Name: Bewertung der Wirksamkeit der Krebsmedikament Sensibilisierung In-vitro- Und In-vivo- (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Erfahren Sie die Bewertung der Krebsmedikament-Sensibilisierung durch Messung des Zellstoffwechsels in vitro und der Metastasierungsfrequenz in vivo am Hühnerembryo-Modell. Diese Methode ermöglicht die gleichzeitige Analyse von Arzneimittelwirkungen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit durch Zuschüsse zu JK aus den Ontario Centres of Excellence und dem Ontario Research Fund ermöglicht. Wir möchten Siddika Pardhan und Dr. Peter Ferguson, um technische Unterstützung während der Dreharbeiten zu danken.

HINWEIS: Das folgende Protokoll wurde für den Einsatz mit anhaftenden Zellen ausgelegt. Modifikationen sind erforderlich, um das Verfahren zur nicht-adhärenten Zellen in Suspension gezüchtet anzuwenden. Die in dem Protokoll beschrieben CAM Experimente sind zur Verwendung mit Zellen, die einen fluoreszierenden Marker (zB GFP, RFP etc.) zu exprimieren gestaltet. Neun Tage alten Hühnerembryonen werden am Tag 2 des Versuchsprotokoll für die CAM-Experimente erforderlich. 1. Vorbereitung und Transfektion von Tumorzellen mit Antisense-Oligonukleotide (ASOs) <ol><li> Absaugen Medium aus T75-Flasche (n), die Zellen von Interesse, Wäsche mit 1 × PBS und 2 ml 0,25% Trypsin / EDTA. 10 ml vollständigem Wachstumsmedium zu jedem Kolben und übertragen die Zellen in einer Lösung in ein 50 ml Röhrchen. Zählen Sie die Zellen und die Lautstärke anpassen, so dass die Endkonzentration 1,0x10 5 Zellen pro ml. </li><li> Label zwei Gruppen von T25-Kolben: eine Gruppe acht Flaschen, beschriftet 1-8 enthalten und wird u seinsed für die Echtzeit-Stoffwechselmessung Experiment; und die zweite Gruppe enthält auch 8 Kolben und wird für den Hühnerembryo-CAM-Experiment verwendet werden. 2 ml Zellen in Lösung in jeden Kolben und in den Brutschrank (37 ° C, 5% CO 2 O / N). </li><li> Am nächsten Morgen (Tag 0, Zeit 0), Etiketten drei 5-ml-Röhrchen wie folgt: Kontrolle (nicht-Targeting ASO oder siRNA), &quot;Ziel von Interesse&quot; (dh Ziel ASO oder siRNA) und Lipofectamin 2000 (oder eine ähnliche Transfektionsreagenz). Von der Stammlösungen ASO auf die geeignete Konzentration mit serumfreiem Medium in das entsprechende Rohr. <ol><li> Die erforderliche Menge des Transfektionsreagenz an die entsprechende Röhre und Inkubieren in einem serumfreien Medium für 5 min. Fügen Sie das Transfektionsreagenz Lösung für die ASO Rohre und Inkubation für 20 min. </li></ol></li><li> Fügen Sie 250 ul Steuer ASO Transfektionsreagenz Lösung zu jedem der Kolben 1-4 in jeder Gruppe, und 250ul &#39;Ziel von Interesse&#39; ASO Transfektionsreagenz Lösung zu jedem der Kolben 5-8 in jeder Gruppe. Inkubieren für 4 h (37 ᵒC, 5% CO 2). <ol><li> Während der Inkubation, führen Sie die in Abschnitt 2.1 beschriebenen Schritte. Nach der Inkubation werden 3 ml Vollmedium zu jedem Kolben in der CAM Experimentalgruppe und zurück in den Inkubator O / N (37 ᵒC, 5% CO 2). Verarbeiten Sie den Stoffwechsel Experiment Gruppe gemäß der Beschreibung in Abschnitt 2.2. Verarbeiten Sie die CAM Versuchsaufbau gemäß der Beschreibung in Abschnitt 4. </li></ol></li></ol> 2. Biosensorchip Vorbereitung und Zellaussaat <ol><li> In einer sterilen Umgebung, sorgfältig zu waschen sechs Biosensor-Chips mit 400 ul PBS. Sterilisation der Späne mit 400 ul 70% Ethanol für 20 min. Dreimal mit 400 ul PBS waschen. <ol><li> Legen Sie die Chips in sterile Gewebe culture Gerichte, um eine Kontamination zu verhindern. Platzieren Sie drei Chips in einer Schale &quot;Kontrolle&quot; bezeichnet, und drei in einer Schale &quot;Ziel von Interesse&quot; bezeichnet. </li></ol></li><li> Beschriften Sie zwei 50-ml-Röhrchen als &quot;Kontrolle&quot; und &quot;Ziel von Interesse&quot;. Waschen Sie die Zellen mit PBS und füge eine entsprechende Volumen von 0,25% Trypsin / EDTA. Warten Sie, bis die Monolage ablöst und sammeln Sie die Zellen aus jedem Kolben. Zahlen Sie die Lösung in die entsprechenden Röhrchen. <ol><li> Zählen Sie die Zellen und die Lautstärke anpassen, so dass die Endkonzentration 6.0x10 5 Zellen / ml. Zentrifugieren und Resuspendieren der Zellen, wenn der Anfangskonzentration zu niedrig ist. </li></ol></li><li> Nach Eintragen von 250 ul der Zelllösung zu jeder Biosensorchip in der entsprechenden Gruppe (für insgesamt 1.25x10 5 Zellen pro Chip). Erfüllen diese Aufgabe eine Gruppe zu einer Zeit, um die Gefahr der Verwechslung der Chips zu minimieren. Legen Sie die sterile Gerichte, die die Chips in eine feuchte Kammer, um Verdunstung zu vermeiden, und legen Sie die Luftfeuchtigkeit chamber im Inkubator O / N (37 ᵒC, 5% CO 2). </li><li> Am nächsten Morgen (Tag 1), sorgfältig absaugen Medium von jedem Chip und ersetzen sie durch 250 ul Wachstumsmedium mit 0,2% fötalem Rinderserum (FBS) und 1x Penicillin und Streptomycin (P / S) ergänzt. Inkubieren für 4 h (37 ᵒC, 5% CO 2). </li></ol> 3. Stoffwechselmesssystem Vorbereitung und Herstellung der Lösung <ol><li> Während der Inkubation vorbereiten die erforderlichen Medikamentenlösungen und den Stoffwechsel Messsystem für die kommende Test. HINWEIS: Der Stoffwechsel-Messsystem besteht aus insgesamt sechs Modulen. Jedes Modul bietet Platz für ein Chip pro Experiment. <ol><li> Unterteilen Sie den Test in den folgenden Versuchsgruppen: einem Chip von jedem der &quot;Kontrolle&quot; und &quot;Ziel Sehenswürdigkeit Gruppen Fahrzeug für die Dauer des Tests zu empfangen; zwei Chips aus jeder Gruppe auf