Name: High-Throughput-Assay Verzuckerung für Lignocellulose-Materialien (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 39 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie die Verzuckerungspotenziale von Pflanzenbiomasse mit einem Hochdurchsatz-Assay in 96-Well-Platten analysieren. Diese Methode ermöglicht die schnelle Bewertung von 80 Proben täglich für Biokraftstoffforschung.

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Die Autoren bedanken sich bei A Viksø-Nielsen (Novozymes) für die Gabe des cellulolytischer Enzyme danken. Diese Arbeit wurde von FP7 VERLÄNGERUNG und BBSRC Projekte BB/G016178 und BB/G016194 finanziert.

1. Vorbereitung der Proben Wir normal arbeiten mit Stielen entweder krautige oder holzige Pflanzen. Im Falle von krautigen Materialien, die wir wachsen die Pflanzen zur Reife, und nach Samenentwicklung wir sammeln trockenen Stängel einmal Seneszenz ist abgeschlossen. Die Stiele sind in 4 mm Segmente geschnitten und in 2 ml Fläschchen mit drei Mahlkugeln. Im Falle von holzigen Stoffen, sind die Proben zu groben Sägemehl mit einem Kurs Holz-Datei Boden und dann in einer Kugelmühle für die weitere Verarbeitung. Die Proben werden in einem Rack im Schleifen / Formatierung Station (Abbildung 1) platziert. Diese Station sequenziell mahlt, mischt und wiegt jede Probe. Die Anzahl der Wiederholungen pro Probe notwendig ist durch die Prüfung das Mahlgut in einer Reihe von Vorversuchen, wo die intrinsische Variabilität für eine bestimmte Partikelgröße bestimmt wird gegründet. Die 2 ml-Fläschchen sind an der Unterseite durchbohrt und die Materialien werden durch Vibration des Fläschchens über den gewählten gut verzichtet. Die vibrierende Arm wird durch ein Feedback aus der Bilanz unter Berücksichtigung der genaue Dosierung des Pulvers gesteuert. Der Roboter verzichtet 4 mg / well in einer Standard-Analyse und 4 Wiederholungen sind in den meisten Fällen erforderlich. Dies erlaubt 20 Pflanzenproben / Platte analysiert werden. 2. Vorbehandlung Sobald die Proben formatiert sind, werden die 96-Well-Platten durch eine automatisierte Liquid-Handling-System (Abbildung 2) verarbeitet. Hier eine milde Vorbehandlung ist auf die pflanzlichen Materialien durch Zugabe von 350 ul von sauren oder alkalischen Lösungen und Erhitzen der Platte auf eine angepasste Block durchgeführt. Zur Vermeidung von Verdunstung während der Analyse sind die 96-Well-Platten mit einer Silikon-matt versiegelt. Die Temperatur und der Zeit der Vorbehandlung kann nach den Materialien untersucht geändert werden. Die maximale Temperatur, jedoch beträgt 100 ° C. Ein alternatives Verfahren zur Prüfung von härteren Vorbehandlungen ist es, die Materialien off line Vorbehandlung und die Beseitigung der pretreatmet aus dem Prozess. 3. Hydrolyse <ol><li> Nach den Materialien vorbehandelt werden, der Roboter automatisch entfernt die Vorbehandlung Lösung und wäscht, alle Brunnen, 5-mal mit 850 ul 25 mM Acetatpuffer. Die Spülungen werden durch Zugabe von Puffer, um die Vorbehandlung Lösung und anschließendem Entfernen 50% des Gesamtvolumens nach Abzug der Feststoffe in der Probe zu begleichen durchgeführt. Die Höhe der Anspruch ist bei der Hälfte der flüssigen Masse zu vermeiden Absaugen von Feststoffen aus dem Grund des Brunnens gesetzt, es gibt vernachlässigbaren Verlust von Festkörpern mit Hilfe dieses Ansatzes. Nach diesen wäscht die pH-Wert im gut 4,5 und das Material ist bereit für die enzymatische Hydrolyse. </li><li> Ein Enzym-Gemisch mit einer Lösung von Cellulasen und Hemicellulasen wird vom Roboter aufgenommen. In jede Vertiefung, ist 