Beurteilung der strukturellen Integrität der neuromuskulären Verbindungen des dorsalen Längsmuskels bei Drosophila

Beginnen Sie mit chemisch fixierten Wildtyp- und transgenen Drosophila-Thoracas in einem Puffer.

Bei transgenen thoraken enthalten die neuromuskulären Verbindungen der dorsalen Längsmuskulatur Neuronen, die ein mutiertes Protein exprimieren, das die Neurodegeneration induziert.

Entfernen Sie den Puffer und frieren Sie die Thorsen schockfrosten, um Gewebeschäden während der Bisektionierung zu vermeiden.

Frischen Puffer hinzufügen und die Thorazen in die Sezierschalen geben.

Positionieren Sie einen Thorax mit der Bauchseite nach oben und entfernen Sie die Nervenzellcluster, um die Mittellinie freizulegen.

Halbieren Sie entlang der Mittellinie, um Hemithoraces zu erhalten.

Überschüssiges Gewebe entfernen.

Inkubieren Sie die Hemithoraces in einem Blockierungspuffer, um die Membranen zu permeabilisieren und eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.

Fügen Sie Fluorophor-konjugierte Antikörper hinzu, die auf ein Glykoprotein abzielen, das in NMJ-Neuronen und Muskelaktinfilamenten exprimiert wird.

Entfernen Sie ungebundene Antikörper.

Ordnen Sie die Hemithoraces auf einem Brückenschlitten an, fügen Sie Einbettmedien hinzu und montieren Sie die Taschentücher.

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