Name: Electro Studium der Lungenkrebszellen unter Verwendung eines Mehrkanal-Zwei elektrischen Feldes Mikrofluidik-Chip (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Erfahren Sie die Untersuchung von Elektrotaxis bei Lungenkrebszellen mit einem Mehrkanal-Mikrofluidik-Chip. Diese Methode ermöglicht die Bewertung von Kinase-Inhibitoren auf die Zellmigration unter elektrischen Feldern.

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Diese Arbeit wird finanziell unterstützt vom Ministerium für Wissenschaft und Technologie, Taiwan (Vertrags-Nr. MOST 103-2113-M-001 -003 -MY2) und dem Research Program on Nanoscience and Nanotechnology, Academia Sinica, Taiwan.

1. Konstruktion und Herstellung der MDF-Chip <ol><li> Zeichnen Sie einen individuellen Acrylschicht Muster unter Verwendung kommerzieller Software wie AutoCAD, und speichern Sie das Muster. <ol><li> Überprüfen Sie die Gestaltung des Vier-Schicht-Acrylglas-Muster in 1A und bestätigen Sie die Durchkontaktierungen. </li></ol></li><li> Herzustellen alle Acrylglasplatten und das doppelseitige Klebeband durch Laserablation unter Verwendung eines CO 2 -Lasers scriber (1B, 2A und 2B). 16 <ol><li> Schalten Sie den Laser-Anreißer und schließen Sie das Gerät an die Steuerung Laptop. </li><li> Führen Sie das kommerzielle Software und öffnen Sie das Muster in Schritt 1.1 ausgelegt, indem Sie auf &quot;konzipiert Pattern-Datei.&quot; </li><li> Legen Sie ein Stück leere Acrylglas oder doppelseitigen Klebeband auf der XYZ-Bühne des Laser-Anreißer. </li><li> Einstellen des Fokus des Laserstrahls auf der Oberfläche der Acrylfolie oder doppelseitiges Klebeband mit einem Auto-alignment-Stick vom Hersteller des Laserreißnadel vorgesehen. </li><li> Senden die entworfenen Muster zum Laserritz zur direkten Bearbeitung der Acrylglasplatte oder doppelseitiges Klebeband. </li></ol></li><li> Entfernen Sie das Schutzpapier von der Acrylglasplatten mit einer Pinzette und blasen die Oberfläche sauber mit Stickstoffgas. </li><li> Ablegen der Acrylplatten und miteinander zu verbinden unter einem Druck von 2 kg / cm 2 in einem Thermobonder 45 min bei 110 ° C, um den Strom / elektrische Stimulation Kanalanordnung zu bilden. </li><li> Bereiten Sie die Mikroskop-Deckglas als Zellkultursubstrat im Chip. <ol><li> Legen Sie das Deckglas in Küvette und füllen das Glas mit einer zehnfachen Verdünnung des Waschmittels in der Materialliste aufgeführt. </li><li> Legen Sie das Deckglas und Küvette in einem Ultraschall-Steri-Reiniger und reinigen Sie das Deckglas 15 min. </li><li> Gießen Sie die verdünnten Reinigungsmittel aus der Küvette füllen Sie das Gefäß mit destilliertem Wasser, und wiederholen Sie Schritt 1.5.2 3 mal. </li><li> Trocknen des gereinigten Abdeckglas durch Ausblasen mit Stickstoff, bevor zu dem doppelseitigen Klebeband Ankleben. </li></ol></li><li> Halten Sie die gereinigte Deckglas auf das Fluss / elektrische Stimulation Kanalanordnung mit dem doppelseitigen Klebeband in Schritt 1.2 gemustert. </li><li> Anhaften 13 Stücke Acryl Adaptoren an die einzelnen Öffnungen in der Schicht 1 der MDF-Chip-Montage mit Sekundenkleber. Die MDF-Chip-Montage ist dann abgeschlossen (2D). </li><li> Sterilisieren Sie die komplette MDF-Chip-Montage mit 30 Minuten der UV-Bestrahlung vor der Verwendung. </li></ol> 2. Einrichten der Salzbrücke Netzwerk der MDF-Chip <ol><li> Vor der Verwendung zu sterilisieren alle Kunststoff-Rohre, fingerfest Muttern und Mikrozentrifugenröhrchen in 3B gezeigt ist, durch Einstellen einer Haltezeit von 15 min bei 121 ° C im Autoklaven. </li><li> Schließen Sie die Fluorkunststoffrohre (3B-i) auf die MDF-Chip-Montage über den Mitteleingangund Ausgangsadaptern in 1A gezeigt. </li><li> Verbinden Sie den Luer-Konus des Mediums Einlass- und Auslass-Kunststoffrohre in 3B-i an die 3-Wege-Hähne. </li><li> Nehmen 2,5 ml CO 2 -equilibrated phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) unter Verwendung einer 3 ml-Spritze und verbinden die Spritze mit dem 3-Wege-Hahn des Einlasskunststoffrohr. Schließen Sie eine leere 3-ml-Spritze mit dem 3-Wege-Hahn der Austrittskunststoffrohr. Die beiden Spritzen werden somit durch die MDF-Chip verbunden sind. HINWEIS: Inkubieren Sie die PBS in der 37 ° C 5% -CO 2 Zellkulturinkubator O / N zu erhalten, CO 2 -equilibrated PBS. </li><li> Verschließen Sie die Öffnungen der blauen und der grünen Adapter (Abbildung 1A) auf dem Layer 1 PMMA-Platte mit weißen Festhandfest Muttern (3B-III). </li><li> Füllen Sie die Salzbrücke Kanälen und Kulturkammern mit dem CO 2 -equilibrated PBS in der im Setup-Schritt 2.4 beschrieben Spritze. Vermeidendie Bildung von Blasen. </li><li> Als nächstes setzen Sie den CO 2 -equilibrated PBS-haltigen MDF-Chip in der 37 ° C 5% -CO 2 Zellkulturbrutschrank für O / N Inkubation. Dies ermöglicht die gelöste Luft in dem doppelseitigen Klebeband um Blasen in den Kammern bilden. </li><li> Wegspülen die Blasen in den Kanälen durch eine schnelle PBS Strömung im Kanal mit Hilfe der zwei Spritzen. Pumpen Sie den PBS hin und her, wenn nötig. </li><li> Ablassen PBS in den Kanälen über die 3-Wege-Hahn zum Medium Auslaßrohr verbunden ist. </li><li> Unter Verwendung einer neuen 3-ml-Spritze nehmen 2,5 ml CO 2 -equilibrated Dulbeccos modifiziertem Eagle Medium (DMEM) (siehe Schritt 3.5), und ersetzen Sie die Spritze mit dem Einlass mit dem neuen verbunden. Füllen Sie die Kanäle mit dem Medium. </li><li> Herstellung der Salzbrücke Netzwerk. <ol><li> Zeitlich entfernen Sie die Feststoffmuttern (3B-iii) auf den grünen Adapter (Abbildung 1A) und injizieren 3% heiß (&gt; 70 ° C) Agarose in die Salz briDGE Kanal durch die Öffnung in dem Grün Adaptern (1A). HINWEIS: Herstellung von heißen Agarose: Man löst 1,5 g Agarose-Pulver in 50 ml PBS. Sterilisieren durch Einstellen einer Haltezeit von 20 min bei 121 ° C im Autoklaven. </li><li> Das Einspritzen der Agarose, wenn die Flüssigkeit drei Viertel der Länge des Salzbrückenkanal ausfüllt. </li><li> Versiegeln der Poren auf die grünen Adapter (1A) durch Einschrauben der Feststoffmuttern (3B-iii) nach der Agarose-Injektion. </li><li> Ersetzen Sie die Feststoffmuttern an den blauen Adaptern (Abbildung 1A) mit den durchscheinenden Rohrhandfest Muttern (3B). </li><li> Laden der 3% Agarose in die Rohrmuttern (3B-iv) vorgewärmt. </li><li> Betten Sie die Ag / AgCl-Elektroden (3B-v) in die rohrförmigen Muttern (3B-IV), bevor dieVerfestigung der Agarose. </li></ol></li><li> Nach Abschluss der Einrichtung der Salzbrücke Netzwerk, injizieren die CL1-5 Lungenkrebszellen in die Kulturkammern, eine Kammer zu einer Zeit. </li></ol> 3. Herstellung von Krebszellen und zum beliebig Electrotactic Experiment <ol><li> Regelmäßige Kultur der Lungenkrebszelllinie CL1-5. <ol><li> Kultur die CL1-5 Lungenkrebszellen, von Prof. Pan-Chyr Yang, 17 in der Vollmedium in einem 75T Zellkulturflasche bei 37 erhalten ° C in einem 5% CO 2 Atmosphäre. Der komplette Medium besteht aus DMEM und 10% fötalem Rinderserum (FBS) zusammengesetzt ist. Subkultur der Zellen alle 3 bis 4 Tage. Die zur Durchführung electro Experimenten verwendeten Zellen sind weniger als 25 Passagen von der ursprünglichen Quelle. </li></ol></li><li> 2 ml 0,25% Trypsin-Puffer auf die exponentiell wachsenden Zellen CL1-5 und Inkubation für 2 min in der 37 ° C 5% -CO 2 Zellkulturbrutschrank zur Zell detachment. </li><li> Beenden des Ablöseprozesses mit 6 ml 10% FBS DMEM und zentrifugiere die Zellen bei 300 g für 5 min bei RT. Dann werfen Sie die mittlere und die Aussetzung der Zellpellet mit 5 ml PBS. </li><li> Zählen die Anzahl von Zellen in der PBS. Dann nehmen Sie 1 x 10 6 Zellen und Zentrifuge bei 300 g für 5 min bei RT. </li><li> Entsorgen Sie die PBS. Aussetzung der Zellen mit vorgewärmtem CO 2 -equilibrated DMEM und stellen Sie die Zelldichte auf 1 × 10 6 Zellen / ml liegen. HINWEIS: Inkubieren Sie die Vollmedium in der 37 ° C 5% -CO 2 Zellkulturinkubator O / N, um das CO 2 zu erhalten -equilibrated DMEM. </li></ol> 4. Richten Sie für Electrotactic Experiment <ol><li> Von dem Auslaß der MDF-Chip injiziert 0,3 ml, 1 × 10 6 / ml, der Zellen in dem Chip. </li><li> Inkubieren Sie die Zellen ausgesät MDF-Chip in der Zellkultur-Inkubator (bei 37 gesetzt ° C und 5% CO 2) für 2-4 Std. </li><li> Setup von MDF MikroFluidsystems. <ol><li> Installieren Sie die MDF mikrofluidischen System auf einen transparenten Indiumzinnoxid-Glas (ITO) Heizung. Messen Sie die Temperatur des MDF-Chip mit einer K-Typ-Thermoelement zwischen dem MDF-Chip und dem ITO-Glas abgeschnitten. Steuern Sie die ITO-Heizung mit einer Proportional-Integral-Differential (PID) Steuerung. Stellen Sie die MDF mikrofluidischen System Inkubationstemperatur auf 37 ° C mit dem PID-Regler. HINWEIS: Die Herstellung des ITO Heizer und der Aufbau der Zellkultur Heizsystem in früheren Berichten beschrieben 18,19. </li><li> Montieren Sie den temperaturgesteuerten MDF-Chip-Montage auf der computergesteuerten