Einzellige Quantifizierung der mRNA und Oberfläche Protein-Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infizierten CD4+ T Zellen isoliert von Rhesus-Makaken

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen auf dem Gebiet der Wirt-Pathogen-Wechselwirkungen zu beantworten, wie die einzigartigen Eigenschaften der produktiv infizierten Zellen, welche Wirtskofaktoren es Viren ermöglichen, eine produktive Infektion zu etablieren, und wie diese Zellen in therapeutischen Interventionen gezielt werden können. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie quantitative Maßnahmen sowohl für Proteine als auch für mRNA in einzelnen Zellen bereitstellt und die meisten Reagenzien im Handel erhältlich sind. Demonstriert wird das Verfahren zur Zellsortierung von Matthew Creegan, einem leitenden Techniker aus dem Flow-Zytometrie-Kern im Labor von Doktor Michael Eller.

Zunächst bereiten Sie in einer bestimmten Prä-PCR-Molekularbiologie-Workstation den Assay-Mix vor, indem Sie 96 Genexpressions-Assays in einer RNase, DNase-Freirohr, kombinieren, die sicherstellen, dass jeder Assay zu einer Endkonzentration von 180 Nanomolaren von Vorwärts- und Rückwärtsprimern hinzugefügt wird. Fügen Sie einen DNA-Suspensionspuffer hinzu, um die entsprechende Verdünnung des Assay-Mixzus zu erreichen. Für jedes erwartete 96 mal 96 Chip-Array pipette sechs Mikroliter pro Assay in einen bestimmten Brunnen einer 96 well PCR Platte, dann versiegeln Sie die Platte mit einem Klebstoff.