850 ul der Enzymmischung verzichtet und die Platte wird in einem 50 ° C Schüttelinkubator verschoben. Die Standard-Hydrolyse ist für 8 h durchgeführt, aber diesmal können, um den Zweck des Experiments angepasst werden. Die Standard-Enzymbeladung für Gräser eingesetzt ist 7 FPU / g Material. </li></ol> 4. Nachweis von reduzierenden Zuckern Bestimmung von reduzierenden Zuckern nach Hydrolyse freigesetzt wurde durchgeführt unter Verwendung eines modifizierten 3-methyl-2-benzothiazolinon Hydrozone (MTBH) Methode 3. MBTH wurde als das am besten geeignete Methode ausgewählt, weil es am einfachsten zu automatisieren und die am wenigsten anfällig für Störungen durch Verbindungen wie Proteine ​​wurde. Wir modifizierten diese hochempfindliche Methode für den Einsatz auf der Roboter-Plattform, so dass es genau quantifizieren könnten Zucker in den Konzentrationen in der Biomasse-Hydrolysate, mit einem Gesamtvolumen von 250 ul, die für eine herkömmliche optische 96-Well-Platte ist. Alle folgenden Schritte werden automatisch durchgeführt von drei unabhängigen Bestimmungen der reduzierenden Zucker wurden für jedes Verzuckerung Reaktion durchgeführt. <ol><li> 30 ul Hydrolysat wurde aus dem tiefen Loch-Platte aufgenommen und mit 45 ul 25 mM Natriumacetat-Puffer in einem skirted PCR 96-Well-Platte. </li><li> 25 ul 1N NaOH und 50 ul einer Lösung mit 0,43 mg / ml MBTH und 0,14 mg / ml DTT wurden hinzugefügt. </li><li> Nach dem Mischen wurde die PCR-Platte bei 60 ° C für 20 min in einem Thermocycler oder ein ähnliches Gerät, das genau die gleiche Menge an Wärme liefert, um alle 96 Wells. </li><li> Die daraus resultierende Reaktion auf eine optische Platte übertragen. </li><li> 100 l von oxidierenden Reagenz (0,2% FeNH4 (SO4) 2, 0,2% Amidosulfonsäure und 0,1% HCl). Gut mischen und zu entwickeln für mindestens 1 h </li><li> Jede Platte sollte auch Standard-Reaktionen von 50 nmol, 100 nmol und 150 nmol Glukose. Die optische Platten werden bei 620 nm gelesen. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse: Beispiele für verschiedene Arten von Analysen sind in Abbildung 3 und 4 dargestellt. Alle Ergebnisse wurden mit Hilfe der automatisierten Plattform erhalten. Abbildung 3 restellt die Zunahme der reduzierenden Zuckern von 8 h Inkubationen vom Boden aus Pappelholz mit steigenden Mengen von cellulolytischen Enzyme freigesetzt. Abbildung 4 zeigt die Auswirkungen des sauren und alkalischen Vorbehandlung auf Pappel Proben. Die NaOH Vorbehandlung ist effizienter, die verdünnte H2SO4 Vorbehandlung bei der Erleichterung der Freisetzung von Zucker bei der Hydrolyse. Die Höhe der Zucker nach der Hydrolyse gemessen abnimmt, wenn die Vorbehandlung durchgeführt wird unter Verwendung von NaOH-Konzentrationen höher als 1M. <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Robotic-Station für Schleif-und 96-Well-Format von Biomasse <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Liquid Handling Station für die Hochdurchsatz-Analyse Verzuckerung <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Einfluss verschiedener Enzym Belastungen auf die Freisetzung von reduzierenden Zuckern Mittel aus Pappel-Proben <img src="/files/ftp_upload/3240/3240fig4.jpg" alt="Abbildung 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4. Auswirkung der unterschiedlichen Vorbehandlungen auf die Verzuckerung der Pappel Proben. A. Zucker nach pretreament mit unterschiedlichen Prozentsätzen von H2SO4 bei 90 ° C für 30 Minuten freigegeben. B. Zucker nach NaOH Vorbehandlungen bei der gleichen Temperatur und Zeit freigesetzt, als die Säure Vorbehandlung .