XYZ Motortisch auf einem inversen Mikroskop. Die Nutzung des motorisierten Stufe wird in Schritt 5.1 beschrieben. Pumpe das Vollmedium in die Kulturkammern durch die Einlässe mit einem Vierkanal-Spritzenpumpe. </li></ol></li><li> Pumpe das Vollmedium in die MDF-Chip mit einer Flussrate von 20 ul / h. Die Kultur Abfälle aus der auslässt sich in den Reaktionsgefäßen (als &quot;Abfall&quot; in 3A gezeigt) gesammelt. </li><li> Die Zellen für weitere 16-18 h bei 37 ° C in der MDF-Chip. </li><li> Um das Medium zu ersetzen, die Pumpe das Medium, das 50, 25, 5 und 0 &amp; mgr; M-Kinase-Inhibitor jeweils in jeder Kulturkammer mit einer Flussrate von 20 ul / min für 10 min. HINWEIS: Die Herstellung einer 10 mM Stammlösung des Rho-assoziierten Proteinkinaseinhibitor Y27632 durch Zugabe von 3 ml steriles Wasser zu der 10,6 mg-Kinase-Inhibitor. Verdünne die 10 mM Stammlösung zu 50, 25 und 5 &amp; mgr; M unter Verwendung von 10% FBS DMEM Medium. </li><li> Die Zellen in der Kinase-Inhibitor zur weiteren 60 min bei 37 ° C. Stellen Sie den mittleren Strömungsgeschwindigkeit auf 20 &amp; mgr; l / h. Verwenden Sie die gleiche Kultur Temperatur und Strömungs oben in späteren Schritten beschrieben Rate. </li><li> Verwenden elektrischer Drähte an eine Gleichstromversorgung an die MDF-Chip über die Ag / AgCl-Elektroden, die auf dem Chip zu verbinden. </li><li> Seriell verbinden ein Amperemeter in die elektrische Schaltung. Verwenden Sie das Amperemeter, um den elektrischen Strom in der MDF-Chips überwachen. </li><li> Schalten Sie die DC-Stromversorgung und den Strommesser Strom um 86,94 &amp; mgr; A durch Einstellen der Stromversorgungsspannung zwischen 15 und 19 V. BEMERKUNG: Die Größe des Ohmschen Gesetzes, E = I / (&amp; Sgr; A eff), wobei I der elektrische Strom durch das Schüttgut strömt, dh das Kulturmedium in electrotactic Kammer, σ (= 1,38 Ω -1 m - 1) ist das Leitfähigkeit des Kulturmediums A eff (= 0,21 mm 2 für eine 3 mm Breite · 0,07 mm Höhe) ist die effektive Querschnittsfläche des electrotactic Kammer und der elektrische Strom (I) erforderlich, um eine 300 mV / mm erzeugen EF in der MDF-Chip ist 86,94 &amp; mgr; A. </li></ol> 5. Aufnahme und Analyse von Zellbildern <ol><li> Steuern Sie den Motortisch mit Hilfe eines MATLAB GUI-Programm. Mit der MDF mikrofluidischen System auf der microsco montiertpe, bewegen Sie den Chip an den Beobachtungsbereichen mit Hilfe der motorisierten Bühne. </li><li> Rekordzelle Bilder mit einem digitalen Spiegelreflex (SLR) am Mikroskop montiert. </li><li> Nehmen mikroskopischen Bildern mit einem 4X Objektiv in Intervallen von 15 min für 2 Stunden. </li><li> Zellmigration Analyse. <ol><li> Führen NIH ImageJ 1,47 V. </li><li> Analyse der Abstand von der Anfangs- in die Endstellung des Schwerpunkts der Zelle. </li><li> Gehen Sie auf &quot;Datei&quot; → &quot;Import&quot; → &quot;Bildsequenz&quot;, und importieren Sie neun Bilder für Zellmigration Analyse. Das erste Bild ist das Ergebnis der Zeit Null, und das letzte Bild ist das Ergebnis von 120 min. </li><li> Gehen Sie auf &quot;Analyze&quot; → &quot;Messungen&quot; und aktivieren Sie das Kontrollkästchen neben &quot;Centroid&quot; </li><li> Klicken Sie auf das Symbol &quot;Freihand-Auswahl&quot;. </li><li> Stellen den Rand der ausgewählten Zellen in dem ersten Bild. </li><li> Gehen Sie auf &quot;Bearbeiten&quot; → </em&gt; &quot;Auswahl&quot; → &quot;um-Manager hinzufügen&quot; </li><li> Zum neunten Bild und stellen den Rand der gleichen Zellen auf das erste Bild ausgewählt. Die Zellpositionen können mit dem zweiten bis achten Bilder zurückverfolgt werden. </li><li> Gehen Sie auf &quot;Bearbeiten&quot; → &quot;Auswahl&quot; → &quot;um-Manager hinzufügen&quot; </li><li> Die Schritte 5.4.5 bis 5.4.9, um Daten von 90 bis 100 Zellen zu sammeln. </li><li> Gehen Sie auf &quot;Analyze&quot; → &quot;Messen&quot;, um das Ergebnis der ersten und letzten Positionen der ausgewählten Zellen zu erhalten. HINWEIS: Die Migrationsgeschwindigkeit als der durchschnittliche Zellbewegung Länge pro Stunde definiert. Die Gerichtetheit wird als Cosinus, wobei der Winkel zwischen dem Vektor der dcEF (von der Anode zur Kathode) und der Vektor von dem Ausgangspunkt einer Zelle in ihre Endposition definiert. Die Gerichtet -1 ist für Zellen, die Migration in Richtung der Anode und +1 für Zellen migrieren zu der Kathode. Für eine Gruppe der statistisch miGitterzellen, die Gerichtetheit ist 0. 2 </li></ol></li></ol>

