Ein Barcoding-Assay zur phänotypischen und funktionellen Charakterisierung von Immunzellen

Beginnen Sie mit Testproben, die stimulierte und fixierte Immunzellen enthalten.

Die Stimulation induziert die Expression spezifischer Marker in Zellen, während bei der Fixierung phänotypische Marker, einschließlich Zelloberflächenantigene, und funktionelle Zustandsmarker, einschließlich Zytokine, erhalten bleiben.

Fügen Sie jeder Probe eine einzigartige Kombination von Schwermetallisotopen-konjugierten Antikörpern hinzu.

Bei dieser Technik werden mehrere Proben eindeutig mit einem Barcode versehen, wobei jede Probe durch ihre Kombination von Schwermetallisotopen unterschieden wird.

Die Antikörper binden an ein gemeinsames Epitop und barcodieren alle Zellen in den Proben.

Kombinieren Sie alle Proben mit Barcode in einem einzigen Röhrchen für die nachgelagerte Verarbeitung.

Fügen Sie einen metallkonjugierten Antikörpercocktail hinzu, um Oberflächenantigene zu färben.

Fügen Sie einen Permeabilisierungspuffer hinzu, um die Permeabilität der Zellmembran für die intrazelluläre Färbung zu erhöhen.

Fügen Sie einen weiteren Satz metallkonjugierter Antikörper hinzu, um intrazelluläre Zytokine zu färben.

Barcoding ermöglicht die gleichzeitige Färbung und Erfassung der gepoolten Proben mittel