Analyse der Calciumdynamik und der Membranpotentialänderungen in einem arteriolären Endothel der Maus

Sichern Sie eine arterioläre Endothelröhre, die aus einem Mäusegehirn entnommen wurde, in einer Kammer mit einem kontinuierlichen Pufferfluss.

Platzieren Sie die Kammer in einem Aufnahme-Setup.

Führen Sie einen kalziumempfindlichen Fluoreszenzfarbstoff ein. Inkubieren, um die zelluläre Aufnahme des Farbstoffs zu ermöglichen.

Waschen Sie, um nicht verinnerlichte Farbstoffe zu entfernen.

Führen Sie eine Elektrode in eine Endothelzelle ein und erfassen Sie das Ruhemembranpotential.

Erhöhen Sie die Badtemperatur auf eine physiologische Temperatur, um die intrazelluläre Kalziumbindung an den Farbstoff zu erleichtern.

Anregung des Farbstoffs und Messung der Fluoreszenz, um den zellulären Kalziumspiegel zu Beginn zu quantifizieren.

Einführung eines Medikaments, das an spezifische G-Protein-gekoppelte Rezeptoren auf den Endothelzellen bindet und so eine Signalkaskade in Gang setzt.

Diese Kaskade setzt Kalziumionen aus dem endoplasmatischen Retikulum in das Zytoplasma frei, wodurch die Kalzium-Farbstoff-Bindung und die Fluoreszenz verbessert werden.

Erhöhte zytoplasmatische Kalziumspiegel aktivieren auch Kaliumkanäle, was den Ausfluss von Kaliumionen erleichtert und das Membranpotenzial verringert

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