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Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Wir haben den Prozess der haftenden Acryladapter auf Schicht 1 des MDF-Chip tricky sein. Der Einsatz von nur 1 bis 2 &amp; mgr; l Superkleber ist ausreichend, um fest zu halten den Adapter auf die MDF-Chip. Größere Mengen von Kleber führte zu einer unvollständigen Polymerisation der Superkleber und Misserfolg zu haften. Sobald die Acryl-Adapter wurden fest auf das MDF-Chip geklebt, Flüssigkeitsleckage in der mikrofluidischen System nur selten aufgetreten. Außerdem O / N Inkubation in der Vakuumkammer dazu beigetragen, d...

Das Verhalten von adhärenten Zellen sich in Richtung einer Anode oder Kathode unter einem elektrischen Gleichstromfeld (dcEF) als Elektrotaxis bezeichnet. Die electrotactic Verhalten von Zellen spielt eine wichtige Rolle in der Embryogenese, die Nervenregeneration und Wundheilung. 1-Tumorzellen wie Ratte Prostatakrebszellen, Brustkrebszellen, 2, 3 und Lungenadenokarzinomzellen 4-8 haben electrotactic Bewegung unter einem angelegten dcEF gezeigten . Die physiologische EF in Drüsengeweben gemessen. 9,10 electro wurde auch in Drüse assoziierten Tumorzellen berichtet. 2,3 Zusammen bilden die Elektrotaxis von Krebszellen wird als Metastasierung Faktor. 11 Steuerung der elektrischen Leitung von Krebszellen unter dcEF kann ein möglicher Ansatz für die zukünftige Behandlung von Krebs. Heute bleibt jedoch die detaillierte molekulare Mechanismus electro umstritten. Daher eine Untersuchung der influence der elektrischen Stimulation auf Krebszellmigration können die Entwicklung von Strategien für die Krebsbehandlung zu erleichtern. Vor kurzem haben Bio-Mikrofluidik-Vorrichtungen für die Untersuchung zellulärer Reaktionen in vitro fließen Scherkraft, 12 chemische Gradienten, 13 und elektrische Reize 4 hergestellt worden. Die Herstellung von Bio-Mikrofluidik-Vorrichtungen mit Polydimethylsiloxan (PDMS) oder Polymethylmethacrylat (PMMA, als Acryl bekannt) erfolgreich verringert die Ausfallrate solcher Experimente. Darüber hinaus mit Acrylbasis mikrofluidischen Vorrichtungen als Prototyp für die Untersuchung von biologischen Fächern ist einfacher als mit PDMS-Chips. Verschiedene Funktionen in Acrylbasis Geräte sind für die Elektrotaxis Studie entwickelt. Jedoch keine der vorgenannten Ausführungen sind in der Lage, gleichzeitig zu testen, die Auswirkungen von verschiedenen chemischen Bedingungen und die elektrische Feld auf Zellen für electro Studie. So eine Mikrofluidikvorrichtung-MU entwickelten wirltichannel Dual-elektrischen Feldes (MDF) Chip-haltigen vier unabhängige Kulturkanäle und acht verschiedenen experimentellen Bedingungen in einem Chip. Die auf Acrylbasis MDF-Chip, die zuerst von Hou et al berichtet., 8 integriert elektrische Stimulation und mehrere chemisch getrennte Kanäle. Diese chemisch isoliert Kanäle können zur Kultur verschiedene Arten von Zellen in einem Experiment verwendet werden. Die dcEF in den Kanälen wird durch eine elektrische Stromversorgung hergestellt wird. Zwei unabhängige elektrische Felder, eine mit angelegten elektrischen Feldstärke (EFS) und ein weiteres mit 0 EFS, sind in jedem chemisch isolierten Kanal durchgeführt. Auf diese Weise bietet der Chip besser gesteuert koexistierenden EF und chemische Stimulation. Ferner ergibt sich aus der numerischen Simulation der chemischen Diffusion innerhalb der MDF-Chips anzuzeigen, dass keine Kontamination zwischen den Kanälen nach 24 h Versuchsdauer aufgetreten. 8 Gegenüber dem Device von Li berichtet, et al., bietet 14 der MDF-Chip einen größeren Kulturbereich, der für die weitere biochemische Analyse der elektrisch stimulierten Zellen ermöglicht. Zusätzlich mit größeren Beobachtungsbereich der MDF-Chips, mehr Zellen können in dem Test beobachtet werden, so dass die Analyse der Migrationsgeschwindigkeit bzw. Gerichtetheit der elektrisch stimulierten Zellen ist genauer. Einkanal-Chip-Designs früherer Studien von Huang et al. 4 und Tsai et al. 15 berichtet erlauben nur einen Zelltyp oder zu testenden Chemikalie. Jedoch kann die MDF-Chip verwendet, um die Wirkungen von verschiedenen Chemikalien auf electro sowie die Wirkungen der elektrischen Stimulation auf verschiedenen Zelltypen zu untersuchen. Mit anderen Worten ermöglicht die effiziente Untersuchung von chemischen Dosis Abhängigkeiten der MDF-Chip.

