Name: Massive Pontinenblutung durch Doppelinjektion von Eigenblut (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: Lernen Sie ein reproduzierbares Rattenmodell für massive Pontinenblutung durch stereotaktische Doppelinjektion von Eigenblut. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung neurologischer Defizite und pathophysiologischer Veränderungen.

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Diese Studie wurde finanziell unterstützt von der National Science Foundation of China (81471181 und 81870933) und dem Opening Lab Program der Guangzhou Medical University (0506308) nach Y Jiang sowie von der National Science Foundation of China (81701471) und dem Scientific Program der Guangzhou Municipal Health Commission (20191A011083) nach Z Qiu und von der National Science Foundation of China (81501009) nach L Wu.

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</ol>

Keine Interessenkonflikte.

In der vorliegenden Studie haben wir ein Protokoll zur Verfügung gestellt, um ein massives pontines Blutungsrattenmodell zu generieren. Dieses Modell kann für die Erforschung des pathophysiologischen Mechanismus und der Prognose massiver pontiner Blutungen verwendet werden.
Während des gesamten Experiments wurden 25 Ratten verwendet, von denen nur eine starb. Die Überprüfung der MRT, der groben Anatomie und der HE-Färbung zeigte, dass diese Methode eine sehr niedrige Sterblichkeitsrate und ein...

Intrazerebrale Blutungen machen ein Fünftel der Schlaganfallpatienten aus. Die Prognose der intrazerebralen Blutung hängt von der Geschwindigkeit, dem Volumen und dem Ort der Blutung ab1,2. Im Vergleich zur Vorderhirnblutung weist die Hirnstammblutung eine höhere Mortalität und Morbiditätauf 3. Etwa 40% der Hirnstammblutungen treten in den Pons4auf. Die Ätiologie und Pathophysiologie der pontinen Blutung sind ganz anders und weniger untersucht als die Vorderhirnblutung5.
Es gibt zwei Arten von pontinischen Blutungstiermodellen. Eines ist das spontane Blutungsmodell, das durch Infusion von bakterieller Kollagenase in den Pons6,7,8induziert wird. Der größte Vorteil dieses Modells ist, dass die Blutung spontan ist. Kollagenase kann jedoch nur ein kleines Volumen an pontinischen Blutungen induzieren. Außerdem kann Kollagenase andere Verletzungen des Gehirns verursachen. Das andere Modell wird durch stereotaktische Injektion von Eigenblut in die Pons9induziert. Der Vorteil dieses Modells ist, dass es mit einer hohen Erfolgsquote einfach zu meistern ist. Theoretisch könnten Forscher jedes Blutvolumen an jede Stelle von Pons injizieren. Aufgrund der Rückleckage durch den Nadelweg ist das eingespritzte Volumen jedoch begrenzt. Vor kurzem wurde die Doppelinjektionsmethode gefördert, um die Rückleckage9zu reduzieren. Diese Methode injiziert Eigenblut zweimal mit einem 20-minutenigen Intervall zwischen den Injektionen. Die Doppelinjektionsmethode wird angewendet, um leichte (30 μL) und moderate (60 μL) Pontinblutungen, aber keine massiven Pontinblutungen zu induzieren. In der Klinik hat die Mehrheit der Pontinblutungspatienten mit schlechter Prognose massive Blutungen (mehr als 10 ml).
In der vorherigen Studie haben wir ein Protokoll zur Verfügung gestellt, um ein pontinisches ischämisches Schlaganfallmodell bei Ratten10zu etablieren. In dieser Studie modifizieren wir die bestehende Dual-Injektionsmethode und stellen ein detailliertes Protokoll zur Verfügung, um massive Pontinblutungen bei einer Ratte durch doppelte Injektion von 100 μL Eigenblut an zwei verschiedenen Stellen in den Pons zu induzieren.

