Optische Kontrolle eines Neuronal Protein eine genetisch kodierter unnatürliche Aminosäure in Neurons Verwendung

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Funktion eines neuronalen Proteins mit Hilfe einer genetisch kodierten, unnatürlichen Aminosäure in Neuronen optisch zu steuern. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen über den Beitrag eines spezifischen neuronalen Proteins zur neuronalen Signalübertragung in der Gehirnfunktion mit räumlicher und zeitlicher Auflösung zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie das Potenzial hat, auf verschiedene neuronale Proteine angewendet zu werden, um eine optische Regulation verschiedener neuronaler Prozesse zu erreichen.

Beginnen Sie dieses Verfahren, indem Sie Hippocampus-Neuronen auf Deckgläser in einer 24-Well-Platte mit 500 Mikrolitern Wachstumsmedium plattieren, nachdem Sie durch ein 40-Mikrometer-Nylonnetz filtriert haben. Danach inkubieren Sie die neuronale Kultur bei 35 Grad Celsius in einem mit fünf Prozent Kohlendioxid und 95 Prozent Luft befeuchteten Inkubator für 2 bis 3 Wochen. Am Tag der Transfektion wird eine frische 2,5-molare Calciumchloridlösung in doppelt destilliertem Wasser hergestellt und mit einem 0,22-Mikrometer-Filter sterilfiltriert.