活体中实现亚细胞器水平高分辨率蛋白质组作图的有力手段。in vivo条件下，PL利用诱饵蛋白与一种广谱性酶的融合，使该酶能够催化生成短寿命的活性分子1。这些活性分子（如生物素）可在数纳米范围内共价标记融合蛋白附近的蛋白质4。随后，通过质谱分析分离得到的生物素标记蛋白，从而实现大规模的蛋白质鉴定5,6。
近年来，已开发出多种广谱酶以推动PL技术的发展。其中两种广泛使用的酶是 大肠杆菌衍生的R118G突变型生物素连接酶（BioID）和豌豆来源的抗坏血酸过氧化物酶2（APEX2）。BioID将生物素和ATP转化为生物素化-5'-腺苷酸（bioAMP）1。这种活性分子可在±10 nm半径范围内共价结合邻近蛋白质的赖氨酸残基。基于BioID的邻近标记（PL）的一个关键优势在于使用生物素。生物素是生物体内天然存在且无毒的生物分子，因此可安全使用 体内 标记6然而，BioID 存在一些局限性，包括标记动力学较慢（18–24 小时）以及需要较高温度（37 °C）才能实现最佳催化活性4这些特性可能阻碍其在研究动态生物过程中的应用。与此同时，APEX2 在生物素-苯酚和过氧化氢（H₂O₂）存在的情况下可催化生成生物素-苯氧自由基。2O2)7这些自由基主要与富含电子的氨基酸（如酪氨酸）的侧链发生反应，也可与半胱氨酸、组氨酸和色氨酸结合。8. 辣根过氧化物酶的快速标记能力（&#60; 1 分钟）适用于捕获动态且瞬时的蛋白质相互作用（PPIs）9此外，其检测范围（可达20 nm）比生物素连接酶更广。然而，基于APEX2的邻近标记技术也存在缺点，包括需要使用有毒的氧化剂H2O2, 以及生物素-苯酚的低渗透性，这些限制了其适用性 体内10.
2018年，Branon等人开发了一种名为TurboID的新型生物素连接酶，它是大肠杆菌（E. coli）中天然生物素连接酶BirA的一个35 kD突变体版本4。该酶在R118位点（R118S）发生突变，并相对于BirA还含有另外15个突变。其催化活性比BioID高出两倍。TurboID在10分钟内诱导的生物素标记所产生的蛋白质组数据，在规模和特异性方面均可与BioID标记18小时的结果相媲美。此外，它在30 °C时表现出优异的标记活性4。因此，TurboID更适用于如果蝇（Drosophila）或秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）等模式生物，这些生物通常分别在25 °C和20 °C下培养。
本研究旨在利用基于 TurboID 的邻近标记（PL）技术对果蝇（Drosophila）卵巢中的相互作用组进行研究。本文所述方案用于绘制生殖细胞中 Zuc 蛋白的相互作用组。Zuc 是一种定位于线粒体外膜（OMM）的核酸内切酶，参与 piRNA 的生成，而 piRNA 是一类对维持基因组完整性至关重要的小非编码 RNA11,12,13。通过比较 Zuc-TurboID 分析中鉴定出的生物素标记蛋白与另外两个对照（NES-TurboID 和 Tom20-TurboID）的结果，我们确定了特异性的 Zuc 相互作用候选蛋白。

