Name: Einzellige Quantifizierung der mRNA und Oberfläche Protein-Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infizierten CD4+ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 13 s
Description: Erfahren Sie die Einzelzell-Quantifizierung von mRNA und Oberflächenproteinen in SIV-infizierten CD4+ T-Zellen von Rhesus-Makaken. Diese Methode ermöglicht die Analyse differentieller Genexpression.

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Die Autoren möchten NIAID VRC Flow Cytometry Kern und die MHRP Flow Cytometry Kern Einrichtungen für Wartung und Betrieb von FACS Instrumenten und Sortieranlagen danken; Maria Montero, Vishakha Sharma, Kaimei Song für kompetente technische Unterstützung; Michael Piatak, Jr. (verstorben), für die Unterstützung mit SIV qPCR Assay Design; und Brandon Keele und Matthew Scarlotta für SIV isolieren Sequenzen. Geäußerten Meinungen sind diejenigen der Autoren und sind nicht zur Darstellung der Positionen von der US-Armee oder das Department of Defense auszulegen. Forschung wurde durchgeführt unter einem genehmigten Tierversuche-Protokoll in einer AAALAC akkreditierten Einrichtung im Einklang mit dem Tierschutzgesetz und andere Bundesgesetze und Verordnungen in Bezug auf Tiere und Experimente mit Tieren und hält sich an Prinzipien in der Anleitung für die Pflege und Verwendung der Versuchstiere, NRC Publikation, Ausgabe 2011 angegeben.

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Diese Arbeit wurde durch einen Kooperationsvertrag unterzeichnet (W81XWH-07-2-0067) zwischen die Henry M. Jackson Foundation für die Weiterentwicklung der militärischen Medizin, Inc., und das US Department of Defense (DOD) unterstützt. Geäußerten Meinungen sind diejenigen der Autoren und sind nicht zur Darstellung der Positionen von der US-Armee oder das Department of Defense auszulegen. Forschung wurde durchgeführt unter einem genehmigten Tierversuche-Protokoll in einer AAALACi akkreditierten Einrichtung im Einklang mit dem Tierschutzgesetz und andere Bundesgesetze und Verordnungen in Bezug auf Tiere und Experimente mit Tieren und hält sich an Prinzipien in der Anleitung für die Pflege und Verwendung der Versuchstiere, NRC Publikation, Ausgabe 2011 angegeben.

Das Protokoll hier beschriebenen, genannt tSCEPTRE, einzellige Oberfläche Protein Quantifizierung von multiparameter Durchflusszytometrie mit quantitativen einzellige mRNA Expression von hoch Multiplex RT-qPCR integriert. Die Vereinigung dieser beiden Technologien ermöglicht High-Content Momentaufnahmen des kombinierten transkriptionelle und Protein Profil einzelner Zellen in einem Hochdurchsatz-Format. Wir verwenden die Methode bisher schwer mit SIV in Vivoinfizierte Zellen identifizieren und beschreiben Host d...

