Erzeugung von Chikungunya-Virus-ähnlichen Partikeln unter Verwendung des Baculovirus-Expressionssystems in Insektenzellen

0 Aufrufe • 3:05 Min. • July 8th, 2025

Chikungunya-Virus-ähnliche Partikel, VLPs, sind nicht-infektiöse Strukturen, die aus viralen Hüllproteinen bestehen, die in eine Lipiddoppelschicht eingebettet sind und kein genetisches Material enthalten.

Um Chikungunya-VLPs herzustellen, infizieren Sie Spodoptera frugiperda Sf9-Insektenzellen mit rekombinanten Baculoviren, die eine Chikungunya-Strukturgenkassette exprimieren. Die Kassette besteht aus einem Baculovirus-Promotor, der mit Chikungunya-Strukturgenen fusioniert ist, die für Kapsid- und Hüllproteine kodieren.

Während der Inkubation binden Baculovirus-Hüllglykoproteine an Oberflächenrezeptoren auf den Insektenzellen. Dies erleichtert den Eintritt und die Freisetzung von viraler DNA durch Baculoviren in das Zytoplasma und erzeugt Polyproteine, die Chikungunya-Kapsid- und Hüllproteine enthalten.

Nach der Synthese erzeugt die autokatalytische Spaltung des Kapsidproteins das Vorläuferpolyprotein, das Hüllproteine im endoplasmatischen Retikulum, ER, besitzt. Im ER-Lumen spalten Enzyme das Vorläufer-Polyprotein und erzeugen einzelne Proteine, die zur weiteren Verarbeitung in das Golgi-Kompartiment gelangen und Protein-Heterotrimere bilden.

Golgi-residente Proteasen spalten die

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Chikungunya-VLPs