eine medikamentöse Therapie für eine definierte Zeitdauer, während der ein Empfangsssay, mit einem Fahrzeug folgen während der Auswaschphase. </li><li> Für Drogen Sensibilisierung Studien, ändern Sie die Länge, Timing und Konzentration der medikamentösen Behandlung, die bestimmtes Medikament in Frage zu entsprechen. HINWEIS: Cisplatin, die folgenden Schritte wurden empirisch mit A549-Zellen bestimmt und können variieren je nach Zelllinie. Führen alle Stufen mit der Standardflussrate von 4 &amp; mgr; l / min. 6 h Wachstumsmedium + 0,2% FBS und 1 x P / S 24-Stunden von 6 uM Cisplatin in Medium + 0,2% FBS 1x P / S 24-Stunden-Wachstumsmedium + 0,2% FBS und 1 x P / S 18 Stunden des Wachstums-Medium + 0,2% FBS und 1 x P / S 4 h 0,1% Triton-X HINWEIS: Bei Abweichungen von diesen Schritten wird die Berechnung erfordern, um das erforderliche Volumen des Mediums und Arzneimittellösungen auf der Grundlage der Soll-Strömungsrate und der Dauer des Experiments zu bestimmen. Die folgenden Abschnitte sind auf den oben beschriebenen Schritten basieren. </li></ol></li><li> Label und füllen vierzehn 50-ml-Röhrchen mit 50 ml Wachstumsmedium + 0,2% FBS eind 1x P / S. Sie sechs in einem Metabolismus Meßsystem Röhrchengestell, sechs in dem anderen, und die verbleibenden zwei in einer dritten Rohrgestell, das auch Rohre mit Cisplatin. Dichten Sie die ersten zwei Racks mit einem luftdurchlässigen Membran um Verdunstung zu verhindern. </li><li> Bereiten Sie eine Lösung von 6 uM Cisplatin (der entsprechende Volume) in Medium + 0,2% FBS mit 1x P / S. Verzichten die gewünschte Lautstärke von Cisplatin-Lösung in vier markierten 50-ml-Röhrchen. <ol><li> Die Röhrchen in den verbleibenden vier Nuten der dritten Stoffwechsel Meßrohr Rack. Sicherzustellen, dass die Röhren in die entsprechenden Schlitze, die zu den gewünschten biomodules entsprechen platziert. Verschließen Sie die Röhrchen mit einer luftdurchlässigen Membran. </li></ol></li><li> Bereiten Sie und beschriften sechs 50-ml-Röhrchen und füllen sie mit je 20 ml 0,1% Triton-X-Lösung im Medium. Der Triton-X-Lösung wird alle verbleibenden Zellen zu lysieren und eine &quot;Null&quot; Wert für jeden Chip. Die Röhrchen in einem vierten Stoffwechsel Meßeinheit Rohrgestell und abdichten with ein Luft permable Membran übermäßiger Verdunstung zu verhindern. </li><li> Legen Sie die Chips in die biomodules und leitet das Experiment. </li></ol> 4. CAM Experiment Drug Treatment und Einspritzung HINWEIS: Die Schritte und Verfahren zur Herstellung der Hühnerembryonen für ein CAM-Experiment werden an anderer Stelle 19 beschrieben <ol><li> Beginnen Sie die Bearbeitung des CAM Experiment 48 Stunden nach der Transfektion (Tag 2). Unterteilen die &quot;Kontrolle&quot; und &quot;Ziel von Interesse Gruppen in zwei Flaschen für Fahrzeug und zwei für Cisplatin. Absaugen Medium aus den Kolben und füllt mit entweder 3 ml frisches Medium oder 6 uM Cisplatin. Inkubieren für 6 h (37 ᵒC, 5% CO 2). </li><li> Saugen Sie das Medium, dann waschen und trypsinieren der Zellen; sammeln die Zellen mit Trypsin in Lösung in vier entsprechend gekennzeichnete 15-ml-Röhrchen. <ol><li> Zentrifuge und waschen Sie die Zellen dreimal mit PBS. Re-suspendieren des Zellpellets in 5 ml PBS einemd die Zellen zu zählen. </li><li> Stellen Sie die Lautstärke so dass die endgültige Zellkonzentration ist 1,0x10 6 Zellen / ml. Übertragen Sie die Zell-Lösung in beschriftete 5-ml-Röhrchen zur Injektion, und legen Sie auf dem Eis. Der Injektion invertieren die Röhren vorsichtig vor, um sicherzustellen, dass die Zellen gut vermischt. </li></ol></li><li> Beiseite insgesamt 24 Hühnerembryonen (9 Tage alt) für die Injektion (6 pro Gruppe). Führen die Injektion unter Verwendung einer Glasnadel, um einen Schlauch mit einer 1 ml Spritze verbunden angebracht. Die individuelle Durchführung der Injektion sollte der Behandlungsgruppe blenden lassen. <ol><li> Mit einem Stereomikroskop zu injizieren 1,0x10 5 Zellen in einem Volumen von 100 ul in die venöse Zirkulation des CAM. Verwenden Sie eine lange, pulsierende Technik, um das volle Volumen von Zellen injizieren. Vorsichtig abtupfen die Injektionsstelle mit einem weichen abzuwischen, um den Blutfluss einzudämmen und zu absorbieren eventuelle Spritzer. Beschriften Sie jedes Embryo Behälter entsprechend nach jeder Injektion. </li></ol></li><li> Bestätigen Sie die Präsenz und Verteiteilung von fluoreszierenden Zellen in das Gefäßsystem des CAM nach der Injektion durch die Visualisierung sie mit einem Fluoreszenzmikroskop. Beachten Sie bitte die Embryonen, bei denen die Zahl der Tumorzellen scheint gering, oder die Verteilung ist schlecht. </li><li> Legen Sie die Hühnerembryonen in einer feuchten Kammer und speichern sie in einem Inkubator (37 ° C, Luftfeuchtigkeit 60%). Warten Sie 7-9 Tage vor der Aufzählung Metastasenherde. </li></ol> 5. metastasiertem Fokus Enumeration <ol><li> Während der 7-9 Tage Inkubationszeit überwachen die Embryonen und entsorgen Sie alle Toten. Sicherzustellen, dass der Feuchtigkeitskammer feucht bleibt zu allen Zeiten während der Inkubationszeit. </li><li> Verwendung eines Fluoreszenz-Stereomikroskop bei 20-facher Vergrößerung, scannen die gesamte Oberseite des Embryos CAM in einem regelmäßigen, gitterartiges Muster. </li><li> Die Anzahl der Metastasenherde in jedem Blickfeld, dann überein die Anzahl für eine abschließende Gesamt pro Embryo. Dies für die sechs Embryonen in jeder Gruppe eine durchschnittliche Zahl o liefernf metastatischen Foci pro Behandlung. </li></ol>