Viele intrazelluläre Erreger abhängig von Host Cell Maschinen zu replizieren, oft Host Zellbiologie zu verändern oder gezielt ganz bestimmte Subpopulationen von Wirtszellen zu maximieren Sie ihre Chancen auf Fortpflanzung. Infolgedessen sind biologischer Zellprozesse häufig gestört, mit schädlichen Folgen für die allgemeine Gesundheit des Wirts. Verständnis der Wechselwirkungen zwischen Viren und den Wirtszellen, in denen sie replizieren, wird Krankheitsmechanismen aufzuklären, die in die Entwicklung von verbesserten Therapien und Strategien helfen kann, um Infektionen zu vermeiden. Direkte Analyse Tools, mit denen das Studium der Wirt-Pathogen Interaktionen sind zu diesem Zweck unerlässlich. Einzellige Analyse bietet die einzige Möglichkeit, eindeutig einen zellulären Phänotyp einer bestimmten Genotyp oder einer Infektion Wartestatus1zuzuschreiben. Beispielsweise bedeuten pathogene Infektionen häufig sowohl direkte als auch indirekte Änderungen in Wirtszellen. Daher unterscheiden infizierte Zellen von nicht infizierten Gegenstücke ist notwendig, um Host Zelle Attributänderungen entweder direkte Infektion oder Nebenwirkungen, wie z. B. generalisierte Entzündung. Darüber hinaus für viele Krankheitserreger wie SIV und Human-Immundefizienz-Viren (HIV), Host Zelle Infektion durchläuft mehrere Phasen, wie früh, spät oder latent, von denen jedes kann durch verschiedene Gene und Protein-Expression profile2 gekennzeichnet werden , 3 , 4 , 5. Bulk Analysen der Zelle Mischungen fehl, diese Heterogenität6zu erfassen. Dagegen sehr gemultiplext einzellige Analysen den Ausdruck beider Viren quantifizieren und Host Gene bieten ein Mittel zur Infektion-spezifische zelluläre Störungen, einschließlich Variationen über Stadien der Infektion zu beheben. Darüber hinaus analysieren Wirt-Pathogen Interaktionen in physiologisch relevante Einstellungen ist entscheidend für die Identifizierung der Ereignisse, die in infizierten Organismen auftreten. Also Methoden, die angewendet werden können, direkt ex Vivo sind wahrscheinlich beste Aufnahme in Vivo verarbeitet.
SIV und HIV Ziel CD4+ T-Zellen, in denen sie Host antivirale "Einschränkung" Faktoren und Downregulate antigenpräsentierende Moleküle, um produktive Infektion zu etablieren und zu vermeiden immunüberwachung7,8, entgegenwirken, 9,10,11. Ohne Behandlung führt die Infektion zu massiven Verlust von CD4+ T Zellen letztlich gipfelte in erworbene Immunschwäche-Syndrom (AIDS)12. In der Einstellung der antiretroviralen Therapie bestehen bleiben latent infizierten Zelle Stauseen jahrzehntelang posiert eine beeindruckende Sperre zu kurativen Strategien. Verständnis der Eigenschaften von in Vivo HIV/SIV-infizierten Zellen hat das Potenzial, Host Zelle Funktionen in der Pathogenese und Beharrlichkeit zu offenbaren. Allerdings ist dies sehr, vor allem aufgrund der Low frequency der infizierten Zellen und Reagenzien in der Lage, sie leicht zu identifizieren eine Herausforderung gewesen. Zellen, die virale RNA transkribiert werden voraussichtlich bei 0,01-1 % der CD4-Zellen im Blut und Lymphgewebe13,14,15+ T. Unter suppressive Therapie sind latent infizierte Zellen sogar seltener um 10-3– 10-7 16,17,18. Virale Protein Beflecken assays, dass Arbeit auch für ein Studium in Vitro Infektionen, wie z. B. intrazellulären Gag sind suboptimale aufgrund