<ol><li>Carpita, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+Biogenesis+of+the+Cell+Walls+of+Grasses%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Physiol+Plant+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Structure and Biogenesis of the Cell Walls of Grasses.</a> Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol. 47, 445-476 (1996).</li>
<li>Gomez, L. D., Steele-King, C. G., McQueen-Mason, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustainable+liquid+biofuels+from+biomass%3A+the+writing%27s+on+the+walls%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Sustainable liquid biofuels from biomass: the writing's on the walls.</a> New Phytol. 178, 473-485 (2008).</li>
<li>Anthon, G. E., Barrett, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+reducing+sugars+with+3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Determination of reducing sugars with 3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone.</a> Anal Biochem. 305, 287-289 (2002).</li>
<li>Gomez, L. D., Whitehead, C., Barakate, A., Halpin, C., McQueen-Mason, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+saccharification+assay+for+determination+of+digestibility+in+plant+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Biofuels%22%5BJournal%5D)">Automated saccharification assay for determination of digestibility in plant materials.</a> Biotechnol Biofuels. 3, 23-23 (2010).</li>
</ol>

Abwandlungen des Standard-Saccharifizierungsprotokolls können auf derselben Plattform verwendet werden, um die Aktivität cellulolytischer Enzyme zu bestimmen (z. B. durch Variation der im Mikrotiterplatte verwendeten Enzymkonzentrationen oder durch Verwendung von Papier als Substrat); den Wirkungsgrad verschiedener Enzymgemische an einem bestimmten Material zu vergleichen; Zeitverläufe der Saccharifizierung aufzunehmen; etc.
Ein standardisiertes Saccharifizierungsprotokoll zum Vergleich des Saccharifizierungspotenzials in verschiedenen Pflanzenmaterialien umfasst eine achtstündige Hydrolyse (Abbildungen 3 und 4). Die meisten analysierten Pflanzenmaterialien erfordern vier Wiederholungen. Unter diesen Bedingungen kann die Plattform 80 Proben pro Tag verarbeiten. Diese Analyse wird verwendet, um große Populationen von Gerste, Mais und Brachypodium daraufhin zu screenen, um die Variabilität des Saccharifizierungspotenzials sowie die daran beteiligten Gene zu ermitteln4.

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th></tr><tr><td> Grinding &amp; Wiegen Roboter </td><td> Labman Automation </td><td></td></tr><tr><td> 2 ml Mikro-Schlauch mit Kappen </td><td> Sarstedt Ltd </td><td> 72,694 </td></tr><tr><td> 5 mm Edelstahl Perlen </td><td> Qiagen Ltd </td><td> 69989 </td></tr><tr><td> 1.2ml Abgene Platz auch Speicherplatten </td><td> Fischer Scientific Ltd </td><td> TUL-050-050C </td></tr><tr><td> Whatman Deckel für 96 Quadratmeter Well-Platten </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> 7704-0104 </td></tr><tr><td> Flüssige Hanling Roboter </td><td> Tecan Group Ltd </td><td> Freedom Evo 200 </td></tr><tr><td> Schwefelsäure </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> S/9231/PB17 </td></tr><tr><td> Natriumhydroxid </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> BPE359-500 </td></tr><tr><td> Natriumacetat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8750-500G </td></tr><tr><td> Essigsäure </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> A/0420/PB17 </td></tr><tr><td> Novozyme 188 </td><td> Novozyme </td><td> DCN00214 </td></tr><tr><td> Celluclast 1.5L </td><td> Novozyme </td><td> CCN03122 </td></tr><tr><td> 96-Well-PCR vollen Rock Platten </td><td> Sarstedt Ltd </td><td> 72.1980.202 </td></tr><tr><td> D-Glucose </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> G/0450/53 </td></tr><tr><td> 3-Methyl-2-benzothiazolinon Hydrazon Hydrochlorid Hydrat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 129739-25G </td></tr><tr><td> DL-Dithiothreitol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D9163-1G </td></tr><tr><td> Corning Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen mit flachem Boden </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> TKT-521-050H </td></tr><tr><td> Ammoniumeisen (III)-Sulfat Dodecahydrat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F1668-250G </td></tr><tr><td> Sulfaminsäure </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 242772-500G </td></tr><tr><td> Salzsäure </td><td> Fisher Scientific Ltd </td><td> 12462-0026 </td></tr></tbody></table>