<ol><li>Bouwman, P., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+deregulated+DNA+damage+signalling+on+cancer+chemotherapy+response+and+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The effects of deregulated DNA damage signalling on cancer chemotherapy response and resistance.</a> Nat Rev Cancer. 12, 587-598 (2012).</li>
<li>Bozic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+dynamics+of+cancer+in+response+to+targeted+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Evolutionary dynamics of cancer in response to targeted combination therapy.</a> Elife. 2, e00747(2013).</li>
<li>Diaz, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+evolution+of+acquired+resistance+to+targeted+EGFR+blockade+in+colorectal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The molecular evolution of acquired resistance to targeted EGFR blockade in colorectal cancers.</a> Nature. 486, 537-540 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+BRCA2+and+Thymidylate+Synthase+Creates+Multidrug+Sensitive+Tumor+Cells+via+the+Induction+of+Combined+%27Complementary+Lethality%27%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">Inhibition of BRCA2 and Thymidylate Synthase Creates Multidrug Sensitive Tumor Cells via the Induction of Combined 'Complementary Lethality'.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 2, e78(2013).</li>
<li>Lord, C. J., Ashworth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DNA+damage+response+and+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The DNA damage response and cancer therapy.</a> Nature. 481, 287-294 (2012).</li>
<li>Helleday, T., Petermann, E., Lundin, C., Hodgson, B., Sharma, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+repair+pathways+as+targets+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">DNA repair pathways as targets for cancer therapy.</a> Nat Rev Cancer. 8, 193-204 (2008).</li>
<li>Shaheen, M., Allen, C., Nickoloff, J. A., Hromas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+lethality%3A+exploiting+the+addiction+of+cancer+to+DNA+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Synthetic lethality: exploiting the addiction of cancer to DNA repair.</a> Blood. 117, 6074-6082 (2011).</li>
<li>Green, S., Benedetti, J., Smith, A., Crowley, J. Clinical trials in oncology. 28, CRC press. (2012).</li>
<li>Begley, C. G., Ellis, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+development%3A+Raise+standards+for+preclinical+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Drug development: Raise standards for preclinical cancer research.</a> Nature. 483, 531-533 (2012).</li>
<li>Galluzzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+definitions+of+cell+death+subroutines%3A+recommendations+of+the+Nomenclature+Committee+on+Cell+Death+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Molecular definitions of cell death subroutines: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2012.</a> Cell Death Differ. 19, 531-533 (2012).</li>
<li>Ruggeri, B. A., Camp, F., Miknyoczki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+disease%3A+pre-clinical+animal+models+of+cancer+and+their+applications+and+utility+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models of disease: pre-clinical animal models of cancer and their applications and utility in drug discovery.</a> Biochem Pharmacol. 87, 150-161 (2014).</li>
<li>Kwon, M. C., Berns, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mouse models for lung cancer.</a> Mol Oncol. 7, 165-177 (2013).</li>
<li>Young, M., Ordonez, L., Clarke, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+the+best+routes+to+effectively+model+human+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">What are the best routes to effectively model human colorectal cancer.</a> Mol Oncol. 7, 178-189 (2013).</li>
<li>Sharma, S. V., Haber, D. A., Settleman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line-based+platforms+to+evaluate+the+therapeutic+efficacy+of+candidate+anticancer+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cell line-based platforms to evaluate the therapeutic efficacy of candidate anticancer agents.</a> Nat Rev Cancer. 10, 241-253 (2010).</li>
<li>Garnett, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+identification+of+genomic+markers+of+drug+sensitivity+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Systematic identification of genomic markers of drug sensitivity in cancer cells.</a> Nature. 483, 570-575 (2012).</li>
<li>Alborzinia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+monitoring+of+cisplatin-induced+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time monitoring of cisplatin-induced cell death.</a> PLoS One. 6, e19714(2011).</li>
<li>Cvetkovic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KISS1R+induces+invasiveness+of+estrogen+receptor-negative+human+mammary+epithelial+and+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">KISS1R induces invasiveness of estrogen receptor-negative human mammary epithelial and breast cancer cells.</a> Endocrinology. 154, 1999-2014 (2013).</li>
<li>Leong, H. S., Chambers, A. F., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+cancer+cell+migration+and+metastatic+growth+in+vivo+in+the+chick+embryo+using+fluorescence+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessing cancer cell migration and metastatic growth in vivo in the chick embryo using fluorescence intravital imaging.</a> Methods Mol Biol. 872, 1-14 (2012).</li>
<li>Hung, Y. P., Albeck, J. G., Tantama, M., Yellen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cytosolic+NADH-NAD%28%2B%29+redox+state+with+a+genetically+encoded+fluorescent+biosensor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Imaging cytosolic NADH-NAD(+) redox state with a genetically encoded fluorescent biosensor.</a> Cell Metab. 14, 545-554 (2011).</li>
<li>Tantama, M., Hung, Y. P., Yellen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+intracellular+pH+in+live+cells+with+a+genetically+encoded+red+fluorescent+protein+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Imaging intracellular pH in live cells with a genetically encoded red fluorescent protein sensor.</a> J Am Chem Soc. 133, 10034-10037 (2011).</li>
<li>Rytelewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BRCA2+inhibition+enhances+cisplatin-mediated+alterations+in+tumor+cell+proliferation%2C+metabolism%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Onc%22%5BJournal%5D)">BRCA2 inhibition enhances cisplatin-mediated alterations in tumor cell proliferation, metabolism, and metastasis.</a> Mol. Onc. 8 (8), 1429-1440 (2014).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Aufgrund der inhärenten Kosten und Risiken im Zusammenhang mit klinischen Studien, es notwendig ist, bessere und strengere präklinischen Testverfahren, um neue Anti-Krebs-Behandlung nicht ausreichend adäquat bewerten zu entwickeln. Strom häufigsten verwendeten Techniken alle Schwächen aufweisen, die ihre Fähigkeit, zwischen potentiell vielversprechende therapeutische Ziele / Agenten diskriminieren begrenzen kann, und jene, die weniger wirksam sein kann. Wir entwickelten ein Protokoll, um neue anti-Krebs Ansätze, die vie...