<table><tbody><tr><td>&lt;强&gt;抗体&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG（H+L）二抗</td><td>Invitrogen</td><td>31430</td><td>分析纯，避光</td></tr><tr><td>山羊抗兔IgG（H+L）高交叉吸附二抗，Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>A32731</td><td>分析纯，避光</td></tr><tr><td>辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG（H+L）二抗</td><td>Invitrogen</td><td>31460</td><td>分析纯，避光</td></tr><tr><td>HSP90 抗体（兔）</td><td>细胞信号技术公司</td><td>4874</td><td>多克隆抗体</td></tr><tr><td>Pierce 链霉亲和素蛋白，HRP</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>21126</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>链霉亲和素，Alexa Fluor 594 标记物</td><td>Invitrogen</td><td>S11227</td><td>对光敏感，分析纯</td></tr><tr><td>V5标签抗体（小鼠）</td><td>Invitrogen</td><td>R960-25</td><td>单克隆抗体</td></tr><tr><td>V5标签抗体（兔）（D3H8Q）</td><td>细胞信号技术公司</td><td>13202</td><td>单克隆抗体</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;果蝇品系&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;货号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;评论/描述&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>pUASp Tom20 V5-TurboID/TM3</td><td>韩国果蝇品系中心</td><td>2373-2</td><td>果蝇品系</td></tr><tr><td>pUASp Zucchini V5-TurboID/Cyo</td><td>韩国果蝇品系保藏中心</td><td>2188</td><td>果蝇品系</td></tr><tr><td>pUASP_attB_V5-TurboID-NES/Cyo</td><td>韩国果蝇品系中心</td><td>2635-4</td><td>果蝇品系</td></tr><tr><td>w[*]; P{w[+mC]=matalpha4-GAL-VP16}V2H</td><td>布卢明顿果蝇品系中心</td><td>7062</td><td>果蝇品系</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;设备与耗材&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;货号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;评论/描述&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>分析天平</td><td>Mettler Toledo</td><td>ME204</td><td>0.1 mg 可读性</td></tr><tr><td>Amersham Protran 0.45 NC 硝酸纤维素 Western 印迹膜（300 mm） &amp;times; 4 m</td><td>Cytiva</td><td>10600002</td><td>-</td></tr><tr><td>Axygen 1.7 mL MaxyClear Snaplock 微量离心管</td><td>康宁</td><td>MCT-175-C</td><td>共聚物</td></tr><tr><td>BRAND&amp;nbsp;盖玻片（22 mm × 22 mm）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BR470055</td><td>硼硅酸盐玻璃</td></tr><tr><td>批量移液器吸头（10 &amp;micro;L</td><td>顶点</td><td>4110N00</td><td>丙烯</td></tr><tr><td>批量移液器吸头（1000 &amp;micro;L</td><td>顶点</td><td>4330N00</td><td>丙烯</td></tr><tr><td>批量移液器吸头（200 &amp;micro;L</td><td>顶点</td><td>4230N00</td><td>丙烯</td></tr><tr><td>细胞培养板（96孔）</td><td>SPL</td><td>300096</td><td>聚苯乙烯，平底型</td></tr><tr><td>离心机（配有适用于1.5-2 mL离心管的转子）</td><td>Eppendorf</td><td>5424 R</td><td>固定角度，带制冷功能</td></tr><tr><td>离心机（配备可容纳 5 mL 管的转子）</td><td>Eppendorf</td><td>5425 R</td><td>固定角度，带制冷功能</td></tr><tr><td>化学勺</td><td>-</td><td>-</td><td>不锈钢</td></tr><tr><td>ChemiDoc 成像系统</td><td>伯乐（Bio-Rad）</td><td>12003153</td><td>Western blot 成像系统</td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 果蝇培养垫</td><td>-</td><td>-</td><td>麻醉板</td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 储液罐 &amp;和调节剂</td><td>-</td><td>-</td><td>高压气体警示 &amp;和头晕</td></tr><tr><td>小型培养箱</td><td>JSR</td><td>JSGI-10T</td><td>注意高温</td></tr><tr><td>共聚焦激光扫描显微镜</td><td>蔡司</td><td>LSM 710</td><td>强激光束警示</td></tr><tr><td>锥形管（15 mL）</td><td>SPL</td><td>50015</td><td>聚丙烯/高密度聚乙烯&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>锥形管（50 mL）</td><td>SPL</td><td>50050</td><td>聚丙烯/高密度聚乙烯&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>电子天平</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>数字计时器</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>解剖皿</td><td>-</td><td>-</td><td>硅</td></tr><tr><td>Dumont #5SF 镊子&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td>超细尖端，注意锐器安全</td></tr><tr><td>DynaMag-2 磁力架</td><td>Invitrogen</td><td>12321D</td><td>适用于1.5–2 mL规格的微量离心管</td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;nbsp;Superfrost