Name: Polarisation und Charakterisierung von M1- und M2-humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen auf Implantatoberflächen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-06T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Erfahren Sie die Polarisation von M1- und M2-Makrophagen auf Titan-Implantatoberflächen mittels qRT-PCR, ELISA und CLSM. Diese Methode ermöglicht die Charakterisierung immunmodulatorischer Biomaterialien.

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<meta charset="utf8"></head><body>Bewertung immunmodulatorischer Effekte von Implantatoberflächen auf Makrophagen

<ol><li>Othman, Z., Pastor, B. C., van Rijt, S., Habibovic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+interactions+between+biomaterials+and+biological+systems+using+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Understanding interactions between biomaterials and biological systems using proteomics.</a> Biomaterials. 167, 191-204 (2018).</li>
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<li>Aamodt, J. M., Grainger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-based+biomaterial+scaffolds+and+the+host+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-based biomaterial scaffolds and the host response.</a> Biomaterials. 86, 68-82 (2016).</li>
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<li>Mantovani, A., Biswas, S. K., Galdiero, M. R., Sica, A., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+plasticity+and+polarization+in+tissue+repair+and+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Macrophage plasticity and polarization in tissue repair and remodelling.</a> J Pathol. 229 (2), 176-185 (2013).</li>
<li>Shrivastava, R., Shukla, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attributes+of+alternatively+activated+%28M2%29+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Attributes of alternatively activated (M2) macrophages.</a> Life Sci. 224, 222-231 (2019).</li>
<li>Gordon, S., Taylor, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+and+macrophage+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Monocyte and macrophage heterogeneity.</a> Nat Rev Immunol. 5 (12), 953-964 (2005).</li>
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<li>Murray, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+and+polarization%3A+nomenclature+and+experimental+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation and polarization: nomenclature and experimental guidelines.</a> Immunity. 41 (1), 14-20 (2014).</li>
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<li>Browne, S., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial-mediated+modification+of+the+local+inflammatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biomaterial-mediated modification of the local inflammatory environment.</a> Front Bioeng Biotechnol. 3, 67(2015).</li>
<li>Piatnitskaia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+of+macrophage+responses+to+biomaterials+in+vitro%3A+state-of-the-art+and+the+need+for+the+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Modelling of macrophage responses to biomaterials in vitro: state-of-the-art and the need for the improvement.</a> Front Immunol. 15, 1349461(2024).</li>
<li>Rayahin, J. E., Gemeinhart, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+macrophages+in+response+to+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Results+Probl+Cell+Differ%22%5BJournal%5D)">Activation of macrophages in response to biomaterials.</a> Results Probl Cell Differ. 62, 317-351 (2017).</li>
<li>Murray, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Gordon, S., Pluddemann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+macrophages%3A+heterogeneity+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue macrophages: heterogeneity and functions.</a> BMC Biol. 15 (1), 53(2017).</li>
<li>Salma Iqbal, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+in+vitro+generated+human+polarized+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of in vitro generated human polarized macrophages.</a> J Clin Cell Immunol. 6, 1-8 (2015).</li>
<li>Hotchkiss, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+surface+characteristics%2C+including+topography+and+wettability%2C+alter+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Titanium surface characteristics, including topography and wettability, alter macrophage activation.</a> Acta Biomater. 31, 425-434 (2016).</li>
<li>Wang, Y., Zhang, Y., Sculean, A., Bosshardt, D. D., Miron, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+behavior+and+interplay+with+gingival+fibroblasts+cultured+on+six+commercially+available+titanium%2C+zirconium%2C+and+titanium-zirconium+dental+implants%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Investig%22%5BJournal%5D)">Macrophage behavior and interplay with gingival fibroblasts cultured on six commercially available titanium, zirconium, and titanium-zirconium dental implants.</a> Clin Oral Investig. 23 (8), 3219-3227 (2019).</li>
