Name: Eine einfache und schnelle Methode zur gleichzeitigen Isolierung von primären Inselchen und primären Pankreas-Acinarzellen von Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Erfahren Sie eine vereinfachte Methode zur gleichzeitigen Isolierung primärer Inselzellen und Pankreas-Acinarzellen von Mäusen. Diese Technik ermöglicht Diabetes-Forschung ohne spezialisierte Perfusionserfahrung.

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<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
<li>Hohmeier, H. E., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from pancreatic islets.</a> Mol Cell Endocrinol. 228 (1-2), 121-128 (2004).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
<li>Xiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+and+mortality+of+pancreatic+diseases%3A+a+systematic+review%2C+meta-analysis%2C+and+meta-regression+of+population-based+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global incidence and mortality of pancreatic diseases: a systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies.</a> Lancet Gastroenterol Hepatol. 1 (1), 45-55 (2016).</li>
<li>Sendler, M., Weiss, F. U., Golchert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B-mediated+activation+of+trypsinogen+in+endocytosing+macrophages+increases+severity+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B-mediated activation of trypsinogen in endocytosing macrophages increases severity of pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (3), 704-718.e10 (2018).</li>
<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,22 &mu; M-Filter</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td>Filtern Sie die vorbereitete Collagenase-P-Lösung</td></tr><tr><td>0,25 m Calciumchlorid (steril)</td><td>Beyotime</td><td>ST365</td><td>Kalziumabhängiger Signalweg zur Aktivierung der Insulinsekretion</td></tr><tr><td>1 ml Spritze</td><td>Jierui</td><td>10084692516405</td><td>Verwendet zur Kollagenase-P-Perfusion in das Bauchspeicheldrüsengewebe.</td></tr><tr><td>1,25 % Tribromoethanol-Lösung</td><td>Beijing Yosida Biotechnology Co., Ltd.</td><td>JT0781</td><td>Anästhesie</td></tr><tr><td>1,5 mL Zentrifugenröhre</td><td>Eppendorf</td><td>30121589</td><td>Sammeln Sie den Zellüberstand für Zentrifugation und Lagerung.</td></tr><tr><td>1x Hank' s ausgewogene Salzlösung</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Bereiten Sie die Kollagenase-P-Lösung vor und spülen Sie das Bauchspeicheldrüsengewebe aus</td></tr><tr><td>12-Well-Zellkulturplatte</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3921</td><td>Halten Sie das Bauchspeicheldrüsengewebe und das extrahierte Acinar aus der Kultur</td></tr><tr><td>15 mL Zentrifugenröhre</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-15A</td><td>Halten von Lösungen während des Experiments</td></tr><tr><td>24-Bohrloch-Zellkulturplatte</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3922</td><td>Kultivierung der gewonnenen Inselchen</td></tr><tr><td>40-mesh&nbsp; Sieb</td><td>Weidan-Instrumente</td><td>N/A</td><td>Pankreasgewebe filtern</td></tr><tr><td>5 mL Pasteur-Pipette</td><td>Biosharp</td><td>BS-XG-03L</td><td>Pipettieren von Flüssigkeiten und physikalische Störung des Bauchspeicheldrüsengewebes</td></tr><tr><td>50 mL Zentrifugenrohr</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-50A</td><td>Halten von Lösungen während des Experiments, Gewebeeindämmung und Zentrifugation</td></tr><tr><td>60-mm-Zellkulturschalen</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>12211</td><td>Behälter zum Aufbewahren von Kulturmedium mit Inselchen zum einfachen Pflücken</td></tr><tr><td>75%ige Ethanollösung</td><td>HYNAUT</td><td>N/A</td><td>Weichen Sie die Mäuse zur Desinfektion ein.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 2023</td><td>Adobe Inc.</td><td>N/A</td><td>Erzeugen Sie Bilder.</td></tr><tr><td>Beckman Allegra X-12/X-12R Zentrifuge</td><td>BECKMAN</td><td>Allegra X-12/X-12R</td><td>Zentrifuge</td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)-V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td>Die normale physiologische Funktion der Inselchen aufrechterhalten und (dieses) zur Herstellung von Glukoselösungen unterschiedlicher Konzentration verwenden.