Plus 显微镜载玻片（25 mm × 75 mm）</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td>注意尖锐物品</td></tr><tr><td>果蝇培养瓶（带纸塞）</td><td>Hansol Tech</td><td>FFB-21010</td><td>-</td></tr><tr><td>果蝇培养管（带棉塞）</td><td>Hansol Tech</td><td>FFV-11010</td><td>-</td></tr><tr><td>聚焦超声波破碎仪</td><td>Covaris</td><td>M220</td><td>超声波使用注意事项</td></tr><tr><td>凝胶切割刀</td><td>Invitrogen</td><td>EI9010</td><td>不锈钢配塑料手柄</td></tr><tr><td>3MM 级别的印迹纸（46 厘米） &amp;times; 57 厘米</td><td>Cytiva</td><td>3030-917</td><td>沃特曼滤纸</td></tr><tr><td>手持式匀浆器和塑料研杵</td><td>Kimble</td><td>749540-0000</td><td>无线电机</td></tr><tr><td>加热块</td><td>精细PCR</td><td>ALB6400</td><td>注意高温</td></tr><tr><td>无绒布</td><td>Yuhan-Kimberly</td><td>41112</td><td>-</td></tr><tr><td>液氮</td><td>-</td><td>-</td><td>注意冻伤与烧伤风险</td></tr><tr><td>微孔板分光光度计</td><td>安捷伦科技</td><td>时期</td><td>基于单色仪的光学系统</td></tr><tr><td>微波</td><td>-</td><td>-</td><td>注意高温</td></tr><tr><td>milliTUBE 1 mL AFA 纤维</td><td>Covaris</td><td>PN 520135</td><td>玻璃</td></tr><tr><td>迷你凝胶电泳槽</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>A25977</td><td>注意高温</td></tr><tr><td>NuPAGE Bis-tris 小型蛋白凝胶，4&amp;ndash;12%, 1.0&amp;ndash;1.5 mm，10孔</td><td>Invitrogen</td><td>NP0323BOX</td><td>含聚丙烯酰胺，注意毒性</td></tr><tr><td>NuPAGE Bis-tris 小型蛋白凝胶，4&amp;ndash;12%, 1.0&amp;ndash;1.5 mm，15孔</td><td>Invitrogen</td><td>NP0321BOX</td><td>含有聚丙烯酰胺，注意毒性</td></tr><tr><td>画笔（&amp;Oslash; 1.8 mm</td><td>Hwa hong</td><td>791240</td><td>-</td></tr><tr><td>Pipetman L (P1000L)</td><td>Gilson</td><td>FA10006M</td><td>带金属弹射器的单通道微量移液器</td></tr><tr><td>Pipetman L (P200L)</td><td>Gilson</td><td>FA10005M</td><td>带金属弹射器的单通道微量移液器</td></tr><tr><td>Pipetman L (P20L)</td><td>Gilson</td><td>FA10003M</td><td>带金属弹射器的单通道微量移液器</td></tr><tr><td>Pipetman L（P2L）</td><td>Gilson</td><td>FA10001M</td><td>带金属弹射器的单通道微量移液器</td></tr><tr><td>电源供应</td><td>主要科学领域</td><td>MP-310</td><td>注意高压电</td></tr><tr><td>可编程旋转仪</td><td>Biosan</td><td>RS-24</td><td>-</td></tr><tr><td>蛋白质防吸附管&amp;nbsp;管</td><td>Eppendorf</td><td>30108302</td><td>-</td></tr><tr><td>剃刀刀片</td><td>Dorco</td><td>304020</td><td>不锈钢，小心锐器</td></tr><tr><td>滚轴</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>10 mL 血清移液管</td><td>SPL</td><td>91010</td><td>聚苯乙烯</td></tr><tr><td>血清移液管（25 mL）</td><td>SPL</td><td>91025</td><td>聚苯乙烯</td></tr><tr><td>5 mL 血清移液管</td><td>SPL</td><td>91005</td><td>聚苯乙烯</td></tr><tr><td>血清移液管（50 mL）</td><td>SPL</td><td>91050</td><td>聚苯乙烯</td></tr><tr><td>低吸附带盖微量离心管（1.5 mL）</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>3451PK</td><td>聚丙烯</td></tr><tr><td>海绵垫</td><td>Invitrogen</td><td>EI9052</td><td>-</td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>蔡司</td><td>Stemi 508</td><td>-</td></tr><tr><td>体视显微镜&amp;nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ThermoMixer&amp;nbsp;C</td><td>Eppendorf</td><td>5382000015</td><td>1.5 &amp;和5 mL大小的块状物</td></tr><tr><td>镊子</td><td>Aven Tools</td><td>18526</td><td>塑料平头尖端</td></tr><tr><td>涡旋混合器</td><td>科学工业公司</td><td>SI-0236</td><td>-</td></tr><tr><td>XCell II 转膜模块</td><td>Invitrogen</td><td>EI9051</td><td>注意高温</td></tr><tr><td>XCell&amp;nbsp;SureLock mini-cell</td><td>Invitrogen</td><td>EI0001</td><td>注意高温危险</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;化学品&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;货号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;强&gt;评论/描述&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>丙酮</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>650501</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>乙腈</td><td>Supelco</td><td>1.00029.1000</td><td>LC-MS级，注意吸入毒性和易燃性</td></tr><tr><td>白蛋白标准安瓿瓶（含牛血清白蛋白（BSA）2 mg/mL，溶于0.9%生理盐水并添加0.05%叠氮化钠）</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>23209</td><td>Pierce