Hintergrundfärbung von 0,01-0,1 %, ähnlich wie oder größer als die Häufigkeit der infizierten Zellen13, 14. Oberfläche Beflecken für Env Protein mit gut charakterisierten SIV von HIV/AIDS Env-spezifischen monoklonalen Antikörpern ist auch nachgewiesen worden, wahrscheinlich aus ähnlichen Gründen schwierig sein. Vor kurzem, neuartige Werkzeuge wollen die Erkennung von Zellen Gag zu äußern, indem entweder verbessern Integration Tests speziell für Gag RNA oder durch die Verwendung alternativer bildgebender Technologien14,15,19. Solche Ansätze bleiben jedoch beschränkt auf jede Zelle die Anzahl der quantitativen Messungen durchgeführt.
Wir beschreiben hier, Methodik, die (1) einzige Virus-infizierten Zellen identifiziert direkt ex Vivo von empfindlichen und spezifischen viralen Gens quantitative qPCR und (2) den Ausdruck von bis zu 18 Oberflächenproteine und 96 Gene für jeden infizierten quantifiziert (und nicht infizierte) Zelle. Diese Methode kombiniert einzelne Zelle Oberfläche Protein Messung durch FACS gefolgt von unmittelbaren Zelle Lysis und Gen-Ausdruck Analyse mit gezielten qPCR auf dem Biomark System gemultiplext. Die integrierte fluidische Schaltung (IFC) Technologie ermöglicht Multiplex Quantifizierung 96 Gene von 96 Proben gleichzeitig erreicht, indem eine Matrix von 9.216 Kammern, in denen die einzelnen qPCR Reaktionen durchgeführt werden. Die live FACS Zellsortierung zeichnet High-Content Protein Fülle Messungen während Erhaltung der gesamten transkriptoms für Analyse sofort durchgeführt stromabwärts. Um Virus-infizierten Zellen zu identifizieren, sind Tests speziell für Alternativ gespleißt und unspliced viralen RNAs (vRNA) enthalten in der qPCR-Analyse, zusammen mit einer Gruppe von benutzerdefinierten Assays in Höhe von bis zu 96 Gene, die Höchstzahl Assays, die derzeit untergebracht die IFC. Die Genexpression und Protein erfassten Daten für die einzelnen Zellen sind durch gut Position verbunden. Wir berichteten bereits Ergebnisse aus dieser Analyse an anderer Stelle20. Hier bieten wir detaillierte methodische Richtlinien sowie weitere beschreibende Phänotypisierung von SIV-infizierten CD4+ T Zellen.
Dieser Ansatz, den wir tSCEPTRE nennen, kann an den Aufhängungen lebensfähigen Zellpopulation reaktiv, eindringmittel beschriftete Antikörper und mit dem Ausdruck einer Transkriptom kompatibel zur Verfügung qPCR Tests angewendet werden. Beispielsweise kann es für die Charakterisierung von differenziellen gen- und Proteinexpression in seltenen Zellen oder Zellen, die nicht leicht zu unterscheiden durch Oberfläche Protein-Marker verwendet werden. Die Probenvorbereitung stützt sich auf einen Standard Färbeprotokoll mit handelsüblichen Antikörpern. Cytometers mit einzelligen Sortier-Funktion sind auch im Handel erhältlich, aber zusätzliche biologische Sicherheit Vorsichtsmaßnahmen sind erforderlich für die Bearbeitung von infektiöser lebenden Zellen. Aufnahme der Single – Cell Protein Expressionsprofil für jede Zelle durch gut Lage, hierin ist als indiziert, Sortierung, ein gemeinsames Merkmal der im Handel erhältlichen FACS sortieren Software. Computergestützte Analyse von Host differentiell exprimierten Gene zwischen Zell-Populationen von Interesse ist hier nicht beschrieben, sondern Verweise werden bereitgestellt, um zuvor veröffentlichten Methoden.