<li>Abaricia, J. O., Shah, A. H., Ruzga, M. N., Olivares-Navarrete, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+characteristics+on+commercial+dental+implants+differentially+activate+macrophages+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Implants+Res%22%5BJournal%5D)">Surface characteristics on commercial dental implants differentially activate macrophages in vitro and in vivo.</a> Clin Oral Implants Res. 32 (4), 487-497 (2021).</li>
<li>Lu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+osseointegration+of+strontium-modified+titanium+implants+by+regulating+angiogenesis+and+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Improved osseointegration of strontium-modified titanium implants by regulating angiogenesis and macrophage polarization.</a> Biomater Sci. 10 (9), 2198-2214 (2022).</li>
<li>Murray, P. J., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obstacles+and+opportunities+for+understanding+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Obstacles and opportunities for understanding macrophage polarization.</a> J Leukoc Biol. 89 (4), 557-563 (2011).</li>
<li>Nascimento, C. R., Fernandes, N. A. R., Maldonado, L. A. G., Junior, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+monocytic+cell+lines+U937+and+THP-1+as+macrophage+models+for+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of monocytic cell lines U937 and THP-1 as macrophage models for in vitro studies.</a> Biochem Biophys Rep. 32, 101383(2022).</li>
<li>Freytes, D. O., Kang, J. W., Marcos-Campos, I., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+modulate+the+viability+and+growth+of+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Macrophages modulate the viability and growth of human mesenchymal stem cells.</a> J Cell Biochem. 114 (1), 220-229 (2013).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+type+modulates+osteogenic+differentiation+of+adipose+tissue+MSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Macrophage type modulates osteogenic differentiation of adipose tissue MSCs.</a> Cell Tissue Res. 369 (2), 273-286 (2017).</li>
<li>Cerqueira, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+inflammatory+responses+to+sol-gel+coatings+with+distinct+biocompatibility+levels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the inflammatory responses to sol-gel coatings with distinct biocompatibility levels.</a> J Biomed Mater Res A. 109 (9), 1539-1548 (2021).</li>
<li>Zhang, Y., Cheng, X., Jansen, J. A., Yang, F., van den Beucken, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+surfaces+characteristics+modulate+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Sci+Eng+C+Mater+Biol+Appl%22%5BJournal%5D)">Titanium surfaces characteristics modulate macrophage polarization.</a> Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 95, 143-151 (2019).</li>
<li>Nobs, S. P., Kopf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophages%3A+guardians+of+organ+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophages: guardians of organ homeostasis.</a> Trends Immunol. 42 (6), 495-507 (2021).</li>
<li>Sreejit, G., Fleetwood, A., Murphy, A., Nagareddy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+diversity+of+macrophages+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Immunology%22%5BJournal%5D)">Origins and diversity of macrophages in health and disease.</a> Clin Transl Immunology. 9 (12), e1222(2020).</li>
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<li>Feuerer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+retrieval+from+3D+biomaterials%3A+A+detailed+comparison+of+common+dissociation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Macrophage retrieval from 3D biomaterials: A detailed comparison of common dissociation methods.</a> J Immunol Regen Med. 11, 100035(2021).</li>
<li>Shapouri-Moghaddam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+plasticity%2C+polarization%2C+and+function+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage plasticity, polarization, and function in health and disease.</a> J Cell Physiol. 233 (9), 6425-6440 (2018).</li>
<li>Sridharan, R., Cameron, A. R., Kelly, D. J., Kearney, C. J., O'Brien, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial+based+modulation+of+macrophage+polarization%3A+a+review+and+suggested+design+principles%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Today%22%5BJournal%5D)">Biomaterial based modulation of macrophage polarization: a review and suggested design principles.</a> Mater Today. 