BCA 蛋白检测试剂盒（Thermo Scientific，23225）的一部分</td></tr><tr><td>牛血清白蛋白</td><td>Bioshop</td><td>ALB001</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>碳酸氢铵</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>09830</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>生物素&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4639</td><td>细胞 &amp;以及组织培养级</td></tr><tr><td>氯化钙（CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td>细胞培养级</td></tr><tr><td>Clarity Western ECL 底物</td><td>伯乐（Bio-Rad）</td><td>1705060</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MBD0015</td><td>对光敏感，分析纯</td></tr><tr><td>二硫苏糖醇（DTT）</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>R0861</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>康宁</td><td>35-015-CV</td><td>细胞培养级</td></tr><tr><td>甲酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0507</td><td>试剂级，注意吸入毒性</td></tr><tr><td>Grace昆虫培养基</td><td>Gibco</td><td>11595030</td><td>细胞培养级</td></tr><tr><td>即食干酵母</td><td>无品牌</td><td>N1019</td><td>-</td></tr><tr><td>碘乙酰胺</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I1149</td><td>对光敏感，分析纯</td></tr><tr><td>甲醇</td><td>Carlo Erba</td><td>41484</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>指甲油</td><td>-</td><td>-</td><td>Clear-type</td></tr><tr><td>Novex Tris-甘氨酸 SDS 样品缓冲液（2X）</td><td>Invitrogen</td><td>LC2676</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>NuPAGE MOPS SDS 电泳缓冲液（20X）</td><td>Invitrogen</td><td>NP0001</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>PageRuler 预染蛋白质标准品</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>26616</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>苯甲基磺酰氟&amp;nbsp;</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>36978</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>Pierce 16% 甲醛（w/v）</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>28908</td><td>分析纯，避光</td></tr><tr><td>Pierce BCA 蛋白检测试剂盒</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>23225</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>Pierce BCA 试剂A（含有碳酸钠、碳酸氢钠、双辛可宁酸和酒石酸钠的0.1 M氢氧化钠溶液）</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>23228</td><td>Pierce BCA 蛋白质定量试剂盒（Thermo Scientific，23225）的一部分</td></tr><tr><td>Pierce BCA 试剂 B（含4%硫酸铜）</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>1859078</td><td>Pierce BCA 蛋白质检测试剂盒（Thermo Scientific，23225）的一部分</td></tr><tr><td>丙酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>402907</td><td>ACS级</td></tr><tr><td>蛋白酶抑制剂混合物套装 III</td><td>Calbiochem</td><td>539134</td><td>细胞 &amp;及组织培养级</td></tr><tr><td>SlowFade Gold 抗荧光淬灭封片剂</td><td>Invitrogen</td><td>S36936</td><td>光敏感的</td></tr><tr><td>氯化钠（NaCl）</td><td>Bioneer</td><td>C-9025</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>脱氧胆酸钠</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>十二烷基硫酸钠</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71736</td><td>分子生物学级</td></tr><tr><td>氢氧化钠（NaOH）</td><td>Biosesang</td><td>SR2018-100-00</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>三蒸水</td><td>-</td><td>-</td><td>超纯（一级）</td></tr><tr><td>Tris缓冲盐水</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94158</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>Tris-甘氨酸转移缓冲液</td><td>Koma Biotech</td><td>K0341001</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>Tris-HCl，pH 8</td><td>Bioneer</td><td>C-9006</td><td>分析纯</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93443</td><td>分子生物学级</td></tr><tr><td>胰蛋白酶</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>20233</td><td>细胞培养级</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>分子生物学级别</td></tr><tr><td>尿素</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>U5378</td><td>分子 &amp;和细胞培养级</td></tr></tbody></table>

