Bewertung der Reparaturaktivität von DNA-Doppelstrangbrüchen mit Hilfe von Hochdurchsatz- und quantitativen Lumineszenz-basierten Reporter-Assays

Artios entwickelt neuartige Medikamente gegen Krebs, die auf die Reaktion auf DNA-Schäden abzielen. Um dies zu ermöglichen, haben wir eine Reihe neuartiger Assays entwickelt, um die zelluläre DNA-Reparaturaktivität zu messen. Diese Assays hatten einen großen Einfluss auf unsere Programme und führten dazu, dass Wirkstoffe in der klinischen Phase an Patienten mit hohem ungedecktem medizinischem Bedarf getestet wurden.

Die genaue Messung der zellulären Aktivität am Ziel ist für die Entwicklung neuartiger zielgerichteter Therapeutika unerlässlich. Die Generierung von Assays für DNA-Reparaturfaktoren mit den erforderlichen Eigenschaften für eine effiziente Wirkstoffforschungskampagne war eine Herausforderung, unabhängig davon, ob ein hoher Durchsatz, ein robustes Signal-Rausch-Verhältnis, eine schnelle Abwicklung und idealerweise eine Portabilität auf verschiedene biologische Systeme erforderlich sind. Wir haben eine Reihe robuster, quantitativer und titrierbarer lumineszenzbasierter Reporter-Assays entwickelt, um die Leistungsfähigkeit von vier wichtigen Doppelstrangbruch-Reparaturwegen zu messen: homologe Rekombination, nicht-homologe Endverbindung, mikrohomologievermittelte Endverknüpfung und Einzelstrang-Annealing.

Diese Reporter-Assays sind als Auslesen der signalwegabhängigen Reparatur validiert, reagieren empfindlich auf pharmakologische Modulation und haben eine schnelle Durchlaufzeit. Die von uns entwickelten Reparatursubstrate sind extrachromosomal, so dass sie transient in interessante Modelle transfiziert und leicht in ein Hochdurchsatzformat skaliert werden können. Wir glauben, dass unsere Assay-Systeme eine wichtige Rolle bei der Ermöglichung der DDR-Wirkstoffforschung, aber auch bei der Erweiterung unseres Verständnisses der DDR-Biologie spielen.

In dieser Hinsicht hoffen wir, dass die Methoden dazu beitragen, die Identifizierung und Verfolgung neuer Wirkstoffziele zu beschleunigen und Medikamente für Krankheiten wie Krebs zu entwickeln, bei denen ein hoher ungedeckter medizinischer Bedarf besteht.