<table><tbody><tr><td>Reagenz</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM medium</td><td>Gibco,Invitrogen, USA</td><td>12800-017</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Gibco,Invitrogen, USA</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco,Invitrogen, USA</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Basic Life</td><td>BL2651</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 (Hydrochlorid)</td><td>Cayman Chemical Co</td><td>10005583</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>LONZO, USA</td><td>SeaKem LE AGAROSE</td><td></td></tr><tr><td>Spritze</td><td>Terumo</td><td>3 ml mit Luer-Kegel</td><td></td></tr><tr><td>3-Wege-Absperrhahn</td><td>Nipro</td><td>mit Luer-Kegel</td><td></td></tr><tr><td>PMMA (Acryl)</td><td>HiShiRon Industries CO., Ltd, Taiwan</td><td></td><td>Dicke 1mm, 2mm</td></tr><tr><td>Acryladapter</td><td>KuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Taiwan</td><td>1/4-28 Anschluss, 10x10x6 mm</td><td>kundenspezifische</td></tr><tr><td>Mutter</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>UPCHURCH:P-206x, P-200x, F120x, P-659, P-315x</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop-Deckglas</td><td>Deckgl&auml; ser, Deutschland</td><td>24x60 mm</td><td></td></tr><tr><td>doppelseitiges Klebeband</td><td>3M</td><td>PET 8018</td><td></td></tr><tr><td>Sekundenkleber</td><td>3M</td><td>Scotch Liquid Plus Super Glue</td><td></td></tr><tr><td>TFD4 Reinigungsmittel</td><td>Franklab, Frankreich</td><td>TFD4</td><td></td></tr><tr><td>Ultraschall Steri-Reiniger</td><td>LEO ULTRASONIC CO., LTD., Taiwan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thermo Bonder</td><td>KuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Taiwan</td><td>kundenspezifischer</td><td></td></tr><tr><td>CO2-Laser-Ritzer</td><td>LTT-Gruppe, Taiwan</td><td>ISL-II</td><td></td></tr><tr><td>Proportional-Integral-Derivat (PID) Controller</td><td>JETEC Electronics Co., Japen</td><td>TTM-J40-R-AB,</td><td></td></tr> <tr><td>K-Typ Thermoelement</td><td>TECPEL</td><td>TPK-02A</td><td></td></tr><tr><td>4-Kanal-Spritzenpumpe</td><td>KdScientific, USA</td><td>250P</td><td></td></tr><tr><td>DC-Netzteil</td><td>GWInstek, Taiwan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>X-Y-Z Motortisch</td><td>TanLian, E-O Co. Ltd., Taiwan</td><td>kundenspezifisches</td><td></td></tr><tr><td>inverses Mikroskop</td><td>Olympus, Japan</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>digitale SLR-Kamera</td><td>Canon, Japan</td><td>60D</td><td></td></tr></tbody></table>

