Name: Fluoreszenzgesteuerte matrixgestützte Laserdesorption/Ionisation mit laserinduzierter Postionisations-Massenspektrometrie einzelner Nervenzellen von Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Erfahren Sie die Anwendung von Single-Cell-MALDI-2-Massenspektrometrie zur Analyse primärer neuronaler Rattenzellen. Diese Methode ermöglicht hochdurchsatzfähige molekulare Profilierung und liefert Einblicke in zelluläre Heterogenität.

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<ol><li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids+and+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids and cell signaling.</a> Curr Opin Lipidol. 28 (5), 408-413 (2017).</li>
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<li>McKinnon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI-2-Enabled+Oversampling+for+the+Mass+Spectrometry+Imaging+of+Metabolites+at+Single-Cell+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spec%22%5BJournal%5D)">MALDI-2-Enabled Oversampling for the Mass Spectrometry Imaging of Metabolites at Single-Cell Resolution.</a> J Am Soc Mass Spec. 35 (11), 2729-2742 (2024).</li>
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<li>Aboghazleh, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+brain+extraction+and+dissection%3A+A+comprehensive+approach%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Rodent brain extraction and dissection: A comprehensive approach.</a> MethodsX. 12, 102516(2024).</li>
<li>Jager, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+enzymatic+and+mechanical+methods+of+dissociation+on+neural+progenitor+cells+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of enzymatic and mechanical methods of dissociation on neural progenitor cells derived from induced pluripotent stem cells.</a> Adv Med Sci. 61 (1), 78-84 (2016).</li>
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<li>Castro, D. C., Xie, Y. R., Rubakhin, S. S., Romanova, E. V., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-guided+MALDI+mass+spectrometry+for+high-throughput+single-organelle+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Image-guided MALDI mass spectrometry for high-throughput single-organelle characterization.</a> Nat Methods. 18 (10), 1233-1238 (2021).</li>
<li>Castro, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Cell+and+Subcellular+Analysis+Using+Ultrahigh+Resolution+21+T+MALDI+FTICR+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Single-Cell and Subcellular Analysis Using Ultrahigh Resolution 21 T MALDI FTICR Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 95 (17), 6980-6988 (2023).</li>
<li>Ibáñez, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry-based+metabolomics+of+single+yeast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry-based metabolomics of single yeast cells.</a> Proc Natl Acad Sci. 110 (22), 8790-8794 (2013).</li>
<li>Krestensen, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Profiling+of+Glioblastoma+Patient-Derived+Single+Cells+Using+Combined+MALDI-MSI+and+MALDI-IHC%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular Profiling of Glioblastoma Patient-Derived Single Cells Using Combined MALDI-MSI and MALDI-IHC.</a> Anal Chem. 97 (7), 3846-3854 (2025).</li>
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<li>Xie, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Data-Driven+and+Machine+Learning-Based+Framework+for+Image-Guided+Single-Cell+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Data-Driven and Machine Learning-Based Framework for Image-Guided Single-Cell Mass Spectrometry.</a> J Proteome Res. 22 (2), 491-500 (2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2',5'-Dihydroxyacetophenon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D107603</td> DHAP, Ammoniumacetat mit <td>einer Reinheit von 97 %</td></tr><tr><td></td><td>Sigma Aldrich</td><td>238074</td><td>ACS-Reagenz, &ge; 97%</td></tr><tr><td>Axio M2 Imager</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Biopsiestanze, 2 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-399</td><td>integra miltex Standard Biopsiestanze, 2mm</td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4901</td><td>wasserfrei, Pulver > 97%</td></tr><tr><td>Eppendorf Zentrifuge</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EP5405000441</td><td>Zentrifuge 5425 mit Rotor FA-24x2</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td>Flüssigkeit, BioReagent</td></tr><tr><td>Glasätzstift</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z225568</td><td>Karbidzeit, Packung mit 1</td></tr><tr><td>Glycerin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7893</td><td>ACS Reagenz, &ge; 99,5%</td></tr><tr><td>HEPES Puffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375</td><td>&ge&ge; 99,5 % (Titration)</td></tr><tr><td>Hoechst 33258 Lösung</td><td>Sigma Aldrich</td><td>94403</td><td>1 mg/mL in H2O, &ge; 98,0% (HPLC)</td></tr><tr><td>Inline-HEPA-Filter</td><td>Sigma Aldrich</td><td>WHA67225001</td><td>VACU-GUARD 60 mm Scheibe, 0,45 PFTE Gehäuse</td></tr><tr><td>ITO-beschichtete Objektträger für die Mikroskopie</td><td>Delta Technologies</td><td>CG-90IN-S115</td><td>70-100&Omega; Beständigkeit</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M8266</td><td>wasserfrei, &ge; 98%</td></tr><tr><td>Magnesiumsulfat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>208094</td><td>wasserfrei, &ge; 97%</td></tr> <tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HS4323K</td><td>Röhrchenkapazität 1,5 ml, Packung mit 500</td></tr><tr><td>Papain Dissoziationssystem</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LK003150</td><td>einer Packung, 5 Einwegfläschchen</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4458</td><td>flüssig, BioReagenz</td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>529552</td><td>Molekularbiologisches</td></tr><tr><td>Kaliumphosphat monobasisch</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5379</td><td>Reagenz Plus</td></tr><tr><td>Natriumbiocarbonat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6014</td><td>ACS-Reagenz, &ge; 99,7%</td></tr> <tr><td>Natriumchlorid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9888</td><td>ACS Reagenz, &ge; 99%</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>221465</td><td>ACS-Reagenz, &ge; 97%, Pellets</td></tr><tr><td>Natriumphosphat zweibasig</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9763</td><td>ACS Reagenz, &ge; 99%</td></tr><tr><td>Sublimat</td><td>HTX</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>timsTOF FleX MALDI-2</td><td>Bruker</td><td>N/A</td><td>microGRID fähiger</td></tr><tr><td>Vakuumschlauch&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>8701-0080</td><td>Nalgene PVC-Schläuche ohne Phthalate</td></tr></tbody></table>

