Ultrastrukturelle Analyse eines Schnitts aus dem Gehirn einer Maus mittels Transmissionselektronenmikroskopie

Nehmen Sie einen Osmiumtetroxid-fixierten Abschnitt des Gehirns einer Maus, der in einen Harzblock eingebettet ist.

Rufen Sie ein Schnittbild ab, und richten Sie es an einem vorbereiteten Atlasbild aus, um den interessierenden Bereich zu identifizieren.

Markieren Sie die Grenzen dieses Bereichs auf dem Block.

Erhitzen Sie das Harz, um es weicher zu machen und den markierten Bereich herauszuschneiden.

Kleben Sie das Exemplar auf eine Glashaltestange und schneiden Sie es ab.

Bereiten Sie mit einem Ultramikrotom halbdünne und ultradünne Schnitte vor.

Übertragen Sie die halbdünnen und ultradünnen Schnitte auf Glasträger bzw. Nickelgitter

.

Färben Sie die halbdünnen Schnitte mit einem Farbstoff, der an Nukleinsäuren, ribosomenreiches Zytoplasma und die extrazelluläre Matrix bindet.

Waschen Sie die Schnitte und untersuchen Sie sie unter einem Lichtmikroskop, um das Vorhandensein des Zielbereichs zu bestätigen.

Betrachten Sie die ultradünnen Schnitte unter einem Transmissionselektronenmikroskop.

Osmiumtetroxid erhöht die Elektronendichte von Zell- und Organellenmembranen und bietet einen hohen Kontrast zu dem weniger elektronendichten Zytoplasma, was die Visualisierung der zellulären Ultrastruktur e