JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurowissenschaften
0 Ansichten • 2:23 Min. • June 17th, 2025
Nehmen Sie den Plexus choroideus aus einem Mäusegehirn in einem Probenkorb.
Das Gewebe, das sich in den Hirnventrikeln befindet, enthält eine Schicht von Epithelzellen mit Mikrovilli auf ihrer apikalen Oberfläche.
Inkubieren Sie das Gewebe in einer Fixierlösung, um seine Zellarchitektur zu erhalten.
Mit einem Puffer waschen, um überschüssiges Fixiermittel zu entfernen und den pH-Wert zu stabilisieren.
Inkubieren Sie das Gewebe mit Osmiumtetroxid, das an die Lipide der Zellmembran bindet und die Membranstabilität bewahrt, und spülen Sie dann überschüssiges Reagenz ab.
Dehydrieren Sie das Gewebe mit steigenden Alkoholkonzentrationen, um eine Gewebeverzerrung während der Bildgebung zu vermeiden.
Trocknen Sie das Gewebe, befestigen Sie es auf einer kohlenstoffbeschichteten Probenhalterung und beschichten Sie es dann mit einer leitfähigen Platinschicht.
Mit Hilfe der Rasterelektronenmikroskopie wird ein Elektronenstrahl auf die Oberfläche fokussiert. Die Platinschicht leitet Elektronen ab, verhindert den Ladungsaufbau und minimiert Bildartefakte.
Ein Detektor fängt die von der Oberfläche zurückgestreuten Elektronen ein und erzeugt ein Bild des Gewebes, das Epithelzellen mit Mikrovilli aufweist.
Um die Probenvorbereitung für das REM durchzuführen, überführen Sie den frisch isolierten Plexus choroideus in eine frisch hergestellte Fixierungslösung und inkubieren Sie ihn über Nacht bei 4 Grad Celsius. Sobald dies erledigt ist, waschen Sie die Probe dreimal mit 3 bis 5 Millilitern 0,1 molaren Natriumcacodylatpuffer für jeweils fünf Minuten.
Fixieren Sie die Proben 30 Minuten lang in 3 bis 5 Millilitern 2 % Osmiumtetroxid in 0,1 molaren Natriumcacodylatpuffer. Waschen Sie die Proben dann dreimal für jeweils fünf Minuten mit 3 bis 5 Millilitern Reinstwasser. Anschließend werden die Proben in einer zunehmenden Reihe von eiskalten Ethylalkoholkonzentrationen mit 15 Minuten pro Ethylalkohollösung dehydriert. Verwenden Sie einen Trockner an kritischen Punkten, um die Probe richtig zu trocknen. Positionieren Sie die Probe vorsichtig auf einer Probenhalterung mit einem Kohleaufkleber und visualisieren Sie die Proben des Aderhautplexus mit dem REM.
In diesem Artikel wird ein Protokoll für die Mikrodissektion und die Ganzpräparat-Darstellung des Zerebrospinalflüssigkeitsplexus der Maus mittels Rasterelektronenmikroskopie (REM) beschrieben. Die Methode ermöglicht die hochauflösende Abbildung der epithelialen Zellschicht des Gewebes und ihrer Mikrovilli und liefert strukturelle Einblicke in diesen spezialisierten Bereich des Gehirns.
Mithilfe der hochauflösenden Visualisierung des Maus-Choroidplexus mittels Rasterelektronenmikroskopie (REM) lässt sich die Architektur der epithelialen Zellen und der Mikrovilli detailliert beurteilen, was mechanistische Untersuchungen von Blut-Hirn-Schrankengeweben unterstützt. Diese Fähigkeit ist entscheidend für frühe Entdeckungsteams, die gewebespezifische Morphologien klären und biologische Hypothesen in neuropharmazeutischen Entwicklungsprojekten entrisiken möchten. Zuverlässige ultrasruckturelle Bildgebung trägt durch die Bereitstellung quantitativer morphologischer Referenzgrößen zur Zielvalidierung und translationsmedizinischen Forschung bei.
Dieses auf SEM basierende Protokoll integriert sich in den Übergang von der Entdeckung zur präklinischen Phase, indem es robuste morphologische Daten für die Hypothesenprüfung und Modellvalidierung bereitstellt.
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Zuletzt aktualisiert: 22 August 2026