<table><tbody><tr><td> RNA-Extraktions- und PCR-Reagenzien und Verbrauchsmaterialien </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Genemate 96-Well-PCR-Platte mit halbem Rand </td><td> BioExpress/VWR </td><td> T-3060-1 </td><td></td></tr><tr><td> selbstklebende PCR-Plattendichtungen </td><td> ThermoFisher </td><td> AB0558 </td><td></td></tr><tr><td> Armadillo 384-Well-PCR-Platte </td><td> ThermoFisher </td><td> AB2384 </td><td></td></tr><tr><td> MicroAmp Optischer Klebefilm </td><td> Applied Biosystems/ThermoFisher </td><td> 4311971 </td><td></td></tr><tr><td> DEPC Wasser </td><td> Quality Biological </td><td> 351-068-101 </td><td></td></tr><tr><td> Destilliertes Wasser aus Glas </td><td> Teknova </td><td> W3345 < </td><td></td></tr><tr><td> p>Superscript III Platinum One-Step qRT-PCR Kit </td><td> Invitrogen/ThermoFisher </td><td> 11732088 </td><td></td></tr><tr><td> SUPERase-In Rnase Inhibitor </td><td> Invitrogen/ThermoFisher </td><td> AM2696 </td><td></td></tr><tr><td> Platinum Taq </td><td> Invitrogen/ThermoFisher </td><td> 10966034 </td><td></td></tr><tr><td> dNTP Mix </td><td> Invitrogen/ThermoFisher </td><td> 18427088 </td><td></td></tr><tr><td> ROX Referenzfarbstoff (falls vom Kit getrennt) </td><td> Invitrogen/ThermoFisher </td><td> 12223012 </td><td></td></tr><tr><td> DNA-Suspensionspuffer </td><td> Teknova </td><td> T0223 </td><td></td></tr><tr><td> RNAqueous kit </td><td> Invitrogen/ThermoFisher </td><td> AM1931 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Genexpressionsassays, die nicht in Tabelle 2 aufgeführt sind </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> CD6 </td><td> Applied Biosystems/ThermoFisher </td><td> Hs00198752_m1 </td><td></td></tr><tr><td> TLR3 </td><td> Applied Biosystems/ThermoFisher </td><td> Hs1551078_m1 </td><td></td></tr><tr><td> Biomark Reagenzien </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Control Line Fluid Kit </td><td> Fluidigm </td><td> 89000021 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Universal PCR Mix </td><td> Applied Biosystems/ThermoFisher </td><td> 4304437 </td><td></td></tr><tr><td> Assay Loading Reagenz </td><td> Fluidigm </td><td> 85000736 </td><td></td></tr><tr><td> Sample Loading Reagenz </td><td> Fluidigm </td><td> 85000735 </td><td></td></tr><tr><td> Dynamic Array 96.96 (Chip) </td><td> Fluidigm </td><td> BMK-M-96.96 </td><td></td></tr><tr><td> FACS-Reagenzien </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> SPHERO COMPtrol Goat Anti-Maus (Lambda) </td><td> Spherotech Inc.<td> > CMIgP-30-5H </td><td></td></tr><tr><td> CompBeads Anti-Mouse Ig,k </td><td> BD Biosciences </td><td> 51-90-9001229 < </td><td></td></tr><tr><td> p>5 ml Polystyrol-Röhrchen mit Siebkappe </td><td> FALCON </td><td> 352235 </td><td></td></tr><tr><td> Aqua Live/Dead stain </td><td> Invitrogen/ThermoFisher </td><td> L34976 </td><td> verdünnt 1:800 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human-CD3 BV650-Klon SP34-2<td> > BD Biosciences </td><td> 563916 </td><td> verdünnt 1:40</tr><tr><td> > Maus Anti-Human-CD4 BV786-Klon L200 </td><td> BD Biosciences </td><td> 563914 </td><td> verdünnt 1:20 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human-CD8 BUV496 Klon RPA-T8 </td><td> BD Biosciences </td><td> 564804<td> > verdünnen 1:10</tr><tr><td> > Maus Anti-Human-CD28 BV711 Klon CD28.2 </td><td> Biolegend </td><td> 302948 </td><td> verdünnt 1:20 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human CD95 BUV737 Klon DX2 </td><td> BD Biosciences </td><td> 564710 </td><td> verdünnt 1:10 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human-CD14 BV510 Klon M5E2 </td><td> Biolegend </td><td> 301842 </td><td> verdünnt 1:83</tr><tr><td> > Maus Anti-Human-CD16 BV510-Klon 3G8 </td><td> Biolegend </td><td> 302048 </td><td> verdünnt 1:167 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human-CD20 BV510-Klon 2H7 </td><td> Biolegend </td><td> 302340 </td><td> verdünnt 1:37 </td></tr><tr><td> Anti-CD38-R PE-Klon OKT10 </td><td> NHP Reagenzienreagenz </td><td> N/A </td><td> verdünnt 1:100 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human-CD69 BUV395 Klon FN50 </td><td> BD Biosciences </td><td> 564364 </td><td> verdünnt 1:10 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human HLA-DR APC-H7 Klon G46-6 </td><td> BD Biosciences </td><td> 561358<td> > verdünnt 1:20 </td></tr><tr><td> Maus Anti-Human-ICOS Alexa Fluor 700 Klon C398.4A </td><td> Biolegend </td><td> 313528<td> > verdünnt 1:80 </td></tr><tr><td> Instruments </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> BioPrptect Containment Enclosure </td><td> Baker </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BD FACS Aria </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ProtoFlex Dual 96-Well-PCR-System </td><td> Applied Biosystems/ThermoFisher </td><td> 4484076 </td><td></td></tr><tr><td> Quant Studio 6 qPCR-Gerät </td><td> Applied Biosystems/ThermoFisher </td><td> 4485694 </td><td></td></tr><tr><td> IFC-Controller HX </td><td> Fluidigm </td><td> IFC-HX </td><td></td></tr><tr><td> Biomark HD </td><td> Fluidigm </td><td> BMKHD-BMKHD </td><td></td></tr></tbody></table>