体内应用基于turboid的邻近标记技术于drosophila melanogaster

In Vivo Application of TurboID-based Proximity Labeling in Drosophila melanogaster

邻近标记（proximity labeling, PL）是一种用于绘制蛋白质-蛋白质相互作用网络的强有力方法。标记酶技术的进步，尤其是TurboID的发展，极大地拓展了该方法在各类生物系统中的应用。TurboID因其稳定性高、无毒性且操作简便，特别适用于体内（in vivo）研究。该酶在生物素存在条件下，可在约10 nm范围内非特异性地对邻近的生物分子（包括蛋白质和核酸）进行生物素标记。我们应用该方法研究了Zucchini（Zuc）的相互作用组，Zuc是黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）卵巢生殖细胞线粒体外膜（OMM）上piwi相互作用RNA（piRNA）生成过程中的关键因子。通过在生殖细胞中表达Zuc-TurboID并补充生物素，我们诱导了Zuc邻近蛋白质的生物素化。在富集生物素化肽段后进行质谱分析，鉴定了与Zuc空间位置接近的蛋白质，其中包括已知参与piRNA生成的相互作用蛋白。值得注意的是，我们还发现了Zuc的新相互作用蛋白，这些蛋白参与蛋白质折叠、膜结构组织以及囊泡运输过程。

示例结果如图所示 图1, 图2, 图3, 图4 此前由 Nguyen 等人发表20. 图1 展示了基于TurboID的邻近标记（PL）实验流程 果蝇 卵巢。首先构建了一个融合Zuc与TurboID的表达载体（Zuc-V5-TurboID）。同时，将已知定位于特定亚细胞器的标志性蛋白——核输出信号蛋白（NES）和线粒体外膜转位酶（Tom20）——也分别与TurboID融合（NES-V5-TurboID和Tom20-V5-TurboID）。其中，NES-V5-TurboID用于生物素标记胞质蛋白，作为阴性对照；而Tom20-V5-TurboID则作为阳性对照，用于标记线粒体外膜（OMM）的蛋白质组。将过表达这些转基因...

本研究建立了基于TurboID的果蝇（D. melanogaster）卵巢邻近标记（PL）的详细实验方案，涵盖从生物素补充、卵巢解剖到转基因表达验证以及用于质谱分析的生物素化肽段富集的全部步骤。

