Zellulärer Biolumineszenz-basierter Assay: Eine Hochdurchsatzmethode für das kombinatorische Wirkstoffscreening
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Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:17 Min. • April 30th, 2023
Die zelluläre Biolumineszenz ist ein hochempfindlicher und schneller Ansatz für das groß angelegte Screening von Krebsmedikamenten.
Bei dieser Technik werden Tumorzellen verwendet, die Luciferase exprimieren - ein Enzym, das eine lichterzeugende chemische Reaktion katalysiert, wodurch die Wirtszellen im Dunkeln leuchten. Die Intensität der emittierten Lumineszenz ist direkt proportional zur Dichte der lebenden Zellen.
ZuBeginn werden Luciferase-exprimierende Zellen in einer optisch klaren Kulturplatte, die mit einer extrazellulären Matrix oder EZM beschichtet ist, ausgesät und inkubiert.
Während der Inkubation fördert die EZM die Anheftung der Zellen an die Kulturvertiefung.
Nehmen Sie als nächstes konzentrierte Vorräte der Arzneimittelkombination und fügen Sie verschiedene Volumina von Nährmedien hinzu, um eine serielle Verdünnung der Arzneimittelmischung vorzubereiten.
Entfernen Sie nun das Kulturmedium von den verklebten Zellen. Geben Sie verschiedene Verdünnungen der Wirkstoffkombination hinzu und inkubieren Sie.
Während der Inkubation wirkt die Wirkstoffkombination synergistisch auf zelluläre Ziele.
Entfernen Sie nun das arzneimittelhaltige Medium und fügen Sie frisches Mediu
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