Name: Identifizierung und Klassifizierung von positionsspezifischen GABAA Rezeptor Subunit Missense Varianten für ihre Rolle in hippokampalen Pyramidenneuronen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Erfahren Sie, wie pathogene GABA_A-Rezeptor-Mutationen das Verhalten von CA1-Pyramidalneuronen beeinflussen. Diese multiskalige Methode liefert Einblicke in neuronale Erregbarkeit und epileptische Mechanismen.

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<table><tbody><tr><td>Brian2&nbsp;</td><td>Sorbonne Universit&eacute;, INSERM, CNRS, Institut de la Vision, Frankreich; Imperial College London, Vereinigtes Königreich</td><td>2.8.0.4</td><td>Stimberg et al., 2019 (https://pypi.org/project/Brian2/ )</td></tr><tr><td>dbNSFP-Server&nbsp; &nbsp;</td><td>Genos Bioinformatics LLC, USA</td><td>v3.0</td><td>Liu et al., 2020 (http://database.liulab.science/dbNSFP) (https://sites.google.com/site/jpopgen/dbNSFP)</td></tr><tr><td>HOFFNUNG&nbsp; &nbsp;</td><td>Zentrum für molekulare und biomolekulare Informatik CMBI, Radboud Universität, Niederlande&nbsp;</td><td>1.1.1</td><td>Venselaar et al., 2010 (https://www3.cmbi.umcn.nl/hope/)</td></tr><tr><td>Jalview&nbsp; &nbsp;</td><td>Universität Dundee, Großbritannien</td><td>JV2</td><td>Waterhouse et al., 2009 (https://www.jalview.org/)</td></tr><tr><td>Jupyter Notebook</td><td>Projekt Jupyter, USA</td><td></td><td>https://jupyter.org/install&nbsp;</td></tr><tr><td>Phyton</td><td>Python Software Foundation, USA</td><td>3.13</td><td>https://www.python.org/downloads/</td></tr><tr><td>Protter&nbsp; &nbsp;</td><td>ETH Zürich, Schweiz</td><td>Version 1.0</td><td>Omasits, et al., 2014 (https://wlab.ethz.ch/protter/start/)</td></tr><tr><td>R&nbsp;</td><td>Die R Foundation for Statistical Computing, USA</td><td>R-Version 4.3.2&nbsp;</td><td>&nbsp; https://www.r-project.org/&nbsp;</td></tr><tr><td>RStudio</td><td>Posit software, PBC, USA</td><td>RStudio 2023.12.1+402 "Ocean Storm" Version</td><td>https://posit.co/downloads/</td></tr></tbody></table>

identifizierung und klassifizierung von positionsspezifischen gabaa rezeptor subunit missense varianten für ihre rolle in hippokampalen pyramidenneuronen

Identification and Classification of Position-specific GABAA Receptor Subunit Missense Variants for Their Role In Hippocampal Pyramidal Neurons

Diese Studie verwendet einen multiskaligen Ansatz, um die pathogenen Varianten in der γ2-Untereinheit des GABA-A-Rezeptors, einer Schlüsselkomponente in der Pathophysiologie der Epilepsie, vorherzusagen und zu charakterisieren. Durch den Einsatz von Vorhersagemodellen, molekularer Modellierung, evolutionärer Konservierung, Strukturuntersuchung, Korrelationsanalyse und neuronalen Simulationen verbessert dieser Ansatz die Klassifizierung von Varianten, mit erheblicher Relevanz fü...

Identifizierung und Klassifizierung von positionsspezifischen GABAA Rezeptor Subunit Missense Varianten für ihre Rolle in hippokampalen Pyramidenneuronen

Understanding the effects of functionally unknown variants in epilepsy associated genes is crucial for elucidating disease pathophysiology and developing ...

Unsere Studie basiert auf der Idee, dass epileptogene und proximal vorhergesagte Mutationen in GABA-A-Rezeptor-Untereinheiten das CA1-Pyramidenneuronenmodell in ähnlicher Weise beeinflussen können. Wir untersuchen dies anhand eines Multi-Scale-Frameworks. Laborexperimente sind unerlässlich, um die Wahrheit zu entdecken, aber sie können die Vielfalt und Komplexität des Lebens auf allen Ebenen, von den Molekülen bis zu den Organismen, nicht vollständig erfassen. Es gibt einfach zu viele Möglichkeiten, das ist das Problem.Unser Protokoll und unsere Ergebnisse ebneten den Weg für eine computergestützte Umgebung, die verwendet werden kann, um den Einfluss von Polymorphismen, wie z. B. GABA-A-Rezeptor-Untereinheitspolymorphismen, auf die neuronale Funktion zu untersuchen.Unsere Studie wirft neue Fragen auf, inwiefern vorhergesagte pathogene Varianten und epileptogene Mutationen ähnliche Eigenschaften aufweisen und wie diese Zusammenhänge effektiv erfasst und simuliert werden können.Unser derzeitiger Fokus liegt auf der Funktion des entorhinalen Kortex-Hippocampus-Mikroschaltkreises. Wir werden In-vivo-Tiermodelle und computergestützte Mikroschaltkreismodelle verfolgen, um die Septumkontr

identification-classification-position-specific-gabaa-receptor

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Neuronen sind zunächst geprägt elektrophysiologisch. Dann das Zytoplasma aus den aufgezeichneten Neuronen wird abgesaugt und einer Transkription-PCR-Analyse umzukehren, um die Expression von mRNAs für Neurotransmitter-Synthese-Enzyme, Ionenkanäle und Rezeptoren zu erkennen.