Erworbener Resistenz gegen gezielte und / oder zytotoxischen Krebsbehandlung ist ein wichtiges klinisches Problem, die zum Therapieversagen, Rückfall führen kann, und eine erhöhte Patientensterblichkeit 1. Angesichts der hohen Heterogenität in den meisten Tumoren, es ist eine mathematische Gewissheit, dass ein Tumor ausreichend hohe Zellzahl wird eine Untergruppe von Zellen resistent gegen einzelne oder kombinierte Therapien, die molekularen Wege, auf denen diese Zellen hängen zum Überleben 2,3 enthalten. Solche Tumorzellen können für den während der Behandlung ausgewählt werden, was zu einem Rezidiv. Entwicklung neuer Therapien, die gleichzeitig unterschiedliche Zielkrebszellüberlebensmechanismen, entweder vor oder nach der Behandlung vermittelte Selektion ist deshalb klinisch wichtig. Ein hohes Maß an Genominstabilität und Mutation in Tumor Genome ist eine grundlegende Eigenschaft, die Krebszellen aus Nicht-Tumorwirtszellen 4 unterscheidet. Folglich wird ein useful-Strategie, um die Wirksamkeit von DNA-schädigenden Chemotherapie zu erhöhen und die Entwicklung einer Resistenz zu verhindern ist, DNA-Reparatur hemmen aktiv in Tumorzellen 5. Dies ist ein aktives Forschungsgebiet und eine Vielzahl von neuen DNA-Reparatur-Ziele werden in einem präklinischen Einstellung erforscht. Eine Anzahl von kleinen Molekülen oder Antisense-basierte Inhibitoren dieser Ziele entwickelt und werden in der Erprobung 6-8. Das Ziel ist es, die vielversprechendsten präklinischen Kandidaten in klinischen Studien zu erkennen und bewerten ihre Sicherheit und Wirksamkeit. Die hohen Kosten der klinischen Versuche und die Gefahr einer Störung (für eine Vielzahl von Gründen, einschließlich suboptimaler präklinische Bewertung) sind gewaltige Hindernisse in die Entwicklung von neuen Therapien 9 voran. Die Verwendung geeigneter und strengen präklinischen Modellen angemessen neue therapeutische Targets und Wirkstoffkandidaten beurteilen kann die hohe Ausfallrate von 10 klinischen Studien zu verringern </sup&gt;. A) Messung der Fähigkeit, die Tumorzellproliferation in vitro (Zellproliferationsassays), b) Therapie-induzierte Verringerung der Kapazität von Tumorzellen zu verringern: Einige häufig verwendete vorklinischen Verfahren, die Wirksamkeit von neuen Antikrebs-Therapien sind, beurteilen Form Gewebekulturkolonien (kolonieBildungsTests), c) Therapie-induzierte Verringerung des Tumorzellstoffwechselaktivität in vitro (Redoxfarbstoff Umwandlung), d) Therapie-induzierte Induktion in vitro Tumorzelltodes (Apoptose, Nekrose, phage, zugeordnet mit der Mitose und weitere) 11, und e) in vivo-Therapie-induzierte Reduktion des Wachstums oder der Ablation von menschlichen und Maus-Xenotransplantaten 12-14. Eine Hauptschwäche der angeführten in vitro Verfahren ist, dass keine von ihnen eine kontinuierliche Echtzeit-Auswertung der Wirkung der Kandidatentherapie. Vielmehr nur an ausgewählten, weit auseinanderZeitPunkten liefern sie Informationenwährend des Verlaufs der Behandlung. Solche Messungen haben Kapazitäten, um die Größe und den Zeitpunkt des Tumorzellantworten genau widerspiegeln vermindert. In vivo-Maus-Xenograft-Modelle werden auch durch hohe Kosten, Zeitdauer in Anspruch, und das Risiko von suboptimalen Dosierungen und Verabreichungszeitpunkt (Scheduling) begrenzt. Darüber hinaus gibt es Hinweise, dass Nager Xenotransplantatmodellen begrenzt Prädiktoren für die klinische Wirksamkeit in Menschen im Vergleich zu in-vitro-Bewertung der Reaktionen von primären humanen Tumorzellen und etablierten menschlichen Tumorzellinien Kandidaten therapeutische Interventionen 15,16. Wir entwickelten eine neuartige Kombinationsprotokoll neue Arzneimittelkombinationen vorklinisch auszuwerten, in einer Weise, die die Schwächen der oben genannten üblichere Verfahren adressiert. An die Stelle der Proliferation, Koloniebildung oder Redoxfarbstoff Umwandlung Tests verwendeten wir einen Stoffwechsel Maßeinheit Zelladhäsion, Atmung und die Versauerung in Echtzeit zu analysierenwährend des gesamten Behandlungszeitraums 17. Gleichzeitig untersuchten wir die Auswirkungen der Behandlung Kombination in vivo durch die Verwendung eines Hühnerembryo Chorioallantoismembran (CAM) Modell der Invasion und Metastasierung von 18,19. Wir verwendeten diese Methoden, um die Fähigkeit eines Antisense-Oligonukleotid (ASO) Targeting BRCA2, um die Wirksamkeit der üblicherweise verwendeten chemotherapeutischen Arzneimittel Cisplatin potenzieren bewerten.