<table><tbody><tr><td>100 ml Kochsalzlösung</td><td>Guangdong yixiang</td><td>191222201 C1</td><td>Herstellung von Heparinverdünnungsmittel</td></tr><tr><td>100 μm l Mikroinjektor</td><td>Shanghai Gaoge</td><td></td><td>Injektion von autologem Blut</td></tr><tr><td>1ml Spritze</td><td>Jiangsu Zhiyu</td><td>20191014</td><td>Entnahme von autologem Blut aus der Schwanzvene</td></tr><tr><td>75% Alkohol</td><td>Shandong Lierkang</td><td></td><td>Desinfektion von Rattenschwanz</td></tr><tr><td>Klebeband</td><td>Shanghai Jinzhong Surgicl</td><td></td><td>Instrumente</td></tr><tr><td>Tieranästhesiesystem</td><td>RWD</td><td>R510-31S-6</td><td>Induktion und Aufrechterhaltung der Anästhesie</td></tr><tr><td>Schwebebalken</td><td>Jiangsu Saiangsi</td><td></td><td>Für neurologische Defizitwerte</td></tr><tr><td>Klingen</td><td>Shanghai Feiying</td><td>74-C</td><td>Für die Grobanatomie</td></tr><tr><td>Knochenzement</td><td>Shanghai Xinshiji</td><td>20180306</td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Gehirntank</td><td>Shenzhen LEIYEA</td><td></td><td>Für die Grobanatomie</td></tr><tr><td>Butorphanoltartrat</td><td>Jiangsu Hengrui</td><td></td><td>Zur Schmerzbehandlung</td></tr><tr><td>Elektrischer Schädelbohrer</td><td>Nanjing&nbsp; Darwin Biotechnologie</td><td>20180090018</td><td>Ein Bohrloch in den Schädel bohren</td></tr><tr><td>EP-Röhre</td><td>Nantong Surui</td><td></td><td>Transfer autologes</td></tr><tr><td>Blut Erythromycin Augencreme</td><td>Yunnan Apotheke</td><td></td><td>Augenschutz</td></tr><tr><td>HE-Farbstoff Liquor</td><td>Solarbio</td><td>G1120</td><td>Für HE-Färbung</td></tr><tr><td>Erhitzen&nbsp; </td><td>Pad Dangerous Jungle</td><td>JR01</td><td>Warmhalten</td></tr><tr><td>Heparin-Natrium-Injektion</td><td>Chengdu Haitong Pharmacal Company</td><td>190701</td><td>Vorbereitung von Heparin-Verdünnungsmittel</td></tr><tr><td>IndoPhors</td><td>Guoyao of China</td><td></td><td>Sterilisation</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>RWD</td><td>20080701</td><td>Induktion und Aufrechterhaltung der Anästhesie</td></tr><tr><td>Light Dark</td><td>Box Jiangsu Saiangsi</td><td></td><td>Für neurologische Defizitwerte</td></tr><tr><td>Mikroinjektionspumpe</td><td>Baoding Leifu</td><td>TFD03-01-C</td><td>Injektion von autologem Blut</td></tr><tr><td>MRT-System</td><td>Philips</td><td></td><td>Bestätigung des Infarkts in vivo</td></tr><tr><td>Nadelhalter</td><td>Shanghai Jinzhong</td><td>J32020</td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Penicilin</td><td>Guoyao aus China</td><td></td><td>Infektionsprävention</td></tr><tr><td>Q-Tips</td><td>Jiangxi Songhe</td><td></td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Kopfhaut Heedle</td><td>Jiangxi Hongda</td><td>20200313</td><td>Entnahme von autologem Blut aus der Schwanzvene</td></tr><tr><td>Skalpell</td><td>Shanghai Kaiyuan</td><td>170902</td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Scherschere Schere</td><td>Shanghai Jinzhong</td><td>Y00040</td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Stereotaktische Apparatur</td><td>RWD</td><td>900-00001-00</td><td>für chirurgische Eingriffe Positionierung</td></tr><tr><td>Chirurgisches Handtuch</td><td>Xinxiang Huakangweicai</td><td>20070601</td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Nahtnadel</td><td>Shanghai Jinzhong</td><td></td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Nahtschere</td><td>Shanghai Jinzhong J25041</td><td></td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr><tr><td>Halterung von Gewebe</td><td>Shanghai Jinzhong</td><td>J31080</td><td>Chirurgische Instrumente</td></tr></tbody></table>

massive pontinenblutung durch doppelinjektion von eigenblut

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Wir bieten ein Protokoll, um ein massives pontines Blutungsmodell bei einer Ratte zu etablieren. Ratten mit einem Gewicht von etwa 250 Gramm wurden in dieser Studie verwendet. Einhundert Mikroliter Eigenblut wurden aus der Schwanzvene entnommen und stereotrisch in die Pons injiziert. Der Injektionsprozess wurde in 2 Schritte unterteilt: Zuerst wurden 10 μL Blut an eine bestimmte Stelle injiziert, anteroposteriore Position (AP) -9,0 mm; seitlich (Lat) 0 mm; vertikal (Vert) -9,2 mm, gefolgt von einer zweiten Injektion des Restblutes bei AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm im 20-Minuten-Takt. Der Balance-Beam-Test, der Gliedmaßen-Einstufungstest und der modifizierte Voestch-Neuroscore wurden zur Beurteilung der neurologischen Funktion verwendet. Die Magnetresonanztomographie (MRT) wurde verwendet, um das Blutungsvolumen in vivo zu beurteilen. Die Symptome dieses Modells entsprachen Patienten mit massiven pontinischen Blutungen.