electro studium der lungenkrebszellen unter verwendung eines mehrkanal-zwei elektrischen feldes mikrofluidik-chip

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

Das Verhalten des Richtzellmigration unter einem elektrischen Gleichstromfeld (dcEF) als Elektrotaxis bezeichnet. Die bedeutende Rolle von physiologischen dcEF in Führungszellbewegung während der Embryonalentwicklung, Zelldifferenzierung und bei der Wundheilung wurde in vielen Studien gezeigt worden. Durch Anlegen Mikrofluidik-Chips mit einem electro Assay wird der Untersuchungsprozess verkürzt und experimentelle Fehler minimiert werden. In den letzten Jahren mikrofluidischen Vorrichtungen Polymersubstanzen (beispielsweise Polymethylmethacrylat, PMMA, oder Acryl) oder Polydimethylsiloxan (PDMS) wurden weithin bei der Untersuchung der Reaktionen von Zellen auf eine elektrische Stimulation verwendet wird. Im Gegensatz zu den zahlreichen Schritte erforderlich, um eine PDMS-Gerät herzustellen, macht jedoch den einfachen und schnellen Aufbau der Acrylmikro fluidischen Chip ist für beide Geräte Prototyping und die Produktion geeignet. Die effiziente Untersuchung der simultanen chemischen und dcE noch keiner der gemeldeten Geräten erleichternF Wirkungen auf Zellen. In diesem Bericht beschreiben wir unsere Konstruktion und Herstellung eines Acrylbasierten Multichannel-Dual-elektrischen Feldes (MDF) Chip, um die gleichzeitige Wirkung der chemischen und elektrischen Stimulation auf Lungenkrebszellen zu untersuchen. Die MDF-Chip bietet acht Kombinationen von elektrischen / chemischen Reize in einem einzigen Test. Der Chip nicht nur stark verkürzt die erforderliche Versuchszeit, sondern erhöht auch die Genauigkeit in electro Studien.

