Nachweis der Bindung von Vitronectin an bakterielle Oberflächen mittels Durchflusszytometrie
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Immunologie
0 Aufrufe • 3:05 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie Durchflusszytometer-Röhrchen mit Wildtyp- und mutierten Stämmen von Haemophilus influenzae, Typ f.
Pipettieren Sie einen Puffer, der blockierende Proteine und Vitronektin enthält. Ausbrüten.
Die Blockierungsproteine reduzieren unspezifische Wechselwirkungen auf der Bakterienoberfläche, während Vitronektin-Moleküle an Protein H, ein Vitronectin-bindendes Protein, auf der Oberfläche von Wildtyp-Bakterien binden. Im mutierten Stamm bindet Vitronektin aufgrund des Fehlens von Protein H nicht.
Zentrifuge. Entfernen Sie ungebundenes Vitronektin und blockierende Proteine.
Fügen Sie einen Puffer hinzu, der primäre Anti-vitronektin-Antikörper enthält, die spezifisch an Vitronektin binden, das an die Oberflächen der Wildtyp-Bakterien gebunden ist.
Führen Sie als Nächstes Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper ein, die an die primären Antikörper auf Vitronektin binden und den Nachweis von Vitronektin erleichtern.
Zentrifuge. Entfernen Sie ungebundene Sekundärantikörper. Resuspendieren Sie Bakterien im Puffer.
Führen Sie eine Durchflusszytometrie durch, um die Bindung von Vitronektin an die Bakterienoberfläche zu bestimmen.
Vergleichen Sie die Fluoreszenzsignale von Wildtyp- und
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