<table><tbody><tr><td>A549 Zellen</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td>http://www.atcc.org/products/all/CCL-185.aspx</td></tr><tr><td>AeraSeal Film</td><td>Carl Roth GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AMEM</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>210-011-QK</td><td></td></tr><tr><td>Antisense Oligodeoxynukleotide</td><td>Avecia</td><td></td><td>BRCA2 Zielsequenz: 5' - UAAGGAACGUCAAGAGAUAC - 3' (Basen 7241-7259 )</td></tr><tr><td>Axio Zoom V16 Mikroskop</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>http://www.zeiss.ca/microscopy/en_ca/products/stereo-zoom-microscopes/axio-zoom-v16.html</td></tr><tr><td>Bionas Biosensor Chips</td><td>Bionas GmbH und Micronas GmbH</td><td>BIS8001D</td><td></td></tr><tr><td>Bionas Discovery 2500 System&nbsp;</td><td>Bionas GmbH</td><td></td><td>http://www.bionas-discovery.com/prodservices/instruments/system2500/</td></tr> <tr><td>Cisplatin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>479306</td><td></td></tr><tr><td>Befruchtete Hühnereier</td><td>Lokal bezogenes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>fötales Rinderserum&nbsp;</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000&nbsp;</td><td>Invitrogen - Life Technologies&nbsp;</td><td>12566014</td><td>http://www.lifetechnologies.com/ca/en/home/life-science/protein-expression-and-analysis/transfection-selection/lipofectamine-2000.html</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>311-010-CL</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin (0,25%)/EDTA</td><td>Wisent Bioproducts</td><td>325-043-CL</td><td></td></tr></tbody></table>

bewertung der wirksamkeit der krebsmedikament sensibilisierung<em&gt; in-vitro-</em&gt; und<em&gt; in-vivo-</em

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Aufgrund der hohen Heterogenität und Mutationen in der menschlichen Krebsarten, einzelnes Mittel Therapien oder Kombinationstherapien, die den gleichen Weg zielen, sind wahrscheinlich versagen. Der Nachdruck auf die Hemmung der Pfade bei der intrinsischen und / oder adaptive Therapieresistenz verantwortlich sind, platziert werden. Ein aktives Forschungsgebiet ist die Entwicklung und Erprobung von DNA-Reparatur-Inhibitoren, die die Wirkung von zu fördern und zu verhindern, Widerstand gegen, häufig verwendete Chemotherapie und Strahlentherapie. Wir verwendeten eine neue Methode, um die Wirksamkeit der BRCA2 Hemmung als Mittel zur Tumorzellen mit der DNA-schädigenden Medikament Cisplatin sensibilisieren bewerten. Tumorzellstoffwechsel (Versauerung und Atmung) wurde in Echtzeit über einen Zeitraum von 72 Stunden, um die Wirksamkeit der Behandlung auf einem von Minute zu Minute Grundlage abzugrenzen überwacht. In Kombination, eine Bewertung der metastatischen Frequenz führten wir mit einem Hühnerembryo Chorioallantoismembran (CAM) Modell der Extravasation und Invasion. DieseProtokoll behandelt einige Schwächen üblicherweise in vitro und in vivo-Verfahren verwendet werden, um neue Krebstherapieschemata zu bewerten. Es kann neben üblichen Methoden wie Zellproliferationsassays, Zelltod Assays verwendet werden, und in vivo murine Xenograft Studien genauer unter in Frage kommenden Zielen und Mitteln unterscheiden und wählt nur die aussichtsreichsten Kandidaten für eine weitere Entwicklung.

