Generierung definierter genomischer Modifikationen mit CRISPR-CAS9 in humanen pluripotenten Stammzellen

Die Untersuchung der Genfunktion und Krankheit wird durch die Auszucht der menschlichen Bevölkerung behindert. Die unterschiedlichen genetischen Hintergründe patientenspezifischer und kontrollierbarer iPS-Zelllinien können die Differenzierungseffizienz und Phänotypen in einem gegebenen funktionellen Test beeinflussen. Die Verwendung genetisch identischer oder isogener Linien, bei denen der einzige Unterschied darin besteht, dass die besondere Mutation von Interesse entscheidend ist, um diese Probleme zu überwinden.

Viele menschliche Krankheiten werden durch heterozygote Mutationen verursacht, die mit dem CRISPR-Cas9-System nur schwer zu erzeugen sind. Dies ist auf die Erzeugung von Indelmutationen im nicht zielgerichteten Allel zurückzuführen, die bei sehr hoher Frequenz auftreten können. Unsere Technik überwindet dieses Problem, indem sie zwei Reparaturvorlagen verwendet, von denen nur eine die Mutation des Interesses birgt.