high-throughput-assay verzuckerung für lignocellulose-materialien

High-throughput Saccharification Assay for Lignocellulosic Materials

Polysaccharide, aus denen sich Pflanzen Lignozellulose aufgeschlüsselt werden können, um eine Reihe von Zuckern, die später bei der Errichtung einer Bioraffinerie eingesetzt werden können produzieren. Diese Rohstoffe wäre eine neue industrielle Plattform, die sowohl nachhaltig als auch klimaneutral ist, um die derzeitige Abhängigkeit von fossilen Brennstoffen zu ersetzen. Die Widerspenstigkeit der Dekonstruktion in Lignocellulose-Materialien beobachtet wird von mehreren intrinsischen Eigenschaften der pflanzlichen Zellwände produziert. Kristalliner Cellulose ist in Matrix-Polysaccharide wie Xylane und Arabinoxylane eingebettet, und die ganze Struktur ist umhüllt von der phenolischen Polymer Lignin, das ist auch schwierig zu 1 zu verdauen. Um die Verdaulichkeit von pflanzlichen Materialien, die wir benötigen, um die wichtigsten Engpässe für die Verzuckerung der Zellwände und auch Bildschirm-Mutante und Populationen zu entdecken, um die Variabilität in Verzuckerung 2 auszuwerten verbessern. Diese Aufgaben erfordern einen hohen Durchsatz Ansatz und hier präsentieren wir eine analytische Plattform, die Verzuckerung Analyse in einer 96-Well-Platte-Format durchführen können. Diese Plattform wurde entwickelt, um das Screening von Lignocellulose Verdaulichkeit von großen Populationen von verschiedensten Pflanzenarten ermöglichen. Wir haben den Reaktionsvolumina für die schonende Vorbehandlung, partielle enzymatische Hydrolyse und Zuckerbestimmung skaliert, damit eine große Zahl schnell in ein automatisiertes System beurteilt werden. Diese vollautomatische Plattform arbeitet mit Milligramm-Mengen von Biomasse, die Durchführung Kugelmühle unter kontrollierten Bedingungen, um die pflanzlichen Materialien zu einem standardisierten Partikelgröße in reproduzierbarer Weise zu reduzieren. Sobald die Proben Boden sind, verzichtet die automatisierte Formatierung Roboter angegeben und erfasst Mengen an Material in die entsprechenden Vertiefungen der 96-well-Platte (Abbildung 1). Normalerweise verzichten wir aus dem gleichen Material in 4 Vertiefungen zu haben 4 Wiederholungen für die Analyse. Sobald die Platten mit dem Pflanzenmaterial in das gewünschte Layout gefüllt sind, werden sie manuell in einen Liquid-Handling-Station (Abbildung 2) bewegt. In dieser Station werden die Proben auf eine milde Vorbehandlung entweder mit verdünnter Säure oder alkalischen unterzogen und über Nacht bei Temperaturen von bis zu 90 ° C. Die Vorbehandlung Lösung wird anschließend entfernt und die Proben werden mit Puffer gespült, um sie zu einem geeigneten pH-Wert für die Hydrolyse zurückzukehren. Die Proben werden dann mit einem Enzym-Gemisch für eine variable Länge der Zeit bei 50 ° C inkubiert Ein Aliquot wird aus dem Hydrolysat entnommen und der reduzierenden Zucker werden automatisch von der MBTH kolorimetrischen Methode bestimmt.

Eine einfache, schnelle Methode zur Bestimmung der Verzuckerung Potenzial einer großen Zahl von pflanzlicher Biomasse Proben beschrieben. Die automatisierte Plattform für diese Analyse umfasst die Vorbereitung der pflanzlichen Biomasse für die Analyse in 96-Well-Platten und die anschließende Performance der Vorbehandlung, Hydrolyse und Quantifizierung der Zucker freigesetzt.