Ergebnisse und Zahlen mit Genehmigung aus veröffentlichten Arbeiten 22 angepasst. BRCA2 Hemmung induziert eine Abnahme der Atmung in Cisplatin behandelten Tumorzellen Menschen A549 Lungenkrebszellen mit BRCA2-Targeting ASO und Cisplatin zeigte eine frühe und irreversible Abnahme der Atmung, im Vergleich zu Zellen, die Steuer ASO und Cisplatin allein erhielt behandelt; nach 24 h Behandlung mit Cisplatin die Differenz in der Atmung zwischen BRCA...

Hier wird die Echtzeitüberwachung des Tumorzellstoffwechsels, kombiniert mit einem in vivo Modell der Chorio-Allantoismembran (CAM) der Metastasierung von Hühnerembryonen, verwendet, um neuartige Anti-Krebs-Ziele/Wirkstoffe auf ihre Fähigkeit hin zu bewerten, Tumorzellen für DNA-schädigende Chemotherapeutika zu sensibilisieren.

Bewertung der Wirksamkeit der Krebsmedikament Sensibilisierung<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und<em&gt; In-vivo-</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die Wirksamkeit der Sensibilisierung von Krebsmedikamenten durch Messung von Veränderungen des Zellstoffwechsels in vitro und der Metastasierungshäufigkeit in vivo zu bewerten. Dies wird erreicht, indem Krebszellen zunächst in vitro mit Antisense-Molekülen durchtrennt werden, um das gewünschte Ziel auszuschalten. Anschließend werden die transfizierten Zellen auf Biosensor-Chips plattiert und in ein Stoffwechselmesssystem geladen, um Veränderungen der Versauerung, der Atmung und der Adhäsion während der medikamentösen Behandlung aufzulisten.Unabhängig davon werden transfizierte Zellen mit einem Medikament behandelt und in den venösen Kreislauf eines Hühnerembryos injiziert, um die Auswirkungen auf die Metastasierungshäufigkeit zu bewerten. Die Ergebnisse zeigen eine Sensibilisierung von Krebsmedikamenten, die durch Veränderungen im Zellstoffwechsel und in der Metastasierungshäufigkeit veranschaulicht wird. Diese Technik erweitert die Entwicklung der Krebstherapie, da sie die gleichzeitige Bewertung von Parametern ermöglicht, die bei der herkömmlichen präklinischen Erprobung von Wirkstoffzielen oder -verbindungen nicht immer berücksichtigt werden.Obwohl diese Methode Einblicke in neuartige Wirkstoffziele geben kann, die an der DNA-Reparatur beteiligt sind, kann sie auch zur Zielvalidierung in anderen Systemen wie der Zellzykluskontrolle eingesetzt werden. Nach der Durchtrennung von Tumorzellen mit Antisense-Oligonukleotiden gemäß dem Textprotokoll in einer sterilen Umgebung verwenden Sie 400 Mikroliter PBS, um sechs Biosensor-Chips sorgfältig zu waschen Um die Chips zu sterilisieren, entfernen Sie das PBS und fügen Sie 400 Mikroliter 70%iges Ethanol hinzu Inkubieren Sie 20 Minuten lang, bevor Sie PBS verwenden, um die Chips dreimal zu waschen. Jeweils drei Chips werden in sterile Kulturschalen gelegt, mit der Bezeichnung "Kontrolle" und "Target of Interest" beschriftet, und zwei 50-Milliliter-Röhrchen auf ähnliche Weise beschriftet.Verwenden Sie anschließend PBS, um die transfizierten Zellen zu waschen, bevor Sie ein entsprechendes Volumen von 0,25 % Trypsin-EDTA hinzufügen, warten Sie, bis sich die Monoschicht ablöst, und übertragen Sie die Zellsuspension in das entsprechende Röhrchen. Nach dem Zählen der Zellen wird das Volumen so angepasst, dass eine Endkonzentration von 6,0 mal 10 bis zur fünften Zellen pro Milliliter erreicht wird, indem Sie entweder Medium hinzufügen oder die Zellen konzentrieren. Bereiten Sie jeweils eine Gruppe vor und fügen Sie jedem Biosensorchip 250 Mikroliter Zelllösung hinzu.Stellen Sie die sterilen Schalen mit den Chips in eine Feuchtigkeitskammer, um eine Verdunstung zu verhindern, und inkubieren Sie über Nacht, um Stoffwechselmessungen gemäß der experimentellen Beschreibung durchzuführen, die auf dem Etikett des Textprotokolls beschrieben ist. 1450 Milliliter Röhrchen und fügen Sie 50 Milliliter Wachstum, Medium plus 0,2 % FBS und ein x Penicillin und Streptomycin hinzu. Oder PS. Legen Sie sechs Röhrchen in ein Stoffwechselmesssystem, sechs Röhrchengestelle in ein anderes und das restliche Röhrchen in ein drittes Röhrchengestell, das ebenfalls Röhrchen mit Cisplatin enthält. Verwenden Sie eine luftdurchlässige Membran, um die ersten beiden Racks abzudichten, um eine Verdunstung zu verhindern.Bereiten Sie als Nächstes ein geeignetes Volumen von sechs mikromolaren Cisplatin in Medium mit 0,2 % FBS und einem XPS vor. Geben Sie das erforderliche Volumen des Mediums in vier beschriftete 50-Milliliter-Röhrchen und setzen Sie sie wieder in die vier Schlitze des dritten Racks für das Stoffwechselmessröhrchen ein. Verwenden Sie eine luftdurchlässige Membran, um die Rohre abzudichten.Beschriften Sie sechs 50-Milliliter-Röhrchen und