Hochauflösende Live-Cell-Bildgebung subzellulärer Strukturen

Unser Protokoll verwendet regelmäßige Fluorophorsonden und einfache Probenvorbereitungstechniken, die die abgebildete Zelle in physiologischem Zustand halten, um hochdynamische zelluläre Prozesse und detaillierte subzelluläre Strukturen zu untersuchen. Diese Technik ermöglicht es uns, zelluläre Prozesse mit einer Superauflösung und unter physiologischen Bedingungen über einen längeren Zeitraum zu untersuchen, ohne auf die spezielle oder vorübergehende Auflösung zu verzichten. Beginnen Sie, indem Sie eine 12 bis 14 Kilodalton Molekulargewichts-Cutoff-Dialysemembran in kleine Stücke schneiden und die Stücke mit 100 Mikrolitern lebendzelligem Zellmedium für etwa fünf Minuten einweichen.

Während die Membranen einweichen, schneiden Sie den äußeren Ring eines 50-Milliliter-Rohrs in kleine Stücke und sterilisieren Sie die Stücke in 70% Ethanol. Für die Hodendissektion und -montage zehn zwei bis drei Tage alte anästhesierte männliche Fliegen unter einem Seziermikroskop in eine Sezierschale geben und mit einer feinen Zette die Hoden entfernen. Wenn alle Hoden gesammelt wurden, waschen Sie die Hoden zweimal in Lebendzellmedium und verteilen Sie mit einer Pipettenspitze 100 bis 150 Mikroliter Lebendzellmedium auf der vorbereiteten Glasbodenschale.