18 (6), 313-325 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24-Well-Platte, unbehandelt</td><td>Corning Incorporated (Kennebunk, USA)</td><td>144530</td><td></td></tr><tr><td>Absorptionsleser Infinite F50&nbsp;</td><td>TECAN Austria GmbH (Gr&ouml; dig, Österreich)</td><td>TCAT91000001</td><td></td></tr><tr><td>Accutase in DPBS, 0,5 mM EDTA</td><td>EMD Millipore Corp. (Burlington, USA)</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fade Fluoreszenz Eindeckmedium - wässrig, Fluoroshield</td><td>abcam (Cambridge, UK)</td><td>ab104135</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad MJ Research PTC-200 Peltier Thermocycler</td><td>Bio-Rad / MJ Research</td><td>7212</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)</td><td>VWR International bvba (Leuven, Belgien)</td><td>422361V</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge 5804 R</td><td>Eppendorf SE (Hamburg, Deutschland)</td><td>5804 R</td><td></td></tr><tr><td>DC-SIGN (D7F5C) XP Rabbit mAb</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>13193</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Sigma Aldrich Co. (St.Louis, MO, USA)</td><td>D2438-5X10ML</td><td></td></tr><tr><td>DRAQ5 Färbelösung</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Deutschland)</td><td>130-117-344</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol &ge; 99,8% für Molekularbiologie</td><td>Carl Roth GmbH + CO. KG (Karlsruhe, Deutschland)</td><td>1HPH.1</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus IgG (H& L) Hochgradig kreuzadsorbierter Sekundärantikörper , Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>A32723TR</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Kaninchen-IgG (H+L) kreuzadsorbierter Sekundärantikörper, Cyanin3</td><td>Invitrogen</td><td>A10520</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>Version&nbsp; 9.4.1</td><td></td></tr><tr><td>Humaner CCR7 Antikörper</td><td>R& D Systems</td><td>MAB197</td><td></td></tr><tr><td>Humanes IFN-gamma Rekombinantes</td><td>Invitrogen (Rockford, USA)</td><td>RIFNG100</td><td></td></tr><tr><td>Humanes IL-13</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Deutschland)</td><td>5230901032</td><td></td></tr><tr><td>Humanes IL-4</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Deutschland)</td><td>130-095-373</td><td></td></tr><tr><td>Humanes M-CSF</td><td>Peprotech (Cranbury, USA)</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>Leica TCS SP5</td><td>Leica Microsystems CMS GmbH (Mannheim, Deutschland)</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/p/leica-tcs-sp5/</td><td></td></tr> <tr><td>Lipopolysaccharide von Escherichia</td><td>Sigma Aldrich Co. (Missouri, USA)</td><td>L4391-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Luna Universal qPCR Master Mix&nbsp;</td><td>New England Biolabs</td><td>NEB #M3003</td><td></td></tr><tr><td>LunaScript RT SuperMix Kit</td><td>New England Biolabs</td><td>E3010L</td><td></td></tr><tr><td>Lymphozytentrennmedium 1077</td><td>PromoCell (Heidelberg, Deutschland)</td><td>C-44010</td><td></td></tr><tr><td>MCP-4/CCL13 Human ELISA Kit</td><td>Invitrogen</td><td>EHCCL13</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Schnelle 96-Well-Reaktionsplatte (0,1 mL)</td><td>Applied Biosystems (Waltham, USA)</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td><td>Life Technologies Corporation (Carlsbad, USA)</td><td>4311971</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Splash Free 96-Well Base</td><td>Applied Biosystems (Waltham, USA)</td><td>4312063</td><td></td></tr><tr><td>Mikroliterzentrifuge CD-3124R</td><td>Phoenix Instrument (Deutschland)</td><td>9013111121</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop-Deckgläser, 10 mm</td><td>Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Deutschland</td><td>4HX4.1</td><td></td></tr><tr><td>Monozyten-Anheftmedium</td><td>PromoCell (Heidelberg, Deutschland)</td><td>C-28051</td><td></td></tr><tr><td>Multiply-Pro Gef&auml; &szlig; 0,5 mL, PP</td><td>Sarstedt AG & CO (N&uuml; mbrecht, Deutschland)</td><td>7,27,35,100</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop One</td><td>Thermo Scientific (USA)</td><td>ND-ONE-W</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio&nbsp; 3 System</td><td>Life Technologies GmbH (St. Leon-Rot, Deutschland)</td><td>A28567</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Micro Kit</td><td>Qiagen</td><td>74007</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640, 1x, mit L-Glutamin</td><td>Mediatech, Inc. (Manassas, USA)</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Sterilbank, LaminarAir HB 2472&nbsp;</td><td>Heraeus instruments (Hanau, Deutschland)</td><td>51012197</td><td></td></tr><tr><td>Gewebekultur-Deckgläser 13 mm (Kunststoff)</td><td>Sarstedt Inc. (Newton, USA)</td><td>83,18,40,002</td><td></td></tr><tr><td>Bearbeitete Titanscheiben 12 cm&nbsp;</td><td>Medentis Medical (Bad-Neuenahr-Ahrweiler, Deutschland)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>TNF alpha Human ELISA Kit</td><td>Invitrogen</td><td>KHC3011</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblau Lösung 0,4%</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG (Karlsruhe, Deutschland)</td><td>1680.1</td><td></td></tr></tbody></table>