einzellige quantifizierung der mrna und oberfläche protein-expression in simian immunodeficiency virus-infizierten cd4+ t zellen isoliert von rhesus-makaken

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Einzellige Analyse ist ein wichtiges Instrument für heterogene Populationen von Zellen zu sezieren. Die Identifizierung und Isolierung von seltenen Zellen können schwierig sein. Um diese Herausforderung zu meistern, eine Methodik kombinieren indiziert Durchflusszytometrie und Hochdurchsatz-Multiplex quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) entwickelt wurde. Ziel war es, zu identifizieren und zu charakterisieren, simian immunodeficiencyvirus (SIV)-infizierten Zellen in Rhesus-Makaken. Durch Quantifizierung der Oberfläche Protein durch Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung (FACS) und mRNA von qPCR sind Virus-infizierten Zellen durch virale Genexpression identifiziert, kombiniert mit Host-gen und Protein Messungen ein mehrdimensionales Profil erstellen . Wir bezeichnen den Ansatz, gezielte einzellige Proteo-transcriptional Bewertung oder tSCEPTRE. Um die Methode auszuführen, sind vitaler Zellen spezifisch für oberflächenmarker verwendet für FACS Isolierung einer Zelle Teilmenge und/oder nachgeschalteten phänotypische Analyse mit fluoreszierenden Antikörpern gefärbt. Einzelne Zellen werden gefolgt von sofortige Lyse, Multiplex-reverse Transkription (RT), PCR Vorverstärkung und hohem Durchsatz qPCR bis zu 96 Transkripte sortiert. FACS-Messungen sind aufgenommen in die Zeit des Aussortierens und anschließend mit Genexpressionsdaten von gut Lage, einem kombinierten Protein und transkriptionellen Profil zu schaffen. Zur Untersuchung der SIV-infizierten Zellen direkt Ex Vivo, Zellen wurden von qPCR Erkennung von mehrere virale RNA-Spezies identifiziert. Die Kombination von viralen Transkripte und die Menge der einzelnen bilden den Rahmen für die Klassifizierung von Zellen in verschiedene Phasen des viralen Lebenszyklus (z.B.im Vergleich zu nicht-produktiven produktiv). Darüber hinaus wurden tSCEPTRE von SIV+ Zellen im Vergleich zu nicht infizierten Zellen isoliert von der gleichen Probe Host differentiell exprimierten Genen und Proteinen zu beurteilen. Die Analyse ergab bisher verkannte virale RNA Ausdruck Heterogenität unter den infizierten Zellen als auch in Vivo SIV-vermittelten posttranskriptionelle Genregulation mit einzelligen Auflösung. Die tSCEPTRE Methode ist relevant für die Analyse einer Zellpopulation Identifizierung durch Ausdruck der Oberfläche Protein Marker(s), Host oder Erreger ursächlich oder Kombinationen davon zugänglich.

Der Workflow für das gesamte Protokoll wird in Abbildung 1dargestellt. Es besteht aus zwei Varianten definiert durch die Anzahl der Zellen sortiert: entweder begrenzende Verdünnung oder als einzelne Zellen, wie im Text beschrieben. Beispiele für Primer-Sonden Qualifikation Analysen auf 2-fold RNA Verdünnungsreihen sind in Abbildung 2dargestellt. Die gating Strategie identifizieren potenzielle SIV+ -Zellen ist in <stron...

Beschrieben ist eine Methodik, die Expression von Genen 96 quantitate und 18 Oberflächenproteine von einzelnen Zellen Ex Vivo, ermöglicht die Identifizierung von differenziell ausgedrückt, Genen und Proteinen in Virus-infizierten Zellen im Verhältnis zu nicht infizierten Zellen. Wir wenden das Konzept Studie SIV-infizierten CD4+ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken.

