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Ein High-Throughput-Screen für Biomining Cellulase Aktivität von Metagenombanken
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JoVE Journal Biology
A High Throughput Screen for Biomining Cellulase Activity from Metagenomic Libraries

Ein High-Throughput-Screen für Biomining Cellulase Aktivität von Metagenombanken

Full Text
16,495 Views
10:21 min
February 1, 2011

DOI: 10.3791/2461-v

Keith Mewis1, Marcus Taupp1, Steven J. Hallam1

1Microbiology and Immunology,University of British Columbia - UBC

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Dieses Protokoll beschreibt einen hohen Durchsatz Bildschirm für cellulolytische Aktivität von einem metagenomische Bibliothek in Escherichia coli exprimiert. Der Bildschirm ist Lösung und hoch automatisiert und nutzt Ein-Topf-Chemie in 384-Well-Mikroplatten mit dem letzten Auslesen als Extinktionsmessung.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Cellulase-exprimierende Klone aus einer metagenomischen Bibliothek zu identifizieren. Dies wird erreicht, indem zunächst eine zuvor erstellte metagenomische Bibliothek mit einem Roboter repliziert wird, nachdem die replizierte Bibliothek 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius inkubiert wurde. Das Wachstum der E-Coli-Klone wird gemessen, Lyse, Puffer und Substrat werden dann zur replizierten Bibliothek hinzugefügt.

Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die die Zellulaseaktivität durch farbmetrische Absorptionsmessungen mit einem Plattenleser zeigen. Hallo, ich bin Keith aus dem Labor von Steven Hallam in der Abteilung für Mikrobiologie und Immunologie an der University of British Columbia. Heute zeigen wir Ihnen ein Verfahren für das funktionelle Hochdurchsatz-Screening von metagenomischen Bibliotheken.

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