体内应用基于TurboID的邻近标记技术于Drosophila melanogaster

邻近标记（PL）是一种用于绘制蛋白质-蛋白质相互作用网络的强有力方法。标记酶技术的进步，尤其是 TurboID 的发展，已……

本研究采用基于TurboID的邻近标记技术，对果蝇卵巢生殖细胞中Zucchini蛋白的相互作用进行作图分析。研究鉴定出多个已知及新的Zucchini相互作用蛋白。值得注意的是，若干新发现的互作蛋白参与了蛋白质折叠、膜结构组织以及物质的物理转运过程。本研究在动物组织中利用TurboID实现了高效的标记，同时有效控制了背景生物素化。通过优化对照条件并在胰蛋白酶消化后富集生物素化肽段，显著提高了标记特异性和蛋白质覆盖度。该方法可系统性筛选目标蛋白的相互作用，从而揭示其功能及分子机制。[旁白] 首先，用实验室药匙取一勺光滑的酵母糊，该酵母糊由将酵母粉溶解于三蒸水中制备而成，将其涂抹于离心管管壁。另取一个含有新孵化果蝇的离心管，轻轻敲击管底以使果蝇聚集于管底。将此管倒置在含有酵母糊的离心管上，对齐管口以防止果蝇逃逸。轻敲两个离心管，使果蝇转移至含有酵母糊的离心管底部。转移完成后，为两个离心管 securely 加上棉塞，并静置三天。第三天时，通过将1摩尔生物素储备液稀释于三蒸水中，制备100微摩尔的生物素工作液。向该溶液中加入500微升0.5%丙酸。将生物素溶液与干燥酵母粉混合，搅拌成糊状。用实验室药匙取一勺生物素酵母糊，涂抹于生物素食物离心管的管壁。将果蝇分为两组：将其中一组转移至含有正常食物的离心管中作为对照组；将另一组转移至添加了生物素酵母糊的生物素食物离心管中，以开始生物素标记。16小时后，将果蝇转移至含有正常食物的新离心管中。进行果蝇卵巢采集时，用移液器将1毫升冷的Grace's昆虫培养基滴加至解剖皿中。使用精细尖头镊子将一只雌性果蝇放入解剖皿，并使其浸没于培养基中。用一对镊子夹住胸部，注意不要压碎身体。用另一把镊子轻轻移除位于生殖器部位的腹部末端。从上腹部向下缓慢挤压，用镊子将卵巢挤出。在不损伤卵巢的前提下，去除肌肉网及周围组织。用镊子将清洁的卵巢转移至1.7毫升离心管中，并将离心管置于冰上。进行组织裂解时，向含有卵巢的离心管中加入500微升含有蛋白酶抑制剂混合物的含2%十二烷基硫酸钠的Tris缓冲盐水。等待细胞完全裂解，直至溶液变得粘稠。按照屏幕上显示的条件进行超声处理。接下来进行丙酮沉淀：将裂解液转移至5毫升低吸附离心管中。加入相当于样品体积六倍的冷丙酮。短暂涡旋混匀后，将离心管放入多向旋转仪中，在-20摄氏度下孵育过夜，约16小时。在4摄氏度下以15,000 × g离心15分钟，使沉淀的蛋白质形成沉淀。随后，向沉淀中加入2毫升由90%冷丙酮和10%Tris缓冲盐水组成的混合溶液。通过上下吹打使沉淀与溶液充分混匀。短暂涡旋后，再次将离心管放入多向旋转仪中，在-20摄氏度下孵育2小时。在4摄氏度下以15,000 × g离心15分钟，使蛋白质再次沉淀。弃去上清液后，在4摄氏度下再次短暂离心。打开管盖，使沉淀在空气中干燥10分钟。将蛋白质沉淀重新悬浮于500微升8摩尔尿素溶液中。将溶液转移至含有自适应聚焦声学（AFA）纤维的1毫升MilliTube中。使用与之前相同的参数进行超声处理，随后进行二辛可宁酸（BCA）法测定蛋白质浓度。将蛋白质在37摄氏度、450 RPM的温控金属块上变性1小时。向离心管中加入5微升溶于三蒸水的1摩尔二硫苏糖醇（DTT），使终浓度达到10毫摩尔。再次将离心管置于温控金属块上，在37摄氏度下孵育1小时，以还原蛋白质。随后向样品管中加入55微升400毫摩尔碘乙酰胺溶液，使终浓度达到40毫摩尔，然后将离心管放回温控金属块中进行烷基化反应。通过加入50毫摩尔碳酸氢铵溶液将样品稀释至总体积达到4毫升。向离心管中加入4微升1摩尔氯化钙储备液，使终浓度达到1毫摩尔。上下吹打混匀溶液。接下来，向离心管中加入150微升浓度为1毫克/毫升的胰蛋白酶储备液，保持胰蛋白酶与样品的质量比为1:20。在37摄氏度、450 RPM的温控金属块上消化蛋白质16小时。每3毫克样品使用150微升链霉亲和素偶联磁珠，用1毫升含2摩尔尿素的Tris缓冲盐水洗涤磁珠。用移液器将1毫升消化后的肽段溶液加入含有磁珠的离心管中，轻轻混匀。将混合物与剩余的肽段样品合并于5毫升低吸附离心管中。孵育1小时后，将1毫升混合液转移至1.5毫升离心管中，置于磁力架上静置1分钟。用1毫升含2摩尔尿素的50毫摩尔碳酸氢铵溶液洗涤磁珠两次，再用1毫升三蒸水洗涤一次，每次洗涤后均将离心管放回磁力架上静置1分钟并弃去上清液。随后，向含有磁珠的离心管中加入100微升洗脱缓冲液，轻轻混匀，并在60摄氏度、300 RPM的温控金属块上洗脱肽段5分钟，然后再次将离心管置于磁力架上。将洗脱液转移至新的1.5毫升离心管中，避免带入磁珠。洗脱后的样品现已准备好进行干燥，并用于质谱分析。该图展示了利用zucchini-V5-TurboID进行的共聚焦成像及蛋白质组相互作用分析，以鉴定邻近及相互作用蛋白。共聚焦图像显示，在给予生物素喂养处理后，转基因表达与邻近蛋白的信号呈现强烈共定位，分别由V5抗体和链霉亲和素偶联的Alexa Fluor 594检测获得。对zucchini-V5-TurboID蛋白质组进行的基因本体（GO）分析表明，富集的生物素化蛋白参与了分子伴侣介导的蛋白质折叠、内膜系统的组织以及从内质网到高尔基体的运输调控过程。