fluoreszenzgesteuerte matrixgestützte laserdesorption/ionisation mit laserinduzierter postionisations-massenspektrometrie einzelner nervenzellen von ratten

Fluorescence-Guided Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization with Laser-Induced Postionization Mass Spectrometry of Individual Rat Neural Cells

Abbildung 1 gibt einen Überblick über den Arbeitsablauf für die fluoreszenzgesteuerte einzellige MALDI-2-MS. Zunächst wird das Gewebe, das aus den Zielregionen des Gehirns präpariert wird (Abbildung 1A), in einzelne Zellen dissoziiert und auf leitfähigen, ITO-beschichteten Mikroskopieobjektträgern abgelagert (Abbildung 1B). Die Positionen der Zellen werden durch Fluoreszenzbildgebung des gesamten Objektträgers (...

Fluoreszenzgesteuerte matrixgestützte Laserdesorption/Ionisation mit laserinduzierter Postionisations-Massenspektrometrie einzelner Nervenzellen von Ratten

Single-cell measurements are critical to understanding the rich spatiochemical heterogeneity of the brain. Matrix-assisted laser/desorption ionization ...

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Forschung

JoVE Journal

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Neurowissenschaften

Dopamin-Substitutionstherapie Pharmakotherapie mit L-DOPA ist das am häufigsten verwendete symptomatischen Behandlung der Parkinson-Krankheit, sondern wird durch Nebenwirkungen einschließlich der zwangsweisen abnormen Bewegungen, bezeichnet Dyskinesie...

MALDI-Imaging-Massenspektrometrie von Neuropeptiden bei Parkinsonpatienten

Quelle: Hare, D. J., et.al.  Bildgebung von Metallen im Hirngewebe durch Laserablation - Induktiv gekoppeltes Plasma - Massenspektrometrie (LA-ICP-MS). J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video demonstriert die Verwendung der Laserablations-Massenspektrometrie mit induktiv gekoppeltem Plasma (LA-ICP-MS) zur Visualisierung und Quantifizierung von Metallverteilungen im Hirngewebe von Mäusen. Das Protokoll umfasst die Laserablation zur Erzeugung eines Aerosols aus Probenpartikeln, die Ionisierung der...

Laserablations-induktiv gekoppelte Plasma-Massenspektrometrie zur Visualisierung von Metallen im Hirngewebe von Mäusen

Wir beschreiben, wie der Laser-Mikrodissektion (LCM) verwenden, um angereichert Populationen von Neuronen im Hippocampus oder einzelne Neuronen aus Gefrierschnitten der Verletzten Rattenhirn für nachfolgende Genexpressionsanalyse mittels quantitativer real-time PCR und / oder des gesamten Genoms Microarrays erhalten.

Laser Capture Mikrodissektion von Angereichert Populationen von Neuronen oder Single Neurons zur Genexpressionsanalyse Nach Traumatic Brain Injury

Menschen neuroprogenitor Zellen (NPCs) wurden unter proliferierenden Bedingungen erweitert. NSC wurden in Neuron-reiche Kulturen in der Gegenwart einer Kombination von Neurotrophinen unterscheiden. Neuronale Marker wurden durch Immunfluoreszenz-Färbung nachgewiesen. Um eine reine Population von Nervenzellen zu isolieren, wurden NPCs auf PEN-Membran-Folien differenziert und Laser-Mikrodissektion durchgeführt wurde.