Insgesamt wurden 25 Tiere verwendet, 3 für die Kontrolle, 6 für 30 μL, 6 für 60 μL und 10 für 100 μL Blutinjektionen. Eine Ratte, die eine 100 μL Injektion von Eigenblut (1/10) erhielt, starb innerhalb von 24 Stunden nach der Operation.
Verhaltenstests wurden an Tag 1, Tag 3, Tag 7 und Tag 14 nach der Operation durchgeführt. Die Ergebnisse für die Kontrollgruppe und die Blutinjektionsgruppen zu verschiedenen Zeitpunkten nach der...

Wir präsentieren ein Protokoll zur Etablierung eines massiven pontinen Blutungsmodells bei einer Ratte durch doppelte Injektion von Eigenblut.

Massive Pontinenblutung durch Doppelinjektion von Eigenblut

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Wir stellen ein Protokoll zur Verfügung, um massive pontine Blutungen bei einer Ratte festzustellen. Dieses Modell ist einfach zu etablieren, wiederholbar und sehr erfolgreich. Die destillierte Injektion der autologen Rattenmethode könnte verwendet werden, um Blutungen in jeder der Gehirnregionen zu machen.Menschen, die diese Techniken ausprobieren möchten, sollten lernen, wie man einen stereotaxischen Rahmen verwendet, und mit der pontinen Anatomie vertraut sein. Beginnen Sie, indem Sie einen chirurgischen Vorhang über die Maus legen. Machen Sie einen Schnitt mit einem Skalpell entlang der markierten Mittellinie.Verwenden Sie einen Wattestäbchen, um potenzielles Blut zu entfernen. Legen Sie dann ein Stück Pinzette auf jede Seite der Kopfhautklappe, um den Schädel freizulegen. Tauchen Sie einen Wattestäbchen in 0,9% Kochsalzlösung und entfernen Sie vorsichtig das Bindegewebe vom Schädelknochen.Verwenden Sie einen Markerstift, um den zentralen Punkt der Bregma als Ursprungspunkt zu markieren. Führen Sie eine Kraniotomie mit einem Mikrobohrer durch und gehen Sie vorsichtig vor. Wenn Sie fertig sind, entfernen Sie den Mikrobohrer aus dem stereotaktischen Rahmen.Stecken Sie eine 100-Mikroliter-Hamilton-Spritze in den stereotaxischen Halter. Schalten Sie den Einspritzpumpenschalter ein. Klicken Sie auf die Schaltfläche schnelle Inhalation.Dann heparinische Lösung auf 100 Mikroliter absaugen und vollständig abtropfen lassen. Tragen Sie Chlorhexidin und 75% Alkohol chirurgisches Peeling auf die ganze Geschichte von der Wurzel bis zur Spitze mindestens dreimal auf, um die Haut zu desinfizieren, die Geilheit zu erweichen und die Schwanzvene zu erweitern, um die Erfolgsrate der Injektion zu erhöhen. Befestigen Sie eine Kopfhautakupunktur an einer Ein-Milliliter-Spritze, führen Sie dann die Kopfhautakupunktur in eine seitliche Schwanzvene drei Zentimeter von der Schwanzspitze entfernt ein und nehmen Sie 150 Mikroliter Blut.Entfernen Sie die Kopfhautakupunktur aus der Ein-Milliliter-Spritze und übertragen Sie das Blut in einen Schlauch. Schnelle Arbeit, um blutgerinnung zu verhindern. Op-Handschuhe wechseln.Wählen Sie den Auszahlungsmodus aus. Stellen Sie die Lautstärke auf 100 Mikroliter und die Geschwindigkeit auf 200 Mikroliter pro Minute ein. Klicken Sie auf die Schaltfläche "Ausführen" und saugen Sie 100 Mikroliter Blut in die Hamilton-Spritze.Wechseln Sie in den Infuse-Modus und stellen Sie die Geschwindigkeit auf einen Mikroliter pro Minute ein. Schieben Sie die Spritze vor, bis die Spitze 9,2 Millimeter unter der Oberfläche des Gehirns liegt, und injizieren Sie die ersten 10 Mikroliter Blut. Klicken Sie auf die Schaltfläche Ausführen.Stoppen Sie die Injektion