Ein bakterizider Serumassay für die komplementvermittelte bakterizide Aktivität von Antikörpern

Entnehmen Sie eine seriell verdünnte Serumprobe, die monoklonale Antikörper gegen Lipopolysaccharide oder LPS enthält – eine äußere Membrankomponente gramnegativer Bakterien.

Führen Sie gramnegative Bakterien ein. Serum-Antikörper binden an bakterielles LPS.

Fügen Sie Komplementproteine hinzu. Der C1-Komplex bindet an LPS-gebundene Antikörper und bildet ein enzymatisch aktives C1.

Aktiviertes C1 spaltet C4 und C2, um C3-Konvertase zu bilden, die C3 spaltet, um C5-Konvertase zu bilden. Die Konvertase spaltet C5, um C5b zu produzieren, das C6 und C7 rekrutiert. Der resultierende Komplex fügt sich in die äußere Membran ein und verbindet sich mit C8 und multiplem C9, wodurch eine Pore gebildet wird.

Eine Schädigung der äußeren Membran destabilisiert die innere Membran und führt zu einer Zelllyse.

Die Mischung auf eine Agarplatte geben und verteilen. Inkubieren für Bakterienwachstum. Überlagern Sie die Platte mit Agar, der Triphenyltetrazoliumchlorid oder TTC enthält, das durch mikrobielle Dehydrogenasen reduziert wird und den Bakterienkolonien eine rote Farbe verleiht.

Die Anzahl der Kolonien nimmt mit der Probenverdünnung zu, was auf eine verminderte bakterizide Aktivität bei niedrige