Entwicklung einer Neuronen- und Makrophagen-Kokultur in vitro

Beginnen Sie mit isolierten murinen Spinalganglienneuronen in einem Wachstumsmedium.

Säen Sie sie auf eine polymerbeschichtete Multi-Well-Platte, um die neuronale Anheftung zu fördern.

Nehmen Sie als nächstes eine sezierte, eingeschläferte Maus und injizieren Sie eiskaltes PBS in ihre Bauchhöhle.

Massieren Sie sanft das Bauchfell, um Makrophagen von der Peritoneumwand zu lösen.

Drücken Sie die Maus zusammen, um die Bauchfellflüssigkeit zu sammeln, und behandeln Sie sie mit einem Lysepuffer, um die roten Blutkörperchen, die als Verunreinigungen erscheinen, selektiv zu lysieren. Zentrifugieren und resuspendieren Sie die Zellen in einem Kulturmedium.

Übertragen Sie die Makrophagen auf einen porösen Einsatz, der in der Vertiefung mit den kultivierten Neuronen positioniert ist.

Diese Co-Kultur ermöglicht es, dass Neuronen und Makrophagen in unmittelbarer Nähe sind.

Behandeln Sie die Co-Kultur mit db-cAMP und inkubieren Sie, um den Eintritt in die Zellen zu erleichtern. Dadurch werden die Neuronen aktiviert, um die Signalmoleküle auszuschütten.

Diese Signalmoleküle veranlassen zusammen mit db-cAMP Makrophagen, einen pro-regenerativen Phänotyp anzunehmen und essentielle Faktoren für das W