in-vivo-application-turboid-based-proximity-labeling-drosophila

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

体内研究基于 TurboID 的邻近标记在黑腹果蝇中的应用

本方案描述了在黑腹果蝇（Drosophila...

研究有丝分裂的显微注射技术 黑腹果蝇 合胞体胚胎

介观荧光断层成像技术突破了组织切片荧光显微镜的穿透深度限制。该技术基于多角度投影照明和光子传输模型描述。我们展示了在活体中对表达GFP的黑腹果蝇（Drosophila...

介观荧光断层成像技术 体内 发育过程成像 果蝇

活体成像 黑腹果蝇 胚胎血细胞迁移

本方案描述了一种对完整的黑腹果蝇（Drosophila...

体内成像完整果蝇幼虫的亚细胞分辨率研究

我们介绍一种用于标记黑腹果蝇（Drosophila）胚胎中枢神经系统（CNS）中单个神经元的技术，该技术可通过透射光显微镜或共聚焦显微镜对神经元形态进行分析。...

果蝇（Drosophila melanogaster）中枢神经系统中单个细胞的标记

本文展示了一种利用快速扫描共聚焦显微镜透过蛹壳直接成像细胞行为的方法。通过保持蛹壳完整，该方法能够在果蝇发育的某一难以直接研究的阶段，实现对动态细胞过程的观察与测量。...

透过黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）蛹壳进行成像

本方案介绍了一种高效成像活体样本的方法 果蝇...

活体成像 果蝇 蛹期复眼

所描述的RNA 原位 杂交方案可实现对完整组织中RNA的检测 果蝇...

高分辨率荧光 原位 杂交 果蝇 使用酪酰胺信号放大法的胚胎与组织检测

本文展示了如何在活体运动神经末梢上进行单分子光激活定位显微镜成像 黑腹果蝇...

体内 果蝇运动神经突触前末梢的单分子示踪

本文介绍了一种利用分子信标、转盘共聚焦显微镜和开源分析软件，在活体黑腹果蝇（Drosophila...

在活细胞中可视化与追踪内源性 mRNA 黑腹果蝇 卵室

在早期 果蝇 胚胎中许多细胞器具有运动性。原则上，可对它们进行活体成像 通过 特异性荧光探针，但卵壳阻碍了其对胚胎的直接应用。本方案描述了如何将此类探针引入胚胎 通过 显微注射，然后分析细胞器的大规模运动 通过...

可视化细胞骨架依赖性脂质囊泡在 Drosophila 胚胎中的运输

了解基于TurboID的邻近标记技术，用于研究黑腹果蝇生殖细胞中zucchini蛋白的相互作用。该方法通过优化生物素标记和质谱分析，鉴定出参与蛋白质折叠、膜组织和转运的新型互作蛋白。

体内应用基于TurboID的邻近标记技术于Drosophila melanogaster

探索更多视频