und lassen Sie die Spritze 20 Minuten lang in Position, um zu verhindern, dass Blut in den Subarachnoidalraum fließt. Ziehen Sie die Spritze zurück, bis die Spitze neun Millimeter unter der Oberfläche des Gehirns ankommt, und starten Sie dann die Injektion mit der gleichen Geschwindigkeit von einem Mikroliter pro Minute, bis das Restblut vollständig injiziert wurde. Lassen Sie die Spritze 10 Minuten in Position, um einen Blutrückfluss zu vermeiden.Entfernen Sie die Spritze langsam aus dem Gehirn. Verwenden Sie dann Knochenzement, um das Kraniotomieloch zu bedecken. Wenn der Zement trocknet, nähen Sie die Wunde mit einem Vier-Null-Polyamid-Nahtfilament.Nach dem Nähen binden drei oder vier Stiche 2 Eins-Eins-Standard-CHIRURGISCHE KNOTEN. Beobachten Sie die Ratte alle 15 Minuten, bis sie sich vollständig von der Anästhesie erholt hat, und bringen Sie sie dann mit einem Heizkissen darunter in den ursprünglichen Käfig zurück. Bieten Sie der Ratte freien Zugang zu Nahrung und Wasser.Insgesamt wurden 25 Tiere zur Kontrolle von 30 Mikroliter-, 60-Mikroliter- und 100-Mikroliter-Blutinjektionen verwendet. Verhaltenstests wurden an den Tagen eins, drei, sieben und 14 nach der Operation durchgeführt. Pontinische Blutungen verursachten neurologische Defizite wie verminderten Hornhautreflex und Kreisen.Die Injektion von 100 Mikrolitern Blut induzierte auch die Myotonie. MrT-Scanning wurde 24 Stunden nach der Operation durchgeführt. In den Blutinjektionsgruppen wurde Hämorrhage als Hypointense-Rand mit einem ISO- bis leicht hyperintensen Kern im Basiler-Teil der Teiche nachgewiesen.Das Blutungsvolumen nahm mit dem Injektionsvolumen zu. Die Ratten wurden 24 Stunden und 14 Tage nach der Operation geopfert. Und zwei Millimeter dicke Abschnitte wurden gemacht.Blutungen wurden um die Injektionsstelle herum festgestellt und verteilen sich in der Basis der Teiche. Es gab ein leichtes Ödem um die Blutung in der 100-Mikroliter-Blutinjektionsgruppe. Einige der Ratten wurden drei Tage nach der Operation geopfert und Paraffinabschnitte wurden für die HE-Färbung hergestellt.Die Ergebnisse zeigten, dass in den Blutinjektionsgruppen Entzündungszellen, die in der Parablutungszone angereichert waren, das Hämoglobin mit intakten roten Blutkörperchen enthalten blieb. Wenn Sie dieses Protokoll versuchen, stellen Sie sicher, dass Sie sich die Injektionsposition merken. Diese Methode kann verwendet werden, um eine Blutung in jeder spezifischen Hirnregion zu induzieren.

massive-pontine-hemorrhage-by-dual-injection-of-autologous-blood

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Die Eigenblut Injektion Modell der intrazerebralen Blutung bei Mäusen in diesem Protokoll beschriebenen Verwendungen der doppelten Einspritzung Technik, um das Risiko von Blut Reflux bis die Nadel Spur, keine Antikoagulanzien in das Pumpsystem zu minimieren, und eliminiert alle Totraum und erweiterbar Schlauch in das System.

Eigenblut Injection zu Spontane intrazerebrale Blutungen in Mäuse-Modell

Klinisch relevante Tiermodelle Hirnblutung (ICH) sind notwendig, um unser Wissen über hämorrhagischen Schlaganfall zu erweitern und neue therapeutische Strategien zu untersuchen. In dieser Studie beschreiben wir und auswerten beiden ICH Modelle einseitige Injektionen von entweder autologe Vollblut oder bakteriellen Collagenase in den Basalganglien (Corpus striatum) von Mäusen implementieren.