Herstellung und Montage der Vorrichtung MDF Ein schematisches Diagramm des Acrylbasis MDF-Chip ist in 1A gezeigt. Vier Acrylplatten, einem Deckglas, 13 Acryl Adapter, und ein Stück doppelseitiges Klebeband wurde bei der Montage des fertig gestellten MDF-Chips (2D) verwendet. Es gibt nur vier unabhängige Kulturkanäle in der MDF-Gerät. Jedoch die On-Chip-Salzbrücke Netzwerk erze...

Viele mikrofluidische Geräte wurden für die Untersuchung von Elektrotaxis entwickelt. Keiner dieser Chips ermöglicht jedoch die effiziente Untersuchung der gleichzeitigen Auswirkungen chemischer und elektrischer Felder (EF) auf Zellen. Wir haben ein Gerät auf Basis von Polymethylmethacrylat entwickelt, das eine besser kontrollierte Koexistenz von EF und chemischer Stimulation für den Einsatz in der Elektrotaxieforschung bietet.

Electro Studium der Lungenkrebszellen unter Verwendung eines Mehrkanal-Zwei elektrischen Feldes Mikrofluidik-Chip

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

Das übergeordnete Ziel dieses mikrofluidischen Experiments besteht darin, die Wirkung von Kinaseninhibitoren auf die Migration von Tumorzellen unter einem direkten elektrischen Feld zu untersuchen. Diese Methode kann daher helfen, zentrale Fragen in der zellulären Elektrotaxis zu beantworten, beispielsweise, welche Signalwege bei der elektrischen Feld-gesteuerten Migration von Krebszellen entscheidend sind. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass es sich um eine hochgradig reproduzierbare und zeitsparende Elektrotaxis-Analyse handelt, die leicht umzusetzen ist.Die Bedeutung dieser Technik erstreckt sich auf die Diagnose der Metastasierungspotenz von Krebs. Da die Beweglichkeit magnetischer Krebszellen durch ein elektrisches Feld erhöht werden kann, kann diese Methode einen intrazellulären, elektrischen Test der Tumorzellen ermöglichen.Es kann auch bei Prozessen der Hautregeneration, wie der Wundheilung, angewendet werden. Beginnen Sie damit, mithilfe eines Zeichen- und Konstruktionsprogramms ein individuelles Muster für die Acrylschicht zu entwerfen. Speichern Sie das Muster und schalten Sie dann den Laserschreiber ein.Verbinden Sie den Schreiber mit dem Steuerungslaptop

electrotaxis-studies-lung-cancer-cells-using-multichannel-dual

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Forschung

JoVE Journal

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Biotechnik

Dieses Protokoll zeigt Methoden verwendet werden, um 2D-und 3D-Umgebungen in speziell angefertigten electrotactic Kammern einzurichten, die Zellen verfolgen...

Electric Field-gesteuerte gerichtete Wanderung von neuralen Vorläuferzellen in 2D-und 3D-Umgebungen

In diesem Protokoll zeigen wir, wie Sie benutzerdefinierte Kammern, die die Anwendung eines Gleichstrom elektrisches Feld an Zeitraffer-Aufnahmen von erwachsenen Gehirn abgeleitete neurale Vorläuferzellen Translokation während Galvanotaxis ermöglichen ermöglichen konstruieren.

A Galvanotaxis Assay für die Analyse von neuralen Vorläuferzellen Cell Migration Kinetics in einem von außen angelegten Direct Current Electric Field

Eine mikrofluidische Vortex Assisted Elektroporation Plattform wurde für die sequentielle Übertragung mehrerer Moleküle in Zellpopulationen identisch mit präzisen und unabhängigen Steuer Dosierung entwickelt. Größe basiert Zielzelle Reinigungsschritt voran Elektroporation des Systems geholfen, um molekulare Lieferung Effizienz und verarbeitet die Lebensfähigkeit der Zellen zu verbessern.

Microscale Vortex-unterstützte Electroporator für Sequential Molekulare Liefer

Wir stellen eine Methode vor, um ein physiologisches elektrisches Feld an wandernde, immortalisierte Prostatazellen in einer speziell angefertigten Galvanotaxiskammer anzulegen. Mit dieser Methode zeigen wir, dass 2 Linien von nicht-tumorigenen Prostatazellen im Feld unterschiedliche Grade der Migrationsrichtung aufweisen.

