Probenvorbereitung für die Metabolomik: Eine Methode zur Vorbereitung von Zellproben für das Metaboliten-Profiling

Metabolomik ist die Studie zur Identifizierung und Quantifizierung von Metaboliten, die in den Zellen vorhanden sind. Um die Probe vorzubereiten, beginnen Sie mit der Aussaat von Brustkrebszellen zusammen mit dem Wachstumsmedium in zwei Platten, die als Test und Kontrolle gekennzeichnet sind. Drei Tage bei 37 Grad Celsius inkubieren. Entfernen Sie nun das Medium und fügen Sie frisches Medium mit Östradiol in die Testplatte und reines Medium in die Kontrollplatte hinzu.

Das Östradiol bindet an den Östrogenrezeptor alpha in Brustkrebszellen, um bestimmte Expressionen zu induzieren, was zu einer Veränderung der Metabolitenzusammensetzung führt. Inkubieren Sie die Platten für die gewünschte Dauer. Ersetzen Sie das Medium durch eiskaltes Phosphat, gepufferte Kochsalzlösung oder PBS, um die Zellen zu waschen, und fügen Sie dann eiskaltes Aceton hinzu. Die eiskalten Reagenzien stoppen die Wirkung von Proteasen und verhindern so den Proteinabbau.

Lösen Sie nun mit einem Schaber die Zellen von den Platten und geben Sie sie mit Hilfe einer Pipette in Röhrchen. Nehmen Sie 20 Mikroliter dieser Zellsuspension auf ein Hämozytometer und zählen Sie die Anzahl der Zellen. Lagern Sie die Proben bei