</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mäuse, SPF-Qualität, 6 & Dash; 8 Wochen alt, 7,5 km/t; 25 g</td><td>Labortierzentrum der Naval Medical University&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Calcein/PI-Zell-Viabilitäts- und Zytotoxizitäts-Assay-Kit</td><td>Beyotime</td><td>C2015L</td><td>Nachweis der Zelllebensfähigkeit und Zytotoxizität von Tierzellen basierend auf der gleichzeitigen Färbung von lebensfähigen und toten Zellen durch Calcein-AM (Calcein AM) und Propidiumiodid (PI) Doppelfluoreszenzfärbung.</td></tr><tr><td>Calciumchlorid (wasserfrei)</td><td>Sangon Biotech</td><td>10043-52-4</td><td>Bereite die Kollagenase-P-Lösung vor.</td></tr><tr><td>Zell-Sieb (100 & mu; m)</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-XBS</td><td>Filterung von Acinarzellen</td></tr><tr><td>Kollagenase P</td><td>Sigma</td><td>11213857001</td><td>Verdauungsgewebe der Bauchspeicheldrüse</td></tr><tr><td>D-(+)-Glukoselösung (20 %, steril)</td><td>Beyotime</td><td>ST491</td><td>Stimulieren Sie die Insulinsekretion aus den Inselchen.</td></tr><tr><td>DMEM Basic (1x) (Dulbecco' s modifiziertes Eagle Medium)</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Acinarzellen kultivieren</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Biowest</td><td>S140B-500</td><td>Bereite das Kulturmedium vor.</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PREMIUM sterile Lösung</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td>Dichtegradientenmedium für die Dichtegradientenschichtung</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.1</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Erzeugen Sie Bilder und führen Sie statistische Analysen durch.</td></tr><tr><td>HEPES-Lösung (1 M)</td><td>Biosharp</td><td>BL1061A</td><td>Bereite die Kollagenase-P-Lösung vor.</td></tr><tr><td>Hochgeschwindigkeits-/gekühlte Zentrifuge</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td>Zentrifuge</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Institutes of Health Labor für Optische und Computergestützte Instrumentierung (LOCI)</td><td>N/A</td><td>Analysieren Sie Zellfluoreszenzbilder und berechnen Sie die Lebensfähigkeit der Zelle.</td></tr><tr><td>Invertiertes biologisches Mikroskop</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td>Beobachte die Zellmorphologie und wähle die Inselchen aus.</td></tr><tr><td>Invertiertes Fluoreszenzmikroskop</td><td>OLYMPUS</td><td>IX73</td><td>Beobachten Sie die zellulären Fluoresziersignale und machen Sie fluoreszierende Bilder.</td></tr><tr><td>Krebs-Ringer-Bicarbonat-HEPES-Puffer</td><td>LEAGENE</td><td>CZ0103</td><td>Die normale physiologische Funktion der Inselchen aufrechterhalten und (dieses) zur Herstellung von Glukoselösungen unterschiedlicher Konzentration verwenden.</td></tr><tr><td>Maus INS (Insulin) ELISA Kit</td><td>Wuhan Fine Biotech Co., Ltd.</td><td>EM0260</td><td>Erkennen Sie den Insulinsekretionsstand der Inselchen.</td></tr><tr><td>Augenzwange (10 cm, mit Haken gebogen)</td><td>Qingyi Medizinische Geräte</td><td>N/A</td><td>Unterstützung bei der Sektion</td></tr><tr><td>Augenzwange (10 cm, gerade mit Zahn)</td><td>Qingyi Medizinische Geräte</td><td>N/A</td><td>Unterstützung bei der Sektion und plötzlichen Trennung des Bauchspeicheldrüsengewebes sowie bei der Extraktion des Bauchspeicheldrüsengewebes</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin-Lösung</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Bereiten Sie das Kulturmedium vor, um eine Verunreinigung zu verhindern</td></tr><tr><td>RPMI-1640 Medium,</td><td>KeyGEN BioTECH</td><td>KGL1501-500</td><td>Beenden Sie die Kollagenase P-Verdauungslösung und kultivieren Sie die Inselchen</td></tr><tr><td>Trypsininhibitor von Glycine Max (Sojabohne)</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Bereite die Kollagenase-P-Lösung vor.</td></tr><tr><td>Urgische Schere (10 cm, gerade spitz)</td><td>Qingyi Medizinische Geräte</td><td>N/A</td><td>Unterstützung bei der Anatomie und Zerschneiden des Bauchspeicheldrüsengewebes in kleine Stücke</td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td>OAICLAB</td><td>OW-HF</td><td>Halten Sie die Verdauungstemperatur aufrecht.</td></tr><tr><td>&Alpha;-Amylase- und &Beta;-Amylase-Aktivitätsassay-Kit</td><td>Elabscience</td><td>E-BC-K006-M</td><td>Erkennen Sie die Amylasespiegel, die von Acinarzellen unter verschiedenen Bedingungen ausgeschieden werden.</td></tr></tbody></table>

eine einfache und schnelle methode zur gleichzeitigen isolierung von primären inselchen und primären pankreas-acinarzellen von mäusen