polarisation und charakterisierung von m1- und m2-humanen monozyten-abgeleiteten makrophagen auf implantatoberflächen 

Polarization and Characterization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Macrophages on Implant Surfaces

Die Ergebnisse dieser Studie zeigen die erfolgreiche Differenzierung und Polarisation von MDMs auf Titanoberflächen, gefolgt von der Charakterisierung von M1- oder M2-polarisierten Makrophagen. Im ersten Schritt haben wir polarisierte MDMs mittels CLSM charakterisiert. Basierend auf unseren Vorstudien wurden CD209 und CCR7 als spezifische Marker zur Unterscheidung von M1 von M2 polarisierten MDMs verwendet. Wie in Abbildung 2A,B gezeigt, polarisierten MDMs erfolgreich in M1- und M2-Makrophagen. Auf der Titanoberfläche wurde CCR7 in M1-polarisierten Makrophagen stärker exprimiert als CD209, spezifisch in M2-polarisierten Makrophagen. Darüber hinaus erleichterte die Quantifizierung der relativen Fluoreszenzintensität die Zuordnung von Markern zu M1- oder M2-Subtypen (Abbildung 2C).
Abbildung 3 zeigt eine repräsentative qRT-PCR-Analyse von MDMs auf Titan- und Deckglasoberflächen. Die Ergebnisse zeigten, dass MDMs auf beiden Oberflächen erfolgreich polarisiert wurden, was durch die hohe Expression der Polarisationsmarker M1 (CCR7 und TNF-ɑ) und M2 (CD209 und CCL13) gezeigt wurde. Dies wurde auf Proteinebene weiter bestätigt, indem hohe Konzentrationen von inflammatorischen TNF-α-Zytokinen (Abbildung 4A) und IL-13-Chemokinen (Abbildung 4B) in M1- bzw. M2-polarisierten Zellen beobachtet wurden.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig01.jpg"> Abbildung 1: Schematische Darstellung des Protokolls. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig02v2.jpg"> Abbildung 2: Charakterisierung polarisierter MDMs mittels CLSM. Die Anreicherung von M1- und M2-polarisierten Makrophagen wurde durch spezifische Antikörperfärbung und CLSM-Analyse mit CCR7- und CD209-Antikörpern am Tag 2 der Nachsaat bestätigt. Laut Fluoreszenzfärbung und CLSM-Analyse (A) 25-fache Vergrößerung und (B) 63-fache Vergrößerung exprimierten M1-Zellen einen höheren CCR7-Wert (in grün) als M0 oder M2. M2-Zellen weisen ein signifikantes CD209-Expressionsmuster auf (in grün). (C) Die quantitative Analyse der relativen Fluoreszenzintensität von CCR7 und CD209. Die Zellkerne wurden mit DRAQ5 (in violett) angefärbt. Die Ergebnisse sind repräsentativ für 5 ähnliche Experimente, die unabhängig voneinander durchgeführt wurden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig03.jpg"> Abbildung 3: Charakterisierung polarisierter MDMs anhand von Genexpressionsprofilen. Die quantitative reverse Transkriptionspolymerase wurde verwendet, um die mRNA-Spiegel verschiedener Gene zu untersuchen, die mit der Polarisation von M1 (CCR7 und TNF-ɑ) und M2 (CD209 und CCL13) assoziiert sind. GAPDH wurde als Haushalts-Gen verwendet. Die Daten werden als Mittelwert ± SEM (n = 5) dargestellt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig04.jpg"> Abbildung 4: Produktion von Zytokinen durch M0-, M1- und M2-Makrophagen, die auf Titan- und Kunststoff-Deckgläsern kultiviert wurden. (A) TNF-ɑ-Zytokinspiegel und (B) CCL13-Spiegel in den Zellkulturüberständen wurden mittels ELISA gemessen. Die Zytokinsekretion wurde auf die Gesamtproteinsekretion normalisiert, gemessen mit einem BCA-Assay. Balkendiagramme stellen den Mittelwert ± SEM dar (n = 5). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Puffer/Lösung</td>
			<td>Inhalt</td>
		</tr><tr><td>Färbender/blockierender Puffer</td>
			<td>PBS + 1 % BSA + 0,1 % Tween 20</td>
		</tr><tr><td>Puffer waschen</td>
			<td>PBS + 0,1 % Tween 20</td>
		</tr><tr><td>Fixierungs-Puffer</td>
			<td>3% Paraformaldehyd (PFA) in PBS</td>
		</tr><tr><td>Speicherpuffer</td>
			<td>1% Penicillin und Streptomycin in PBS</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 1: Liste der Puffer.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Name der Grundierung</td>
			<td>Vorwärts-Primer-Sequenzen</td>
			<td>Primer-Sequenzen umkehren</td>
		</tr><tr><td>GAPDH</td>
			<td>5'-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3'</td>
			<td>5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'</td>
		</tr><tr><td>CCR7</td>
			<td>5'- TGGTGATCGGCTTTCTGGTC-3'</td>
			<td>5'- CACCTTGATGGCCTTGTTGC-3'</td>
		</tr><tr><td>Nr. CD209</td>
			<td>5'- GGAGCAGAACTTCCTACAGC-3'</td>
			<td>5'- CAACGTTGTTGGGCTCTCCT-3'</td>
		</tr><tr><td>CCL13</td>
			<td>5'-ATCTCCTTGCAGAGGCTGAA-3'</td>
			<td>5'-ACTTCTCCTTTGGGTCAGCA-3'</td>
		</tr><tr><td>TNF-ɑ</td>
			<td>5'- GCTGCACTTTGGAGTGATCG-3'</td>
			<td>5'- TCACTCGGGGTTCGAGAAGA-3'</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 2. Sequenzen von Primern, die in der qRT-PCR verwendet werden.

