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DOI: 10.3791/53797-v
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Kulturen mit niedriger Dichte von primären hippokampalen Neuronen benötigen normalerweise eine Glia-Feeder-Schicht, um neurotrophe Faktoren zu liefern und die Langlebigkeit zu erhalten. Wir beschreiben hier eine vereinfachte Methode zur Kultivierung von Neuronen mit extrem niedriger Dichte auf Glasdeckgläsern in Gegenwart einer neuronalen Feeder-Schicht mit hoher Dichte, die die Untersuchung spezifischer neuronal-autonomer Mechanismen erleichtert.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, gesunde Langzeitkulturen von primären Hippocampus-Neuronen der Maus mit extrem niedriger Dichte zu etablieren, um die immunzytochemische Markierung und die Untersuchung der autonomen Mechanismen neuronaler Zellen zu erleichtern. Diese Studie kann dazu beitragen, einige Schlüsselfragen im Bereich der neurowissenschaftlichen Forschung zu verstehen, wie z. B. die Studien über die Spezifität von Proteinen in der Neuromorphologie der Entwicklungsfunktion. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie es Neuronen ermöglicht, mit extrem geringer Dichte auf einem Deckglas zu wachsen, ohne die Unterstützung einer glialen Feeder-Schicht.
Das Verfahren wird von Mariel Piechowicz, einer Studentin aus meinem Labor, demonstriert. Bereiten Sie zwei 24-Well-Platten mit hoher und zwei 24-Well-Platten mit niedriger Dichte vor. Ätzen Sie mit einer 28-Gauge-Nadel den Boden von 24-Well-Platten, so dass die verschobenen Kunststoffe als Stütze für die Deckgläser dienen, auf denen Neuronen mit geringer Dichte wachsen.
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