Verwendung Maßgeschneiderte Galvanotaxis Chambers zu Directional Migration Studie von Prostatazellen

Mikrofabrizierte Bauelemente, die mit fluidischen Komponenten integriert sind, bieten eine in vitro Plattform für Zellstudien, die die in vivo Mikroumgebung nachahmen. Wir haben Mikrofluidik-Chips auf Polymethylmethacrylat-Basis entwickelt, um zelluläre Reaktionen unter einzelnen oder koexistierenden chemischen/elektrischen/scheren Stressreizen zu untersuchen.

Entwerfen Mikrofluidiksysteme für ein Studium zellulären Reaktionen Unter Einzel- oder Coexisting Chemie / Elektro / Schubspannung Stimuli

Wir präsentieren ein mikrofluidisches Krebs-on-Chip-Modell, die "Evolution Accelerator"-Technologie, die eine kontrollierbare Plattform für langfristige Echtzeit-quantitative Studien zur Krebsdynamik innerhalb klar definierter Umweltbedingungen an der Einzelzelle bietet. niveau. Es wird erwartet, dass diese Technologie als In-vitro-Modell für die Grundlagenforschung oder die präklinische Arzneimittelentwicklung funktioniert.

Generierung heterogener Arzneimittelgradienten über Krebspopulationen auf einem mikrofluidischen Evolutionsbeschleuniger zur Echtzeitbeobachtung

In dieser Studie stellen wir ein Protokoll zur Differenzierung von neuronalen Stamm- und Vorläuferzellen (NPCs) vor, das ausschließlich durch Gleichstrom-Pulsstimulation (DC) in einem mikrofluidischen System induziert wird.

Elektrisch-Feld-induzierte neuronale Vorläuferzelldifferenzierung in mikrofluidischen Geräten

Dieses Protokoll beschreibt die Mikrofabrikationstechniken, die erforderlich sind, um ein mikrofluidisches Lab-on-a-Chip-Elektroporationsgerät zu bauen. Der Versuchsaufbau führt kontrollierte Transfektionen auf Einzelzellebene in einem kontinuierlichen Fluss durch und kann mit populationsbasierter Kontrolle auf höhere Durchsätze erweitert werden. Es wird eine Analyse bereitgestellt, die die Fähigkeit zeigt, den Grad der Permeabilisierung der Zellmembran in Echtzeit elektrisch zu überwachen.

Herstellung und Betrieb eines kontinuierlichen Durchfluss-Mikroelektroporationssystems mit Permeabilisierungsdetektion

Brustkrebszellen zeigen unterschiedliche dielektrische Eigenschaften im Vergleich zu Nicht-Tumor-Brustepithelzellen. Es wurde die Hypothese aufgestellt, dass aufgrund dieses Unterschieds in den dielektrischen Eigenschaften die beiden Populationen für Immuntherapiezwecke getrennt werden können. Um dies zu unterstützen, modellieren wir ein mikrofluidisches Gerät zur Sortierung von MCF-7- und MCF-10A-Zellen.

Mikrofluidisches Gerät zur Trennung von nicht-metastasierten (MCF-7) und nicht-tumoralen (MCF-10A) Brustkrebszellen mittels AC-Dielektrophorese

Der klinische Mikrofluidik-Chip ist eine wichtige biomedizinische Analysetechnik, die die Vorverarbeitung klinischer Patientenblutproben vereinfacht und zirkulierende Tumorzellen (CTCs) in situ auf dem Chip immunfluoreszent färbt, was den schnellen Nachweis und die Identifizierung eines einzelnen CTC ermöglicht.

Klinische Mikrofluidik-Chip-Plattform zur Isolierung vielseitig zirkulierender Tumorzellen

Hier stellen wir ein Protokoll zur Herstellung eines einzigartigen zweischichtigen mikrofluidischen Geräts vor, um die elektromechanische Regulation der Homöostase des Epithelgewebes zu untersuchen. Das Gerät legt statische physiologische elektrische Ströme senkrecht zur Gewebeebene an, die die Zell-Zell-Adhäsion, Proliferation und Extrusion beeinflussen. Lebendzell-Imaging und mechanische Stressmessungen enthüllen die Mechanismen dieser Prozesse.

Aufschluss über die elektromechanische Steuerung der Gewebehomöostase mit einem zweischichtigen mikrofluidischen Gerät

Erfahren Sie die Untersuchung von Elektrotaxis bei Lungenkrebszellen mit einem Mehrkanal-Mikrofluidik-Chip. Diese Methode ermöglicht die Bewertung von Kinase-Inhibitoren auf die Zellmigration unter elektrischen Feldern.

Electro Studium der Lungenkrebszellen unter Verwendung eines Mehrkanal-Zwei elektrischen Feldes Mikrofluidik-Chip

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