Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie: Eine robuste Methode zur Quantifizierung von fluoreszenzmarkierten und derivatisierten Sialinsäuren, die aus Mausleber isoliert wurden

Sialinsäuren, wie N-Acetylneuraminsäure und N-Glykolylneuraminsäure, sind negativ geladene Kohlenhydratanteile, die an den distalen Enden von Oligosaccharidketten auf der Zelloberfläche von Säugetieren vorkommen.

Um die relativen Mengen dieser Sialinsäuren im Lebergewebe von Mäusen mittels Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie oder RP-HPLC zu quantifizieren, wird zunächst das isolierte Sialinsäuregemisch mit einem Derivatisierungsmittel behandelt. Das Derivatisierungsmittel interagiert mit den funktionellen Gruppen der Sialinsäuren und erzeugt stabile, fluoreszierende Sialinsäurederivate.

Bauen Sie eine RP-HPLC-Säule zusammen, die mit einem Fluoreszenzdetektor verbunden ist. Die Säule besteht aus porösen stationären Phasen auf Siliziumdioxidbasis, die an unpolare, hydrophobe Alkylkettenliganden gebunden sind, um selektive Wechselwirkungen mit Sialinsäurederivaten während des chromatographischen Laufs zu erleichtern.

Äquilibrieren Sie die Säule mit einer wässrigen polaren mobilen Phase, die niedrige Konzentrationen von Acetonitril, einem weniger polaren organischen Lösungsmittel, enthält, um eine optimale Säulenkonditionierung zu gewährleisten.

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