Transkutane Beurteilung der Nierenfunktion in Conscious Nagetiere

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Nierenfunktion transkutan zu messen, ohne dass Blutproben oder weitere experimentelle Analysen erforderlich sind. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Nephrologie zu beantworten, z. B. welche Auswirkungen die Verabreichung von Nierenschäden oder spezifischen therapeutischen Eingriffen auf die Nierenfunktion hat. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie minimal-invasiv ist und dass die Ergebnisse sofort nach der Messung ohne nachträgliche experimentelle Manipulationen analysiert werden können.

Diese Technik kann verwendet werden, um praktisch jede Nierenerkrankung bei mehreren verschiedenen Spezies zu untersuchen. Es ist auch nützlich, um sequentielle Messungen innerhalb eines Tieres durchzuführen. Bestätigen Sie vor Beginn des Eingriffs den richtigen Grad der Anästhesie, indem Sie die Zehen zusammendrücken.

Und verwenden Sie einen Elektrorasierer, um einen drei mal sechs Zentimeter großen Bereich Fell vom hinteren Unterbauch des Tieres zu entfernen. Entfernen Sie das restliche Fell mit Enthaarungscreme. Waschen Sie die entblößte Haut nach zwei bis drei Minuten gründlich, da die Creme eine gewisse Hintergrundfluoreszenz abgeben kann.

Platzieren Sie anschließend das optische Gerät zur Messung der Nierenfunktion auf einer Seite eines doppelseitigen Klebepflasters. Positionieren Sie den optischen Teil über dem transparenten Fenster und lassen Sie die gegenüberliegende Seite mit Schutzfolie bedeckt. Befestigen Sie dann ein Stück doppelseitiges Klebepflaster in der passenden Größe an der Batterie.

Wiegen Sie das Tier vor dem Befestigen des Geräts. Schneiden Sie dann ein Stück schlauchförmige, elastische Mullbinde ab, die etwa einen Zentimeter länger ist als die Breite des doppelseitigen Klebepflasters. Und ziehen Sie den Verband über den Kopf des Tieres.

Bringen Sie das Tier anschließend in Rückenlage und lassen Sie die rasierte Stelle unbedeckt. Und stecken Sie den Batteriestecker in den entsprechenden Anschluss am Gerät. Wenn die Batterie richtig angeschlossen wurde, beginnt das Gerät zu blinken.

Entfernen Sie die Schutzfolie von der anderen Seite des Pflasters, das an der Batterie befestigt ist. Montieren Sie den Akku auf der Oberseite des Geräts. Entfernen Sie nun die Schutzhülle vom Bediengerätepflaster und halten Sie die Kanten fest, bis sie richtig fixiert sind, und legen Sie das Pflaster auf die rasierte Stelle auf dem Rücken des Tieres.

Decken Sie das Gerät mit der röhrenförmigen elastischen Mullbinde ab und achten Sie darauf, dass die Bandage vollständig über den Bauch gespannt ist, während Sie darauf achten, dass sich die Gliedmaßen frei bewegen können. Eine gute Fixierung ist entscheidend, um Bewegungsartefakte während der Messung zu vermeiden, daher achten Sie bitte darauf, dass das Gerät vor Beginn der Messung richtig befestigt ist. Wenn der Verband an Ort und Stelle ist, kleben Sie einen Streifen mit größenangepasstem Klebeband über das Gerät, so dass er die Drähte der Batterie bedeckt.

Und messen Sie den Hintergrundwert für ein bis drei Minuten, ohne Druck auf das Gerät auszuüben. Zur Verabreichung von FITC-Sinistrin wird nach dem Aufwärmen des Schwanzes des Tieres zur Erweiterung der Schwanzvenen die entsprechende Menge FITC-Sinistrin-Stammlösung intravenös injiziert. Setzen Sie das Tier dann vorsichtig alleine in seinen Heimkäfig ohne Wasser oder Drahtdeckel.

Achten Sie darauf, keine Bewegungsartefakte einzuführen. Zeichnen Sie dann die vom FITC-Sinistrin emittierte Fluoreszenz mit dem optischen Gerät für den entsprechenden experimentellen Zeitraum auf. Entfernen Sie am Ende des Aufnahmezeitraums vorsichtig das Klebeband und anschließend den Schlauchverband.

Lösen Sie dann das doppelseitige Klebepflaster vorsichtig von der Haut. Und setzen Sie das Tier in seinen normalen Heimkäfig zurück. Um die Daten auszulesen, trennen Sie den Akku vom Gerät und entfernen Sie den Klebeflicken.

Verwenden Sie dann ein Micro-USB-Kabel, um den optischen Rekorder an einen Computer anzuschließen und die Daten mit der entsprechenden Software herunterzuladen. Verwenden Sie abschließend die entsprechende Software, um die Eliminationskinetikkurve gemäß den Softwareprotokollen zu erstellen. Öffnen Sie die Punkt-CSV-Datei mit den Daten.

Wenn die Nierenfunktion beeinträchtigt ist, erhöht sich die FITC-Sinistrin-Halbwertszeit. Aufgrund der verminderten Ausscheidung der Substanz und des Aussehens verändert sich die Kurve. In der Regel kehrt die gemessene Kurve nicht auf den Hintergrundpegel zurück und es wird eine vergrößerte Fläche unter der Kurve beobachtet.

Bei ein und demselben Tier zeigten Messungen vor bis nach der Verletzung einen Anstieg der maximalen Fluoreszenzintensität aufgrund einer Akkumulation des Markers, die durch seine verminderte Ausscheidung verursacht wurde. So zeigt die transkutan gemessene FITC-Sinistrin-Kurve bei Nierenversagen aufgrund der stark beeinträchtigten Funktion des Nierengewebes einen Steady State. Darüber hinaus wurde das miniaturisierte Gerät erfolgreich zur Messung der Nierenfunktion bei mehreren Nagetierstämmen mit einer Vielzahl unterschiedlicher Gesundheitszustände eingesetzt.

Dies unterstreicht die Eignung und Empfindlichkeit des Geräts zur Erkennung von Veränderungen aufgrund von Nierenerkrankungen und Alterung. Sobald das Experiment gemeistert ist, kann es in 50 Minuten vollständig aufgebaut werden, wobei mindestens vier Tiere pro Stunde von einem einzigen Experimentator bewertet werden können. Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, das elektronische Gerät zu schützen, indem Sie die Wasserversorgung und alle hervorstehenden Strukturen während des Messzeitraums entfernen.