Fluoreszierende Silberfärbung: Eine Technik zur Visualisierung des Gesamtproteins in Polyacrylamid-Gelen

Bei der fluoreszierenden Silberfärbung von Proteinen in Polyacrylamid-Gelen werden fluorogene Sonden verwendet, um die Proteine nachzuweisen und zu quantifizieren.

Beginnen Sie mit einem Polyacrylamid-Gel mit Proteinen, die durch Elektrophorese in Banden unterteilt sind. In einer fixierenden Mischung aus Ethanol und Essigsäure einweichen, die durch Denaturierung der Proteine die Diffusion der Banden verhindert.

Waschen Sie das Gel, um Essigsäure- und Ethanolreste zu entfernen. Tauchen Sie das Gel in Silbernitratfleck. Silberionen binden stark an negativ geladene Gruppen in Proteinen.

Im Dunkeln inkubieren. Spülen Sie das Gel in Reinstwasser ab, um ungebundene Silberionenkomplexe zu entfernen.

Tauchen Sie das Gel in eine Entwicklungslösung, die eine fluorogene Mehrkomponentensonde - TPE-4TA - enthält. Diese anionische Sonde zielt auf Silberionen ab, die an das Protein gebunden sind, und bildet unlösliche Aggregate, die die fluorogenen Eigenschaften der Sonde aktivieren und so Fluoreszenz verleihen.

Da die Fluoreszenzaktivierung von der Aggregation abhängt, emittieren die ungebundenen Sonden kein Signal, was eine vollständige Proteinfärbung mit reduzierter Hintergrundemission ermögli