Polarisation und Charakterisierung von M1- und M2-humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen auf Implantatoberflächen 

Foreign body reaction (FBR), an immune-mediated complex healing process, plays a crucial role in integrating implants into the body. Macrophages, as the ...

polarization-characterization-m1-m2-human-monocyte-derived

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Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zur Induktion der Differenzierung und Polarisation von Monozyten aus peripherem Blut in M1- oder M2-Makrophagen. Die Inkubation mit Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor, Lipopolysaccharid und Interferon-gamma ergibt proinflammatorische M1-Makrophagen, während die Inkubation mit Makrophagen-Kolonie-stimulierendem Faktor und Interleukin-4 die entzündungshemmende Produktion von M2-Makrophagen induziert.

Differenzierung und Polarisation von Monozyten-abgeleiteten Zellen in Makrophagen-ähnliche Zellen

Der Artikel beschreibt eine leicht einfach...

Untersuchung von Makrophagen-Polarisation mit Knochenmark-Makrophagen

Monozyten abgeleiteten Makrophagen sind wichtige Zellen des angeborenen Immunsystems. Hier beschreiben wir eine einfach zu...

Ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Modell zur Heterogenität des menschlichen Makrophagen Differenzierung und Polarisierung Studieren

Wir stellen ein einfaches und effizientes Protokoll für die Herstellung von menschlichen Makrophagen. Buffy Coats werden durch Doppel Dichtegradientenzentrifugation isoliert verarbeitet und Monozyten werden dann an Makrophagen in Teflon-beschichtete Zellkulturbeutel differenziert. Dies maximiert Makrophagen-Renditen und erleichtert die Zellernte für nachfolgende Experimente.