fügen Sie jeweils 20 Milliliter zu 0,1 %iger Triton X-Lösung hinzu. In Medium legt die Triton X-Lösung alle verbleibenden Zellen und liefert einen Nullwert für jeden Chip. Legen Sie die Röhrchen in ein viertes Röhrchengestell und verschließen Sie sie. Laden Sie dann die Chips in die Bio-Module.Laden Sie die beiden Bracks in die beiden Brackhalter und starten Sie dann das Experiment. Nach der Präparation von Hühnerembryonen, wie im Textprotokoll beschrieben, am zweiten Tag der Zelltransfektion sind die Kontroll- und Zielinteressengruppen in zwei Kolben für das Vehikel und zwei für Cisplatin zu unterteilen. Aspirieren Sie das Medium und verwenden Sie entweder drei Milliliter frisches, mittleres oder mittleres Medium mit sechs mikromolaren Cisplatin zum Auffüllen.Die Kolben inkubieren sechs Stunden lang. Nach der Inkubation aspirieren Sie das Medium, waschen und tryps anisieren die Zellen, überführen die Zellsuspension in vier entsprechend gekennzeichnete 15-Milliliter-Röhrchen, bevor Sie die Zellen schleudern und mit PBS dreimal waschen. Und dann nach der Zählung verwenden Sie PBS zum Verdünnen oder Zentrifugieren, um die Zellen auf eine Endkonzentration von 1,0 mal 10 bis zum sechsten Zellen pro Milliliter zu konzentrieren.Die Zellsuspension in fünf Milliliter-Röhrchen überführen, die für die Injektion gekennzeichnet sind, und auf Eis legen. Als nächstes legen Sie 24 9 Tage alte Hühnerembryonen für die Injektion unter einem Stereomikroskop beiseite und verwenden Sie eine Glasnadel, die an einem flexiblen Schlauch befestigt ist, der mit einer langsamen pulsierenden Bewegung mit einer Ein-Milliliter-Spritze verbunden ist. Injizieren Sie 1,0 mal 10 bis die fünften Zellen in einem Volumen von 100 Mikrolitern mit einem weichen Tuch in den venösen Kreislauf der Choal-Toic-Membran oder des Cams.Tupfen Sie die Injektionsstelle vorsichtig ab, um den Blutfluss zu stoppen und verschüttete Schleudern zu absorbieren. Beschriften Sie jeden Embryobehälter nach jeder Injektion unter einem Fluoreszenzmikroskop entsprechend. Bestätigen Sie das Vorhandensein und die Verteilung von Fluoreszenzzellen im Gefäßsystem der Cam.Achten Sie auf Embryonen, bei denen die Anzahl der Tumorzellen gering oder die Verteilung schlecht erscheint. Schließlich legen Sie die Hühnerembryonen in eine Feuchtigkeitskammer und inkubieren sie sieben bis neun Tage lang, bevor Sie Metastasierungsherde aufzählen, wie im Textprotokoll beschrieben, wie hier gezeigt. Nach 24 Stunden zeigten 5 bis 49 Lungenkrebszellen, die mit BRCA zwei behandelt wurden, die auf eine SO und Cisplatin abzielten, eine frühe und irreversible Abnahme der Atmung im Vergleich zu Zellen, die Kontroll-SO und Cisplatin allein erhielten. Die Abnahme um 39 % im Vergleich zu den mit Kontrollzellen behandelten Zellen begann etwa 10 Stunden vor einem nachweisbaren Abfall der Zelladhäsion, was darauf hindeutet, dass sie unabhängig von Veränderungen der Zellzahl auftrat und dass es sich um ein prägendes Ereignis handeln könnte, das dem Zelltod vorausgeht, wie hier gezeigt.Während des 72-stündigen Experiments wurde kein Unterschied in der Ansäuerung beobachtet, was darauf hindeutet, dass die Behandlung mit BRCA two, a SO und Cisplatin wenig bis gar keinen Einfluss auf den Glukosestoffwechsel hatte. In diesem Experiment wurden humane A 5 49 Lungenkrebszellen mit der Kontrolle a SO oder BRCA zwei A SO in Gegenwart oder Abwesenheit von Cisplatin behandelt und in den venösen Kreislauf der Cam injiziert. Neun Tage später wiesen Zellen, die mit BRCA two a SO und Cisplatin behandelt wurden, eine um 77 % geringere Häufigkeit von Metastasierungsherden auf als Zellen, die mit Kontroll-a-SO und Cisplatin oder BRCA two A SSO allein behandelt wurden, was darauf hindeutet, dass die Behandlung mit BRCA two a SO und Cisplatin das Potenzial hat, die Metastasierungslast bei Patienten mit soliden Tumoren zu verringern oder zu verhindern.Im Anschluss an dieses Verfahren können traditionellere Methoden wie Zellproliferation, Assays und In-vivo-Xenotransplantatstudien durchgeführt werden, um den Beitrag eines bestimmten Ziels zur erhöhten Arzneimittelempfindlichkeit weiter zu untersuchen.

evaluating-effectiveness-cancer-drug-sensitization-vitro

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Drug Resistenz gegen gezielte Therapeutika ist weit verbreitet und die Notwendigkeit, die Mechanismen der Resistenz zu identifizieren - vor oder nach dem klinischen Einsetzen - ist entscheidend für die Führung alternative klinische Management-Strategien. Hier präsentieren wir ein Protokoll zu koppeln, Ableitung von Medikamenten-resistenten Linien in vitro mit Sequenzierung zur Entdeckung dieser Mechanismen zu beschleunigen.