Profiling Voltage-gated Potassium Channel-mRNA Expression in nigralen Neuronen mit Einzel-Zell RT-PCR-Techniken

Hier zeigen wir die Verwendung von Fluoreszenzfarbstoff Alexa gekoppelt α-Bungarotoxin an GABA A-Rezeptor-Oberflächenlokalisierung und Endozytose in hippocampalen Neuronen zu messen. Durch die Verwendung von Konstrukten, die mit einem kurzen extrazellulären Tag, das α-Bungarotoxin, kann die Analyse der Plasma-Membran-Protein endozytischen Handel erreicht werden, bindet.

Mit Hilfe eines α-Bungarotoxin Binding Site Tag an GABA A-Rezeptor-Membranlokalisierung und Handel Studieren

Kortikaler Netzwerke werden von einem kleinen, aber vielfältige Reihe von hemmenden Inter gesteuert. Funktionelle Untersuchung von Inter erfordert daher gezielte Aufnahme und strenge Identifizierung. Hier beschrieben wird, ist ein kombinierter Ansatz, der Ganzzellableitungen von einzelnen oder synaptisch gekoppelten Paare von Neuronen mit intrazelluläre Markierung, Post-hoc-morphologische und immunzytochemische Analyse.

Whole-Cell-Patch-Clamp-Aufnahmen aus Morphologically- und neurochemisch identifizierten Hippocampus Inter

Die molekularen Mechanismen, die während der Ontogenese koordinieren die Bildung von inhibitorischen GABAergen Synapsen sind weitgehend unbekannt. Um diese Prozesse zu untersuchen, haben wir eine Co-Kultur-Modellsystem, das embryonale mittelgroßen Projektions GABAergen Neuronen zusammen mit stabil transfizierten humanen embryonalen Nieren-293 (HEK293-Zellen) exprimieren funktionellen GABA-A-Rezeptoren enthält, kultiviert entwickelt.

Hemmende Synapse Formation in einer Co-Kultur Modell mit GABAergen mittelgroßen Projektionsneuronen und HEK293-Zellen, die GABA A Receptors

Elektrokrampftherapie Beschlagnahme (ECS) ist ein experimentellen Tiermodell der Elektrokrampftherapie für schwere Depressionen. ECS stimuliert weltweit Aktivität im Hippocampus, führt zu Synaptogenese und synaptische Plastizität. Hier beschreiben wir Methoden für ECS Induktion bei Ratten und subzellulären Fraktionierung von ihren Hippocampi, Beschlagnahme verursachten Veränderungen in synaptischen Proteine zu untersuchen.

Elektrokrampftherapie Anfälle bei Ratten und Fraktionierung von ihren Hippocampi Beschlagnahme verursachten Veränderungen in den Proteinen der postsynaptischen Dichte prüfen

Wir beschreiben die Blätterteig-Technik, durch die pharmakologische Reagenzien können während der gesamten Zelle Patch-Clamp-Aufnahme verabreicht werden, und verschiedene Aspekte der Funktionen, die für den Erfolg entscheidend sind.

Whole-Cell Ströme induziert durch Blätterteig Anwendung von GABA im Gehirnscheiben

Gezielte Sequenzierung der nächsten Generation ist eine Zeit- und kosteneffiziente Ansatz, der in der Erforschung von Krankheiten und der klinischen Diagnostik immer beliebter wird. Das hier beschriebene Protokoll stellt die komplexen Workflow für die Sequenzierung erforderlich und der Bioinformatik-Prozess verwendet, um Genvarianten identifizieren, die zur Krankheit beitragen.

Gezielte Sequenzierung der nächsten Generation und Bioinformatik-Pipeline, um genetische Determinanten der konstitutionelle Krankheit zu bewerten

Dieses Protokoll beschreibt die kritische Schritte und Vorsichtsmaßnahmen erforderlich, einzelne Zelle multiplex reversen Transkription Polymerase-Kettenreaktion nach Patch-Clamp durchzuführen. Diese Technik ist eine einfache und effektive Methode um das Expressionsprofil eines vorgegebenen Satzes Gene aus einer einzigen Zelle zeichnet sich durch Patch-Clamp-Aufnahmen zu analysieren.

Einzelne Zelle Multiplex reversen Transkription Polymerase-Kettenreaktion nach Patch-clamp

Hier präsentieren wir Ihnen Protokolle, um Verbindungen zu GABA-A -Rezeptoren von der Bindung an die Physiologie und Pharmakologie aktiv zu entdecken.

Methoden für die Entdeckung der neuartige Substanzen modulieren einen Gamma - Aminobuttersäure-Rezeptor geben eine Neurotransmission

Neuronale Erregbarkeit kann durch einen dynamischen Prozess der Endo- und Exozytose von exzitatorischen Ionotropic Glutamat-Rezeptoren moduliert werden. Hier beschriebenen ist ein leicht zugängliche, High-Content Assay zur Quantifizierung der Oberfläche und interne Rezeptor Bevölkerung Pools.

Ein High-Content-Assay für die Überwachung der AMPA Rezeptor Menschenhandel

Erfahren Sie, wie pathogene GABA_A-Rezeptor-Mutationen das Verhalten von CA1-Pyramidalneuronen beeinflussen. Diese multiskalige Methode liefert Einblicke in neuronale Erregbarkeit und epileptische Mechanismen.

Identifizierung und Klassifizierung von positionsspezifischen GABAA Rezeptor Subunit Missense Varianten für ihre Rolle in hippokampalen Pyramidenneuronen (Video) | JoVE Journal

Identifizierung und Klassifizierung von positionsspezifischen GABA_A Rezeptor Subunit Missense Varianten für ihre Rolle in hippokampalen Pyramidenneuronen

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