Isolierung humaner Monozyten durch Doppel-Zentrifugation und ihre Differenzierung zu Makrophagen in Teflon-beschichteten Zellkultur-Taschen

Metabolische Reprogrammierung ist ein Merkmal und eine Voraussetzung für die Polarisation von M1- und M2-Makrophagen. Dieses Manuskript beschreibt einen Assay zur Messung grundlegender Parameter der Glykolyse und der mitochondrialen Funktion in aus dem Knochenmark der Maus stammenden Makrophagen. Mit diesem Werkzeug kann untersucht werden, wie bestimmte Faktoren den Stoffwechsel und den Phänotyp des Makrophagen beeinflussen.

Metabolische Charakterisierung Polarized M1 und M2-Knochenmark-Makrophagen über die Echtzeit-Extrazelluläre Flußanalyse

Dieses Protokoll bietet eine Methode zur Untersuchung der Mycobacterium tuberculosis-Infektion bei menschlichen M1- oder M2-polarisierten Makrophagen auf der Grundlage der Differenzierung von peripheren Blutmonozyten zu Makrophagen-ähnlichen Zellen, die mit dem GFP-markierten virulenten Stamm H37Rv infiziert und mit Durchflusszytometrie mit einem 10-Farben-Panel einschließlich der Expression ausgewählter M1/M2-Marker analysiert werden.

Polarisation von M1 und M2 Human Monocyte-Derived Cells und Analyse mit Durchflusszytometrie bei Mycobacterium tuberculosis Infection

M2-ähnliche tumorassoziierte Makrophagen (TAM) sind mit Tumorprogression und schlechter Prognose bei Krebs assoziiert. Dieses Protokoll dient als detaillierte Anleitung, um THP-1-Monozyten-ähnliche Zellen innerhalb von 14 Tagen reproduzierbar in M2-ähnliche Makrophagen zu differenzieren und zu polarisieren. Dieses Modell ist die Grundlage, um die entzündungshemmende Wirkung von TAM in der Tumormikroumgebung zu untersuchen.

Makrophagendifferenzierung und Polarisation in einen M2-ähnlichen Phänotyp unter Verwendung einer humanen Monozyten-ähnlichen THP-1-Leukämie-Zelllinie

Monozyten und Makrophagen sind sehr plastische und reprogrammierbare Immunzellen, die für Gesundheit und Krankheit entscheidend sind. Sie spüren und reagieren auf ein breites Spektrum von Reizen, indem sie spezifische Differenzierungsprogramme und Phänotypen übernehmen. Wir haben ein In-vitro-Modell standardisiert, um die Polarisation und Reprogrammierung von Makrophagen zu untersuchen, was ein wertvolles Werkzeug für die Forschung darstellt.

Reprogrammierungsmodell von humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen für In-vitro-Assays

Wir haben Verbesserungen und aktualisierte Methoden für den bestehenden Monozyten-Monolayer-Assay (MMA) entwickelt, bei dem Makrophagen verwendet werden, um die klinische Relevanz von Erythrozyten-Alloantikörpern in der Transfusionsmedizin und Immunologie besser vorhersagen zu können. Dieser Assay wird als Monozyten-Makrophagen-Assay (M-MA) bezeichnet.

Vorhersage der Bedeutung von Antikörpern roter Blutkörperchen mit dem Monozyten-Makrophagen-Assay

Dendritische Zellen (DCs) sezernieren IL-1β in Reaktion auf TLR8 Anerkennung von synthetischen Purin, R848, gefolgt von NLRP3 Inflammasom Aktivierung mit Nigericin daher, IL-1β kann verwendet werden, um NLRP3 Inflammasom Aktivität zu messen. Die intrazelluläre Zytokin-Färbung, Immunoblotting und ELISA werden verwendet, um NLRP3 Inflammasom Grundieren und Aktivierung über IL-1β Ausdruck genau zu messen.

Aktivierung und Messung der NLRP3 Inflammasom Aktivität mit IL-1β in humanen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen

Erfahren Sie die Polarisation von M1- und M2-Makrophagen auf Titan-Implantatoberflächen mittels qRT-PCR, ELISA und CLSM. Diese Methode ermöglicht die Charakterisierung immunmodulatorischer Biomaterialien.

Polarisation und Charakterisierung von M1- und M2-humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen auf Implantatoberflächen

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