Quantifizierung von bioaktiven Typ-I-Interferonen mit Hilfe eines sezernierten embryonalen alkalischen Phosphatase-Reporter-Assays
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Immunologie
0 Aufrufe • 3:11 Min. • July 8th, 2025
Um die bioaktiven Typ-I-Interferone wie Interferon-alpha und Interferon-beta in einer Testprobe zu quantifizieren, wird eine Multi-Well-Platte mit manipulierten Reporterzellen entnommen. Diese Zellen exprimieren das sezernierte embryonale alkalische Phosphatase, SEAP, Reportergen unter der Kontrolle des Interferon-alpha- und beta-induzierbaren Promotors.
Geben Sie die Testprobe mit einer unbekannten Typ-I-Interferonkonzentration hinzu. Pipettieren Sie einen Bereich von humanen Typ-I-Interferon-Konzentrationen in andere Vertiefungen, die als Standardkontrollen dienen. Ausbrüten.
Typ-I-Interferon bindet in der Testvertiefung an einen spezifischen Zelloberflächenrezeptor und aktiviert so die Januskinasen. Diese Proteinkinasen phosphorylieren Signalwandler und Aktivatoren der Transkription, STAT, Proteine, die dimerisieren und einen Komplex mit einem spezifischen Interferon-Regulationsfaktor bilden.
Beim Eintritt in den Zellkern bindet der Komplex an eine spezifische DNA-Sequenz im Interferon-alpha- und beta-induzierbaren Promotor, aktiviert die Transkription des SEAP-Gens und produziert die SEAP-Enzyme, die in das Medium sezerniert werden.
Übertragen Sie das SEAP-haltige Medium in Mul
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