JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 1:29 Min. • March 4th, 2025
Beginnen Sie mit einem Gehirnschnitt, der reich an dopaminergen Neuronen ist.
Inkubieren Sie die Scheibe in aCSF, das fluoreszierende falsche Neurotransmitter oder FFNs enthält.
FFNs sind pH-empfindliche Marker, die Dopamin nachahmen und in neutralen Umgebungen intensiver fluoreszieren als in sauren Umgebungen.
Diese FFNs dringen selektiv in dopaminerge Neuronen ein und werden in saure synaptische Vesikel geladen, wo die pH-Änderung die FFN-Fluoreszenz reduziert.
Übertragen Sie diese Schicht in eine Bildgebungskammer, sichern Sie sie und perfundieren Sie kontinuierlich mit aCSF, um ungebundene FFNs zu entfernen.
Bilden Sie die Scheibe ab, um die FFN-Akkumulation als fluoreszierende Punktzahl zu bestätigen.
Positionieren Sie als Nächstes eine Stimulationselektrode, um eine elektrische Stimulation durchzuführen.
Die elektrischen Impulse bewirken, dass Kalzium in das Neuron eindringt, was eine synaptische Vesikelfusion mit der neuronalen Membran und die Freisetzung von FFNs in den extrazellulären synaptischen Spalt auslöst.
In der neutralen pH-Umgebung des synaptischen Spalts intensiviert sich die FFN-Fluoreszenz.
Bilde den Schnitt erneut, um die diffuse Fluoreszenz im extrazellulären Raum zu beobachten, die die FFN-Freisetzung aus synaptischen Vesikeln bestätigt.