Split-Luciferase-Komplementationsassay zur Identifizierung spezifischer Protein-Protein-Wechselwirkungen

Protein-Protein-Wechselwirkungen sind entscheidend für lebenswichtige zelluläre Funktionen.

Um die Wechselwirkungen zwischen Transmembranproteinen – Membranproteinen, die die Lipiddoppelschicht der Zellmembran überspannen – zu untersuchen, beginnen Sie mit den Vertiefungen einer Multi-Well-Platte, die eine adhärente Säugetierzellkultur enthält.

Als nächstes fügen Sie eine Lösung hinzu, die ein geeignetes Transfektionsmittel und ein Paar Expressionsplasmide enthält.

Eines der Expressionsplasmide kodiert für ein Transmembranprotein von Interesse, das mit dem kleinen nicht-funktionellen Fragment des Luciferase-Enzyms fusioniert ist; das andere Plasmid kodiert ein zweites Transmembranprotein von Interesse, das mit dem großen nicht-funktionellen Fragment des Luciferase-Enzyms fusioniert ist.

Inkubieren Sie die Platte. Das Transfektionsmittel erleichtert die zelluläre Aufnahme der Expressionsplasmide.

Erfolgreich transfizierte Zellen exprimieren die Transmembranproteine. Die Wechselwirkung zwischen den exprimierten Transmembranproteinen bringt die kleinen und großen Fragmente, die dem Zytoplasma zugewandt sind, in enge Nähe, wodurch sie binden und das aktive Luciferase-Enzym bilden.

Erse