Isolierung fluoreszenzmarkierter Neuronen aus einem Gehirn von Mäusen

Nehmen wir eine transgene Mausrinde, die fluoreszierende Protein-exprimierende Neuronen enthält.

Befestigen Sie es auf einem Probenhalter.

Montieren Sie den Halter auf der Vibratomus-Schale mit sauerstoffhaltigem aCSF, um die physiologischen Bedingungen des Gewebes zu erhalten.

Mit den eingestellten Parametern erhalten Sie koronale Schnitte.

Legen Sie die Scheiben in einen Netzhalter, der sauerstoffhaltiges aCSF und Aktivitätsblocker enthält, um sie zu stabilisieren.

Behandeln Sie die Scheiben mit Proteasen, um die extrazelluläre Matrix zu verdauen und die Zellen zu lockern.

Mit Liquor waschen, um die Proteasen zu entfernen.

Übertragen Sie die Scheiben auf eine Kulturplatte mit aCSF und Serum.

Unter einem Fluoreszenzmikroskop werden Schnittbereiche mit fluoreszierenden Neuronen präpariert.

Übertragen Sie die präparierten Fragmente in ein Röhrchen, das Liquor und Serum enthält.

Dissoziieren Sie das Gewebe mechanisch, um eine einzellige Suspension zu bilden. Übertragen Sie die Zellen auf eine Kulturplatte, die aCSF enthält.

Verwenden Sie unter einem Fluoreszenzmikroskop eine Kapillarpipette, um fluoreszierende Neuronen zu sammeln.

Geben Sie diese Neuronen zur weiteren Analyse in eine