Modifikation eines Colliculo-thalamokortikalen Maus Hirnschnitt, Einbindung der 3D-Druckkammerkomponenten und Multiskalen Optical Imaging

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, den Cortikalschnitt des Calot Thal mit vier großen auditorischen Strukturen zu präparieren: dem Colus inferior, dem auditorischen Thalamus, dem auditorischen Teil des Nucleus reticularus thalamicus und dem auditorischen Kortex. Dies wird erreicht, indem zuerst das Gehirn aus der Maus entfernt wird. Der zweite Schritt besteht darin, das Gehirn zu blockieren, um sich auf das Schneiden vorzubereiten.

Als nächstes schneiden Sie das Gehirn, um Scheiben zu erhalten, die die kortikale Verbindung Calot thal enthalten. Der letzte Schritt besteht darin, die Flavoprotein-Bildgebung zu verwenden, um die Konnektivität zu beurteilen. Letztendlich kann die Gehirnscheibe, die die kortikale Verbindung enthält, für eine Vielzahl von Experimenten verwendet werden, um die Informationsverarbeitung in den auditiven Regionen des mittleren und vierten Gehirns besser zu verstehen. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da die Schritte zum Blockieren des Gehirns vor dem Schneiden schwer zu erlernen sind, da sie einen komplexen doppelt abgewinkelten Schnitt erfordern. Dies ist der Schlüssel zu intakten Projektionen.

BJ Slater, ein Doktorand in meinem Labor, wird die Technik vorführen. Um die Schneidphase für das Schneiden vorzubereiten, schneiden Sie ein kleines Stück 3%-Schnecke von etwa einem Kubikzentimeter ab, um es als Rückhalt für das Gehirn zu verwenden, und ein weiteres Stück von 1,5 Zentimeter x 1,5 Millimeter x drei Millimetern, um es als Beule zur Unterstützung des Colliculus inferior zu verwenden. Als nächstes kleben Sie die Rücklaufsperre mit Cyanacrylatkleber auf die Bühne und kleben dann die Beule auf der rechten Seite der Rücklaufsperre so, dass sie einen 80-Grad-Winkel auf einer Folie bilden, die mit zwei Linien in einem 90-Grad-Winkel und einer diagonalen Linie in einem 17-Grad-Winkel von links oben nach unten markiert ist, und platzieren Sie die Rückenseite des Gehirns nach oben am Schnittpunkt der beiden Linien. Entfernen Sie mit einer Rasierklinge zwei bis vier Millimeter des rostralen Endes des Gehirns, um eine ebene Oberfläche zu erhalten.

Lege dann die Verwöhnseite des Gehirns mit der Verwöhnseite nach oben auf die neu geschaffene flache Fläche. Richten Sie die dorsale Oberfläche des Gehirns an einer horizontalen Linie und die Mittellinie des Gehirns an einer vertikalen Linie aus, die auf der Folie markiert ist. Richte dann die Rasierklinge mit einer 17-Grad-Linie aus.

Kippen Sie den Rasierer in einem Winkel von 30 Grad und entfernen Sie etwa drei Millimeter des rechten Kortex in einem doppelten diagonalen Schnitt, um das Gehirn auf die Vibrato-Bühne zu setzen. Legen Sie ein kleines Stück Filterpapier auf die ventrale Seite des Gehirns, so dass die lange Dimension senkrecht zur Mittellinie verläuft. Tragen Sie vorsichtig eine kleine Menge Cyanacrylatkleber auf den Bereich vor dem Backstop und links von der Beule auf.

Legen Sie anschließend die doppelt diagonal geschnittene Gehirnseite so auf den Kleber, dass der verwöhnte Teil des Gehirns und das Hinterhirn auf der Beule aufliegen und die rechte Seite des Gehirns gegen den Rückhalt anliegt. Platzieren Sie bei diesem Verfahren schnell den Schneidtisch im Vibrato, bauen Sie einen Tisch mit Schneidlösung. Richten Sie als Nächstes die Klinge an der Oberseite des Gehirns aus.

Entfernen Sie einen bis 1,5 Millimeter von der Oberseite des Gehirns. Schneiden und entfernen Sie dann weitere Scheiben von 300 bis 500 Mikrometern, während Sie tiefer gehen. Wenn der Colliculus inferior, der Körper medialis und der Nucleus ticus lateralis sichtbar sind, sollte der Gyrus dentatus als C-Form erscheinen und die Struktur in einer Linie sein.

Etwa zwei Scheiben von 600 Mikrometern erhalten. Dies sind die kortikalen Schnitte der Karodas. Bringen Sie sie danach in die 32 Grad Celsius heiße Warmhaltekammer.

Um das Flavoprotein-Autofluoreszenzbild aufzunehmen, nehmen Sie die Bilder 105 Sekunden lang bei vier Hertz auf. Beleuchten Sie das Gewebe mit blauem Licht von 470 bis 490 Nanometern und erfassen Sie über 515 Nanometer, um sicherzustellen, dass das Bild weder zu dunkel noch zu stark ausgeblasen wird. Verwenden Sie dann die elektrische Stimulation, um das Gewebe zu aktivieren und ein Kalziumbild zu erhalten.

Erfassen Sie Bilder 25 Sekunden lang bei 10 Hertz. Beleuchten Sie das Gewebe mit 365 Nanometern Licht und fangen Sie Fluoreszenz über 510 Nanometer ein. Auch hier ist darauf zu achten, dass das Bild weder zu dunkel noch zu stark ausgeblasen ist.

Verwenden Sie dann elektrische Stimulation, um die Zellen zu aktivieren. Dieses Bild zeigt die Bestätigung der kortikalen Verbindung der Karodrum im Hirnschnitt durch Flavoprotein-Autofluoreszenz. Die elektrische Stimulation, die mit 0,05 Hertz an den unteren Colus verabreicht wurde, wurde bei vier Hertz abgebildet und vier a verarbeitet, um die Leistung bei dieser Stimulation zu zeigen.

Frequenz werden der auditorische Thalamus, der Thalamus, das Retikulär, der Kern und der auditorische Kortex synaptisch aktiviert. Hier ist ein nicht verbundener Abschnitt. Eine elektrische Stimulation des Colus inferior mit Aktivierung wurde nur im auditorischen Thalamus beobachtet.

Der gesamte Weg wurde nicht erfasst, wahrscheinlich weil einer der Schnitte leicht außerhalb der Ebene lag. Mit kortikalen Alam-Projektionen. Dieses Bild zeigt eine atypische Aktivierung des auditorischen Kortex.

Die elektrische Stimulation des Colus inferior aktivierte den auditorischen Kortex ohne sichtbares Signal. Im auditorischen Thalamus war der Thalamus wahrscheinlich noch aktiviert, aber nicht auf der Bildfläche. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie einen AAL-Thalamus-Kortikalschnitt erhalten und dessen Konnektivität beurteilen können.