Implementierung von<em&gt; In-vitro-</em&gt; Drug Resistance Assays: Maximierung des Potenzials für die Aufdeckung klinisch relevanter Resistenzmechanismen

Wir beschreiben einen Hochdurchsatz-Wirkstoffsensitivitätsassay für primäre multiple Myelomzellen. Es besteht aus einer Rekonstruktion der Mikroumgebung des Knochenmarks (einschließlich extrazellulärer Matrix und Stroma) in Multi-Well-Platten und einer nicht-invasiven Methode zur longitudinalen Quantifizierung der Zellviabilität.

Ein organ High Throughput-System zur Charakterisierung von Arzneimittelempfindlichkeit von Primary Multiple Myelomzellen

Der vorliegende Bericht fasst ein Protokoll zusammen, das verwendet werden kann, um den Einfluss der Mikroumgebungsnische des Knochenmarks auf leukämische Zellen zu modellieren, wobei der Schwerpunkt auf der Anreicherung der chemoresistentesten Subpopulation liegt.

Modeling Chemotherapie beständig Leukämie<em&gt; In Vitro</em

Das Ziel dieses Protokolls ist die Spezifität von Antikrebs - Arzneimittel in vitro zu beurteilen , Mischkulturen unter Verwendung von sowohl Tumor- und Nicht-Tumorzellen enthält.

Die Beurteilung Spezifität von Anti-Krebs-Medikamente<em&gt; In Vitro</em

Wir präsentieren ein dreidimensionales (3D) Lungenkrebsmodell, das auf einem biologischen Kollagengerüst basiert, um die Empfindlichkeit gegenüber nicht-kleinzelligem Lungenkrebs (NSCLC)-zielgerichteten Therapien zu untersuchen. Wir demonstrieren verschiedene Auslesetechniken zur Bestimmung des Proliferationsindex, der Apoptose und des epithelial-mesenchymalen Übergangsstatus (EMT). Die gesammelten Daten werden in ein in silico-Modell zur Vorhersage der Arzneimittelsensitivität integriert.

Ein kombiniertes 3D-Gewebezüchtungen<em&gt; In Vitro</em&gt; /<em&gt; In Silico</em&gt; Lungentumormodell für Hintergründe in bestimmten Mutations Drug Wirksamkeit vorhersagen

Eine in-vitro- Methode für die Festlegung der doppelten Widerstand gegen eine EGFR-TKI und ein MET-TKI in Krebszellen wird beschrieben. Diese Methode ist nützlich für die Entwicklung von Therapien für Patienten mit EGFR-Mutationen, die Progression der Erkrankung trotz der EGFR-TKI Behandlung mit MET-Verstärkung ausstellen. Es kann auch für Inhibitoren gezielt andere Moleküle geändert werden.

Doppelte Resistenz gegen EGFR-TKI und traf TKI etablieren in Lunge Adenokarzinom Zellen In Vitro mit einem 2-stufigen Dosiseskalation Verfahren

Dieses Protokoll beschreibt die Synergien zwischen einem Anti-Krebs-Antikörper und Zytostatika in präklinischen Modellen zu bewerten, indem Sie unter Verwendung der Kombination Index Gleichung von Chou und Talalay.

Potenzierung der Anti-Krebs-Antikörper-Wirksamkeit von Zytostatika: Nachweis von Antikörper-Wirkstoff-Synergismus mit der Kombination-Index-Gleichung

Hier beschreiben wir eine in-vitro-Kokultur Methode rekursiv Herausforderung Tumor gezielt T-Zellen, die phänotypische und funktionelle Analyse der Antitumor-T-Zell-Aktivität ermöglicht.

In Vitro Tumor Zelle Rechallenge für vorausschauende Bewertung der Chimeric Antigen-Rezeptor-T-Zell-Antitumor-Funktion

Dieses Manuskript beschreibt, wie die In-vivo-Immunogenität von extrazellulären Vesikeln (EVs) aus Tumorzellen mittels Durchflusszytometrie beurteilt werden kann. EVs, die von Tumoren stammen, die einem behandlungsinduzierten immunogenen Zelltod unterzogen werden, scheinen in der Tumorimmunüberwachung besonders relevant zu sein. Dieses Protokoll veranschaulicht die Beurteilung von Oxaliplatin-induzierten immunstimulierenden Tumor-EVs, kann aber an verschiedene Einstellungen angepasst werden.

Im lebenden Organismus Immunogenitätsscreening von tumorabgeleiteten extrazellulären Vesikeln durch Durchflusszytometrie von Milz-T-Zellen

Dieses Protokoll beschreibt eine standardisierte Bewertung von Arzneimittelsensitivitäten gegenüber zielgerichteten Signalinhibitoren in NSCLC-patientenabgeleiteten Organoidmodellen.

Profiling der Sensitivität gegenüber zielgerichteten Therapien in EGFR-mutierten NSCLC-patientenabgeleiteten Organoiden

Dieses Protokoll stellt eine Reihe von Experimenten vor, die für die Evaluierung von photoschaltbaren Antikrebspeptiden verwendet wurden, die für das präklinische Screening solcher Verbindungen verwendet werden können. Dazu gehören die Bewertung der Zytotoxizität in 2D- und 3D-Zellkulturen, die Bewertung der Ex-vivo-Photoisomerisierungseffizienz (Modellgewebe) und der In-vivo-Wirksamkeit.

In-vitro - und In-vivo-Evaluierung photokontrollierter biologisch aktiver Substanzen - potenzielle Wirkstoffkandidaten für die Krebspharmakologie

Erfahren Sie die Bewertung der Krebsmedikament-Sensibilisierung durch Messung des Zellstoffwechsels in vitro und der Metastasierungsfrequenz in vivo am Hühnerembryo-Modell. Diese Methode ermöglicht die gleichzeitige Analyse von Arzneimittelwirkungen.

Bewertung der Wirksamkeit der Krebsmedikament Sensibilisierung

Weitere Videos entdecken