Laser Capture Mikrodissektion von Neuronen aus Differenzierte Menschen Neuroprogenitor Zellen in Kultur

Dieses Protokoll beschreibt das Design und die chirurgische Implantation eines kopffixierenden Mechanismus zur Überwachung der neuronalen Aktivität in subkortikalen Gehirnstrukturen bei wachen Ratten.  Es beschreibt Verfahren zur Isolierung einzelner Neuronen in der juxtazellulären Konfiguration und zur effizienten Identifizierung ihrer anatomischen Positionen.

Juxtacellular Überwachung und Lokalisierung von einzelnen Neuronen im Sub-kortikalen Hirnstrukturen der Alarm, Head-zurückhaltende Ratten

Die Isolierung der einzelnen Dopamin-Neuronen oder der ventralen Haubengebiet mit direkter oder indirekter Immunhistochemie nutzt Laser Mikrodissektion demonstriert. Parameter für die Isolierung von Gewebe aus einem Glasobjektträger unter Verwendung eines Infrarotlasers und aus Membran Folien unter Verwendung der Kombination eines Infrarot und Ultraviolett-Lasers diskutiert.

Laser Mikrodissektion - Eine Demonstration der Isolation der einzelnen Dopamin-Neuronen und die gesamte ventrale Tegmentum

Genexpressionsanalyse einer Untergruppe von Zellen in einem spezifischen Gewebe stellt eine große Herausforderung. Dieser Artikel beschreibt, wie man qualitativ hochwertige Gesamt-RNA aus einer bestimmten Zellpopulation durch die Kombination einer schnellen Immunomarkierung Verfahren mit Laser Mikrodissektion zu isolieren.

RNA-Isolierung aus zellspezifische Subpopulationen Mit Laser-Mikrodissektion In Verbindung mit Rapid-Immunmarkierung

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung (FACS) Technik zu verwenden, um bestimmte Arten von Nervenzellen für die anschließende Analyse der zelltypspezifischen Genexpression, epigenetischen Markern und/oder Proteinexpression zu sortieren.

Mit fluoreszenzaktivierter Zellsortierung die zelltypspezifische Genexpression im Hirngewebe von Ratten untersuchen

Wir beschreiben eine Technik, um Neuronen und ihre Prozesse über anterograden oder retro Tracer Injektionen in Hirnkernen unter Verwendung eines in vitro-Präparat zu bezeichnen. Wir modifiziert eine vorhandene Methode der i n vitro Tracer Elektroporation durch die Nutzung von fluoreszenzmarkierte Mausmutanten und grundlegende optische Geräte, um die Kennzeichnung Genauigkeit zu erhöhen.

Lasergelenkte neuronale Tracing in Brain Explantate

Ein Protokoll für die Sublimation der DAN-Matrix auf Rattenhirngewebe zum Nachweis von Gangliosiden mittels MALDI Imaging Massenspektrometrie wird vorgestellt.

Sublimation von DAN Matrix für die Erkennung und Visualisierung von Gangliosiden in Rattenhirngewebe für die MALDI-Imaging-Massenspektrometrie

Dieses Protokoll erklärt, wie einzelne Neuronen, Mikroglia und Astrozyten aus dem zentralen Kern der Amygdala mit hoher Genauigkeit und anatomischer Spezifität mit Laser-Capture-Mikrodissektion zu sammeln. Darüber hinaus erklären wir unsere Verwendung von mikrofluidischem RT-qPCR, um eine Teilmenge des Transkriptoms dieser Zellen zu messen.

Kombination von Laser Capture Microdissection und Microfluidic qPCR zur Analyse von Transkriptionsprofilen einzelner Zellen: Ein systembiologischer Ansatz zur Opioidabhängigkeit

Erfahren Sie die Anwendung von Single-Cell-MALDI-2-Massenspektrometrie zur Analyse primärer neuronaler Rattenzellen. Diese Methode ermöglicht hochdurchsatzfähige molekulare Profilierung und liefert Einblicke in zelluläre Heterogenität.

Fluoreszenzgesteuerte matrixgestützte Laserdesorption/Ionisation mit laserinduzierter Postionisations-Massenspektrometrie einzelner Nervenzellen von Ratten (Video) | JoVE Journal

Fluoreszenzgesteuerte matrixgestützte Laserdesorption/Ionisation mit laserinduzierter Postionisations-Massenspektrometrie einzelner Nervenzellen von Ratten

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