Ein fluoreszenzbasierter Assay mit gentechnisch veränderten Lymphozyten zum Screening immunmodulatorischer Verbindungen

Beginnen Sie mit einer fluoreszenzkompatiblen Multiwell-Platte, die eine Suspension von transgenen T-Lymphozyten aus der Maus enthält.

Diese Lymphozyten enthalten ein grün fluoreszierendes Protein oder eine GFP-Expressionskassette, die durch die Bindung von T-Zell-Rezeptoren oder TCRs an immunmodulatorische Verbindungen gesteuert wird.

Behandeln Sie jede Vertiefung mit einer Lösung, die immunmodulatorische Verbindungen mit unterschiedlichem Potenzial enthält.

Während der Inkubation interagieren immunmodulatorische Verbindungen mit TCRs auf T-Lymphozyten.

Die TCR-Interaktion mit einer stimulierenden Substanz löst die Aktivierung der Genkassette aus und erhöht die GFP-Expression.

Im Gegensatz dazu hemmt die TCR-Interaktion mit einer inhibitorischen Verbindung die Genkassette und reduziert die GFP-Expression.

Als nächstes überlagern Sie die Zellen mit Nukleinsäure-Fluoreszenzfarbstoff, um die Zellkerne zu färben.

Zentrifugieren Sie die Platte, um die Zellen für eine genaue Fluoreszenzmessung abzusetzen.

Unter dem Fluoreszenzmikroskop zeigen lebensfähige T-Lymphozyten zwei Fluoreszenzsignale, die Zellkernen und grün fluoreszierenden Proteinen entsprechen.

Die verstärkte grüne Fluoresze