Was ist der Choroid-Plexus?

Der Choroid-Plexus ist ein Netzwerk von Zellen in den Gehirnventrikeln, das für die Produktion von Liquor verantwortlich ist.

Warum ist die Fixierung bei der Probenvorbereitung wichtig?

Die Fixierung bewahrt die Zellstruktur und verhindert den Abbau während nachfolgender Verarbeitungsschritte.

Welche Rolle spielt Osmiumtetroxid im Protokoll?

Osmiumtetroxid bindet an Lipide der Zellmembranen und stabilisiert die Membranen für eine bessere Bildgebung.

Wie wirkt sich die Dehydratisierung auf Gewebeproben aus?

Die Dehydratisierung verhindert eine Verzerrung der Gewebestruktur während der Bildgebung durch Entfernung des Wassergehalts.

Was ist der Zweck der Beschichtung der Probe mit Platin?

Die Platinschicht leitet Elektronen während der REM ab, verhindert Ladungsaufbau und minimiert Bildartefakte.

Visualisierung eines Aderhautplexus des Mausgehirns mittels Rasterelektronenmikroskopie

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

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Nehmen Sie den Plexus choroideus aus einem Mäusegehirn in einem Probenkorb.

Das Gewebe, das sich in den Hirnventrikeln befindet, enthält eine Schicht von Epithelzellen mit Mikrovilli auf ihrer apikalen Oberfläche.

Inkubieren Sie das Gewebe in einer Fixierlösung, um seine Zellarchitektur zu erhalten.

Mit einem Puffer waschen, um überschüssiges Fixiermittel zu entfernen und den pH-Wert zu stabilisieren.

Inkubieren Sie das Gewebe mit Osmiumtetroxid, das an die Lipide der Zellmembran bindet und die Membranstabilität bewahrt, und spülen Sie dann überschüssiges Reagenz ab.

Dehydrieren Sie das Gewebe mit steigenden Alkoholkonzentrationen, um eine Gewebeverzerrung während der Bildgebung zu vermeiden.

Trocknen Sie das Gewebe, befestigen Sie es auf einer kohlenstoffbeschichteten Probenhalterung und beschichten Sie es dann mit einer leitfähigen Platinschicht.

Mit Hilfe der Rasterelektronenmikroskopie wird ein Elektronenstrahl auf die Oberfläche fokussiert. Die Platinschicht leitet Elektronen ab, verhindert den Ladungsaufbau und minimiert Bildartefakte.

Ein Detektor fängt die von der Oberfläche zurückgestreuten Elektronen ein und erzeugt ein Bild des Gewebes, das Epithelzellen mit Mikrovilli aufweist.

Um die Probenvorbereitung für das REM durchzuführen, überführen Sie den frisch isolierten Plexus choroideus in eine frisch hergestellte Fixierungslösung und inkubieren Sie ihn über Nacht bei 4 Grad Celsius. Sobald dies erledigt ist, waschen Sie die Probe dreimal mit 3 bis 5 Millilitern 0,1 molaren Natriumcacodylatpuffer für jeweils fünf Minuten.

Fixieren Sie die Proben 30 Minuten lang in 3 bis 5 Millilitern 2 % Osmiumtetroxid in 0,1 molaren Natriumcacodylatpuffer. Waschen Sie die Proben dann dreimal für jeweils fünf Minuten mit 3 bis 5 Millilitern Reinstwasser. Anschließend werden die Proben in einer zunehmenden Reihe von eiskalten Ethylalkoholkonzentrationen mit 15 Minuten pro Ethylalkohollösung dehydriert. Verwenden Sie einen Trockner an kritischen Punkten, um die Probe richtig zu trocknen. Positionieren Sie die Probe vorsichtig auf einer Probenhalterung mit einem Kohleaufkleber und visualisieren Sie die Proben des Aderhautplexus mit dem REM.