Einzellige Quantifizierung der mRNA und Oberfläche Protein-Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infizierten CD4+ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken

Single-cell analysis is an important tool for dissecting heterogeneous populations of cells. The identification and isolation of rare cells can be ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen auf dem Gebiet der Wirt-Pathogen-Wechselwirkungen zu beantworten, wie die einzigartigen Eigenschaften der produktiv infizierten Zellen, welche Wirtskofaktoren es Viren ermöglichen, eine produktive Infektion zu etablieren, und wie diese Zellen in therapeutischen Interventionen gezielt werden können. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie quantitative Maßnahmen sowohl für Proteine als auch für mRNA in einzelnen Zellen bereitstellt und die meisten Reagenzien im Handel erhältlich sind. Demonstriert wird das Verfahren zur Zellsortierung von Matthew Creegan, einem leitenden Techniker aus dem Flow-Zytometrie-Kern im Labor von Doktor Michael Eller.Zunächst bereiten Sie in einer bestimmten Prä-PCR-Molekularbiologie-Workstation den Assay-Mix vor, indem Sie 96 Genexpressions-Assays in einer RNase, DNase-Freirohr, kombinieren, die sicherstellen, dass jeder Assay zu einer Endkonzentration von 180 Nanomolaren von Vorwärts- und Rückwärtsprimern hinzugefügt wird. Fügen Sie einen DNA-Suspensionspuffer hinzu, um die entsprechende Verdünnung des Assay-Mixzus zu erreichen. Für jedes erwartete 96 mal 96 Chip-Array pipette sechs Mikroliter pro Assay in e

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Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Eine Technik, die Kombination von in situ-Tetramer-Färbung und in situ-Hybridisierung (ISTH) ermöglicht die Visualisierung, Kartierung und Analyse der räumlichen Nähe von Virus-spezifischen CD8 + T-Zellen, um ihre Virus-infizierte Zielzellen, und die Bestimmung der quantitativen Beziehungen zwischen diesen Immunsystem Effektoren und Targets auf eine Infektion Ergebnisse.

Eine Technik, um gleichzeitig zu visualisieren Virus-spezifische CD8 + T-Zellen und Virus-infizierten Zellen In situ</em

Wir demonstrieren den Nutzen des multicolor Durchflusszytometrie für detaillierte phänotypische und funktionelle Charakterisierung von insgesamt sowie Speicherprodukte Teilmengen von CD4 + und CD8 + T-Zellen in Rhesusaffen, das ideale Modell für HIV / AIDS-Impfstoff-Studien.

Multicolor Durchflusszytometrie Analysen der zellulären Immunantwort in Rhesusaffen

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Charakterisierung von CD8+-Gedächtnis-T-Zellen, die spezifisch für das Affenimmundefizienzvirus (SIV) sind, unter Verwendung von Peptid-Haupthistokompatibilitätskomplex Klasse I (pMHC-I) Tetrameren. Ein pMHC-I-Tetramer ist ein Komplex aus vier MHC-I-Molekülen, die an SIV-spezifische Peptide gebunden und an ein Fluorophor konjugiert sind. Diese Tetramere binden selektiv an T-Zell-Rezeptoren (TCRs) auf SIV-spezifischen CD8+ T-Zellen, was die...

Eine Peptid-MHC-I-Tetramer-Färbetechnik zur Analyse von SIV-spezifischen CD8+-Gedächtnis-T-Zellen

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Hier beschreiben wir eine Methode, die kombiniert in Situ MHC-Tetramer Färbung mit Immunohistochemistry, Lokalisierung, Phänotyp und Menge an Antigen-spezifische T-Zellen im Gewebe zu bestimmen. Dieses Protokoll wird verwendet, um die räumliche und phänotypischen Merkmale der Antigen-spezifische CD8 T-Zellen im Vergleich zu anderen Zelltyp und Strukturen im Gewebe zu bestimmen.

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Quantitative High-throughput Single-cell Zytotoxizitätstest für T-Zellen

Erfahren Sie die Einzelzell-Quantifizierung von mRNA und Oberflächenproteinen in SIV-infizierten CD4+ T-Zellen von Rhesus-Makaken. Diese Methode ermöglicht die Analyse differentieller Genexpression.

Einzellige Quantifizierung der mRNA und Oberfläche Protein-Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infizierten CD4+ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken (Video) | JoVE Journal

Einzellige Quantifizierung der mRNA und Oberfläche Protein-Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infizierten CD4⁺ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken

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