High-Throughput-Assay Verzuckerung für Lignocellulose-Materialien

Polysaccharide, aus denen die lignozellulosehaltige Biomasse von Pflanzen besteht, können abgebaut werden, um eine Reihe von Zuckern zu gewinnen, die anschließend für den Aufbau von ... verwendet werden können.

Hallo, ich bin Kara Ted, ich bin Leo. Geh, ich. Und ich bin Simon McQueen Mason.Die Verdaulichkeit von Pflanzenbiomasse ist gegenwärtig ein Thema von großem Interesse. Der Grund hierfür liegt darin, dass in den Polysacchariden der Pflanzenzellwände, aus denen diese Biomasse besteht, eine große Menge an Zuckern gebunden ist. Wenn es gelingt, diese Zuckern in einer nutzbaren Form freizusetzen, können sie zur Herstellung verschiedenster Produkte wie Brennstoffe und Chemikalien fermentiert werden. Leider sind diese Materialien äußerst schwer verdaulich, weshalb ein besseres Verständnis der Faktoren, die diese Verdaulichkeit steuern, von erheblicher Dringlichkeit ist.Um pflanzliches Material für die Herstellung erneuerbarer Rohstoffe nutzen zu können, müssen wir das Vergärungspotential dieser Pflanzen messen können. Hier an der University of York untersuchen wir große Populationen pflanzlichen Materials, um deren Vergärungspotential zu bestimmen. Die Vergärung ist der Prozess, bei dem komplexe Kohlenhydrate in ihre Monosaccharid-Bausteine zerlegt werden, um mithilfe verschiedener industrieller Verfahren wertvolle Chemikalien herzustellen.Um das Vergärungspotential zu messen, reproduzieren wir industrielle Prozesse auf mikroskaliger Ebene, bei denen Biomasse einer Vorbehandlung und enzymatischen Hydrolyse unterzogen wird, um die freigesetzten Zucker zu bestimmen. Dies ermöglicht die Identifizierung interessanter Genotyp-Varianten. Das Hochdurchsatzsystem arbeitet im Format einer IG-Sechskammer-Platte.Es werden milde Hydrolysebedingungen verwendet, um subtile Unterschiede zwischen Genotypen aufzuzeigen, und die Methode ist zudem flexibel genug, um verschiedene Substratmaterialien zu verwenden sowie unterschiedliche Enzyme zu evaluieren. Die von uns verwendete Methode beinhaltet die Aufbereitung des Pflanzenmaterials zu einem Pulver, das anschließend 20 Minuten lang mit einer verdünnten Säure oder Base bei 90 Grad vorbehandelt wird. Danach erfolgt eine enzymatische Verdauung mithilfe einer kommerziellen Cellulasemischung bei 50 Grad über einen Zeitraum von acht Stunden.Schließlich wird eine MBTH-Methode zur Bestimmung der Freisetzung von reduzierenden Zuckern verwendet. Das Pflanzenmaterial wird als trockene Stängel geerntet, die in vier Millimeter lange Segmente geschnitten werden. Diese werden zusammen mit drei metallischen Kugeln mit einem Durchmesser von fünf Millimetern in 2-Milliliter-Fläschchen gegeben.Die Gefäße sind einzeln mit Barcodes gekennzeichnet, die gescannt werden, um die Rückverfolgbarkeit der Proben sicherzustellen. Die Proben werden in die Mahl- und Formatierungsroboter eingelegt. Die Proben werden automatisch gemahlen und gemischt, um die Abgabe der Biomasse in eine 96-Loch-Platte zu ermöglichen.Die Fläschchen werden durchstochen, dann wird das Fläschchen im Roboterarm so neu positioniert, dass es sich innerhalb eines Trichters befindet, der vibriert, um das Pulver abzugeben. Die Vibration des Trichters wird über eine Waage geregelt, um die Zielmenge an Masse pro Vertiefung zu erreichen, die abgegeben wird. Die Biomasse wird in 10 Spalten der Platten abgegeben, wobei zwei Spalten