Periodische saure Schiff- oder PAS-Färbung: Eine Methode zur Beurteilung der strukturellen Deformitäten von Glomerulus

Der Glomerulus ist ein komplexes Netzwerk von Kapillaren innerhalb der Niere, das Abfallstoffe filtert und überschüssige Flüssigkeit aus dem Blut entfernt. Die renale Filtrationsrate hängt von dieser speziellen Struktur ab, die mit Periodic Acid Schiff oder PAS-Färbung untersucht werden kann.

Nehmen Sie zunächst einen schnitt der paraffinisierten Nierenrinde auf einem Objektträger. Behandeln Sie den Objektträger mit Xylol. Xylolmoleküle lösen das Paraffinwachs aus dem Gewebeabschnitt. Setzen Sie die Probe anschließend abnehmenden Alkoholkonzentrationen aus. Alkohol entfernt Spuren von Xylol, während der Gewebeabschnitt rehydriert wird, um den Fleck anschließend zu binden.

Geben Sie nun periodische Säure in die Probe. Periodische Säure wandelt die in den Gewebepolysacchariden vorhandenen Diole wie Glykogen oder Muzin in Aldehyde um. Diese Aldehyde reagieren mit dem Schiff-Reagenz, einer Fuchsin-Schwefelsäure-Kombination, und bilden einen magentafarbenen Farbstoff, der den Gewebeschnitt färbt. Spülen Sie den Objektträger aus, um überschüssige Flecken zu entfernen.

Nach dem Spülen Eisen-Hämatoxylin hinzufügen, einen nuklearen Gegenfleck, der an die DNA bindet und sie violett färbt. Waschen, um überschüssige Flecken zu entfernen. Zum Schluss wird die Probe mit zunehmendem Alkoholgehalt dehydriert, gefolgt von Xylol, das als Klärmittel dient. Dieser Schritt trägt dazu bei, den Kontrast des Gewebeschnitts für die mikroskopische Untersuchung zu verbessern.

glomeruläre Erkrankung kann als Verdickung der Basalmembran, veränderte Kapillaren und abnormale Zellen dargestellt werden, die mit einer eingeschränkten Nierenfunktion zusammenhängen.

Für eine detaillierte Visualisierung der glomerulären Zellen und der Mesangialmatrix trocknen Sie die fixierten, in Paraffin eingebetteten Nierenrindenproben 1 Stunde lang bei 37 Grad Celsius, gefolgt von einer Entparaffinisierung mit aufeinanderfolgenden Xylol- und absteigenden Ethanol-Immersionen. Rehydrieren Sie die Proben 5 Minuten lang in destilliertem Wasser und inkubieren Sie die Objektträger in periodischer Säurelösung in einem Abzug.

Spülen Sie die Objektträger nach 5 Minuten mit drei 5-minütigen Wäschen in 100 Millilitern destilliertem Wasser, gefolgt von einer 15-minütigen Inkubation in Schiffs Reagenz. Waschen Sie die Objektträger am Ende der Inkubation 5 Minuten lang in fließendem Leitungswasser und färben Sie sie 3 Sekunden lang mit Hämatoxylin gegen, bevor Sie sie weitere 15 Minuten lang gründlich unter fließendem Leitungswasser abspülen.

Entwässern Sie dann die Objektträger mit aufsteigenden Ethanol-Immersionen und zwei aufeinanderfolgenden 3-minütigen Xylol-Immersionen. Nach der Lufttrocknung können die Objektträger mit einem Eindeckmedium auf Xylolbasis montiert werden, um ihre glomeruläre Struktur auf einem Lichtmikroskop bei einer 400-fachen Vergrößerung zu beurteilen.

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