Modeling Hirnblutung in Mice: Injektion von Eigenblut oder bakterielle Collagenase

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Etablierung eines Rattenmodells für Subarachnoidalblutungen. Einer anästhesierten Ratte werden Sonden implantiert, um den Hirndruck und den zerebralen Blutfluss zu messen. Die Zielstelle wird identifiziert und die Nadel in einer prä-chiasmatischen Position eingeführt. Anschließend wird autologe Blut in den Subarachnoidalraum injiziert, wodurch der Hirndruck erhöht und der zerebrale Blutfluss verringert wird, wodurch das Modell etabliert wird.

Etablierung eines Modells für Subarachnoidalblutungen an der Ratte, das durch autologe Blutinjektion induziert wird

Quelle: Tang, X. et. al., Massive pontine Blutung durch doppelte Injektion von autologem Blut. J. Vis. Exp. (2021)Dieses Protokoll beschreibt die kontrollierte Infusion von autologem Blut in die pontine Region des Gehirns einer Ratte, um eine massive pontine Blutung zu modellieren. Der Zweck besteht darin, eine lokalisierte Gehirnblutung zu simulieren, indem der lokale Druck erhöht wird.

Induktion einer massiven pontinen Blutung in einem Rattenmodell durch autologe Blutinjektion

Präklinische Modelle von intrazerebralen Blutungen werden verwendet, um bestimmte Aspekte der klinischen Erkrankung nachzuahmen. Auf diese Weise können Mechanismen der Verletzung und mögliche therapeutische Strategien erforscht werden. In diesem Protokoll werden zwei Modelle der intrazerebralen Blutung beschrieben, intrastriatale (Basalganglien) Injektionen von autologem Blut oder Kollagenase.

Intrastriataler Injektion von Eigenblut oder Clostridien-Kollagenase als Murine Modelle der Hirnblutung

Das experimentelle Modell der intrakraniellen druckkontrollierten Blutshunt-Subarachnoidalblutung (SAB) beim Kaninchen kombiniert die Standardverfahren — Kanülierung der Arteria subclavia und transkutane Cisterna-magna-Punktion, was eine genaue Nachahmung der menschlichen pathophysiologischen Zustände nach SAB ermöglicht. Wir präsentieren Schritt-für-Schritt-Anleitungen und besprechen die wichtigsten chirurgischen Punkte für eine erfolgreiche experimentelle SAH-Erstellung.

Das Kaninchen Blut-Shunt-Modell für die Untersuchung von akuten und Spätfolgen Subarachnoidalblutung: Technische Aspekte

Wir beschrieben in diesem Protokoll ein standardisiertes subarachnoides Blutungsmodell (SAH) durch eine doppelte Injektion von autologem Vollblut in die Zisternenmagna. Der hohe Standardisierungsgrad des Doppelinjektionsverfahrens stellt ein mittleres bis akutes Modell der SAH mit relativer Sterblichkeitssicherheit dar.

Doppelte Direkteinspritzung von Blut in die Cisterna Magna als Modell der subarachnoiden Blutung

Die Subarachnoidalblutung birgt nach wie vor eine hohe Belastung durch Mortalität und Morbidität beim Menschen. Um die weitere Erforschung der Erkrankung und ihrer Pathophysiologie zu erleichtern, wird ein prächiasmatisches Einzelinjektionsmodell vorgestellt.

Prächiasmatische, einmalige Injektion von Eigenblut zur Induktion einer experimentellen Subarachnoidalblutung in einem Rattenmodell

Wir präsentieren ein Modell der neonatalen intraventrikulären Blutung mit Rattenwelpen, das die Pathologie beim Menschen nachahmt.

Modellierung neonataler intraventrikulärer Blutungen durch intraventrikuläre Injektion von Hämoglobin

Aktivität in neuronalen Systemen erfordert oft synchrone Aktionspotential Entladungen von Neuronen innerhalb einer bestimmten Population. Zum Beispiel, Impulse von Gonadotropin-Releasing-Hormon (GnRH) wahrscheinlich erfordern deshalb eine koordinierte Aktivität zwischen GnRH-Neurone. Wir präsentieren unsere methodische Ansatz für die zuverlässige Beschaffung gleichzeitige elektrophysiologischen Ableitungen aus dem diffus verteilt GnRH Neuronen.

Dual-Somatische Recordings von Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neuronen von Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamus Slices Identified

Lernen Sie ein reproduzierbares Rattenmodell für massive Pontinenblutung durch stereotaktische Doppelinjektion von Eigenblut. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung neurologischer Defizite und pathophysiologischer Veränderungen.

Massive Pontinenblutung durch Doppelinjektion von Eigenblut

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