für Standards freigelassen werden.Indem wir vier Wiederholungen pro Probe durchführen, laden wir 20 Proben pro Platte auf. Der Hydrolysat dieser Platte wird dreifach auf PCR-Platten aufgeteilt, was zu drei optischen Platten führt. Auf diese Weise erhalten wir drei Bestimmungen von reduzierenden Zuckern pro Probe der Biomasse.Nach der Formatierung werden die Platten mit einer Silikonmatte versiegelt, um Verdunstung zu vermeiden. Sobald sie bereit sind, werden sie zum Flüssigkeits-Handling-Roboter gebracht. Bei diesem erfolgen die Vorbehandlung, die enzymatische Hydrolyse und die Bestimmung der freigesetzten Zucker automatisch.Der zwei Meter lange Tisch verfügt über Behälter für die benötigten verschiedenen Reagenzien sowie über Stauraum für das Plastikzubehör. Es gibt Inkubatoren für die Vorbehandlung und Hydrolyse sowie Thermocycler für die Zuckermessung. Die Vorbehandlung erfolgt in der Deep-Well-Platte.Durch Zugabe verdünnter Säure- oder Alkalilösungen zum Biomassepulver. Die Platten werden auf den Heizblock überführt und 20 Minuten bei 90 Grad inkubiert. Nach Beendigung dieser Inkubation wird die Vorbehandlung durch fünfmaliges Spülen mit jeweils 500 Mikrolitern Acetatpuffer entfernt.Nachdem die Vorbehandlung abgespült wurde, wird ein Enzymcocktail hinzugefügt. Es handelt sich um eine Standardmischung, die Cellulase und Novozym 188 im Verhältnis vier zu eins in einer Konzentration von sieben FPU pro Well enthält.Die Platten werden acht Stunden bei 50 Grad unter Schütteln inkubiert. 75 Mikroliter des resultierenden Hydrolysats werden in eine PCR-Platte überführt. In den Spalten 11 und 12 der PCR-Platten werden die Glucose-Standards hinzugefügt.Anschließend werden 25 Mikroliter einer einmolarigen Natriumhydroxidlösung zu allen Vertiefungen hinzugefügt. Schließlich werden 50 Mikroliter MBTH-Reagenz in die PCR-Platte pipettiert. Die Deep-Well-Platte wird aufbewahrt, nachdem der Hydrolysat-Transfer auf die dritte PCR-Platte abgeschlossen ist.Während die PCR-Platten zur Inkubation bei 60 Grad für 15 Minuten in die Thermocycler verbracht werden. Der letzte Schritt des Verfahrens ist die Übertragung des Reaktionsgemischs in optische Platten zur Farbentwicklung. Nach der Inkubation werden die PCR-Platten aus dem Thermocycler entnommen.Ein hundert Mikroliter Oxidationsreagenz werden der übertragenen Reaktionsmischung zugegeben. Zur Förderung der Farbentwicklung wird der Flüssighandhabungsprozess innerhalb von 24 Stunden viermal durchgeführt, wobei die Vorbehandlungsreinigung und die Zugabe des Enzyms etwa zwei Stunden in Anspruch nehmen. Die Enzymhydrolyse dauert acht Stunden, und die Zuckerbestimmung benötigt weitere zwei Stunden.Während die erste Platte acht Stunden lang inkubiert wird, beginnt die nächste Platte den Prozess. Mit dieser Zuteilung der Roboterrressourcen werden drei Durchläufe mit jeweils 80 Proben pro Tag erreicht, um die Menge an freigesetzten reduzierenden Zuckern zu bestimmen. Die optischen Platten werden bei 620 Nanometern gemessen.Die erhaltenen Ergebnisse werden analysiert, um die freigesetzten Zucker als Nanomol pro Milligramm pro Stunde der Reaktion zu quantifizieren. Vielen Dank fürs Zuschauen, und ich hoffe, dies regt Ihre Forschung im Bereich Biokraftstoffe an.

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Forschung

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Biologie

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