ELISA-basierte Methode zur Analyse von Wechselwirkungen zwischen Köder- und Beuteproteinen

Die physikalische Interaktion zwischen zwei Proteinpartnern moduliert nachgelagerte biologische Mechanismen.

Um Protein-Protein-Wechselwirkungen mit dem enzymgebundenen Immunosorbent-Assay ELISA nachzuweisen, verwenden Sie eine Multi-Well-Immunoassay-Platte. Fügen Sie einen Beschichtungspuffer hinzu, der eines der interagierenden Proteine – das Köderprotein – enthält, und inkubieren Sie. Die Köderproteine werden über unspezifische hydrophobe Wechselwirkungen an der Well-Oberfläche adsorbiert.

Entsorgen Sie die verbrauchte Lösung und waschen Sie die Platte mit einem Puffer, um ungebundene Proteine zu entfernen. Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu und inkubieren Sie, so dass die Blockierungsmoleküle der Lösung unspezifische Bindungsstellen auf der Oberfläche der Vertiefung blockieren können.

Fügen Sie den interagierenden Proteinpartner – das Beuteprotein – hinzu, das mit Histidinresten markiert ist, um die Quantifizierung zu erleichtern. Inkubieren Sie, so dass das Beuteprotein spezifisch an seinen interaktiven Partner – den Köder – binden kann. Fügen Sie eine Lösung von Anti-Histidin-Antikörpern hinzu, die mit Meerrettichperoxidase-Enzymen konjugiert sind, die an die Beute binde