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

Eine einfache und schnelle Methode zur gleichzeitigen Isolierung von primären Inselchen und primären Pankreas-Acinarzellen von Mäusen

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

a-simple-rapid-method-for-simultaneous-isolation-primary-islets

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Eine detaillierte Beschreibung der Maus Inselisolierung wird beschrieben unter Verwendung der Technik der in situ-pankreatischen duktalen Kanülierung und Perfusion einer Kombination von gereinigten Collagenase und neutralen Protease.

Maus Islet der Langerhans Isolation durch eine Kombination von gereinigtem Collagenase und Neutral Protease

Dieses Video beschreibt die Technik, die zur Isolierung von Azinuszellen der Bauchspeicheldrüse verwendet wird - exokrine Zellen -, die eine Vielzahl von Verdauungsenzymen enthalten. Primäre Azinuszellen sind nützlich in der ex vivo-Studie der Azinus-zu-duktalen Metaplasie (ADM) - einem frühen Ereignis bei der Entwicklung von Bauchspeicheldrüsenkrebs.

Primäre Isolierung von Azinuszellen: Eine Methode zur Isolierung von Azinuszellen aus der Bauchspeicheldrüse der Maus

Pankreasinseln, auch Langerhans-Inseln genannt, sind eine Ansammlung von endokrinen Zellen, die Hormone für die Glukoseregulierung und andere wichtige biologische Funktionen produzieren. Dieses Protokoll erklärt eine Methode zur Isolierung von Pankreasinseln, indem zuerst Kollagenase über Ampulla von Vater perfundiert wird, um das exokrine Pankreasgewebe zu verdauen, und eine vereinfachte Dichtegradientenzentrifugation, um die Inselzellen von Mäusen zu reinigen.

Isolierung von Pankreasinseln durch Kollagenase-Perfusion: Eine enzymatische Methode zur Isolierung von Pankreas-Inselzellen

Die Untersuchung in vitro β-Zell-Funktion mit isolierten Maus-Langerhans-Inseln ist ein wichtiger Bestandteil in der Studie der Diabetes Pathophysiologie und Therapie. Während viele Downstream-Anwendungen zur Verfügung stehen, dieses Protokoll beschreibt speziell die Messung der intrazellulären zyklischen Adenosinmonophosphat (cAMP) als wesentlicher Parameter, der β-Zellfunktion.

Eine Methode zur Maus-Inselzellen der Bauchspeicheldrüse Isolation und intrazellulären cAMP-Bestimmung

In dieser Veröffentlichung beschreiben wir eine schnelle und bequeme Verfahren zur Isolierung und Kultivierung von primären Azinuszellen des Pankreas von dem murinen Bauchspeicheldrüse. Diese Methode stellt einen wertvollen Ansatz, um die Physiologie der frischen primären normal / transformierten exokrinen Pankreas-Zellen zu studieren.

Isolierung und Kultivierung von primären Maus Azinuszellen des Pankreas

Wir präsentieren hier ein Protokoll für die Isolierung von Inselzellen aus dem Mausmodell für Typ-2-Diabetes, Leprdb und Details eines Lebendzell-Assays zur Messung der Insulinsekretion von intakten Inseln, der 2-Photonenmikroskopie verwendet.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Mausmodell des Typ-2-Diabetes: Pancreatic Islet Isolation und Live-cell 2-Photonen-Imaging von intakten Inseln

Wir beschreiben ein Protokoll hier für intakte Inseln von neugeborenen Mäusen zu isolieren. Bauchspeicheldrüsen wurden teilweise mit Kollagenase, gefolgt von Waschen und Hand picking verdaut. 20-80 islet Cluster können pro Bauchspeicheldrüse von neugeborenen Mäusen erhalten werden, die für mehrere islet Studien geeignet sind.

Effektive Isolation von funktionellen Inselchen von Neonatal Maus Pancreas

Dieses Inselisolierungsprotokoll beschrieb einen neuartigen Weg der Kollagenase-Injektion zur Verdauung des Exokringewebes und ein vereinfachtes Gradientenverfahren, um die Inseln von Mäusen zu reinigen. Es beinhaltet enzymatische Verdauung, Gradiententrennung/Reinigung und Islet-Handpicking. Eine erfolgreiche Isolierung kann 250–350 hochwertige und voll funktionsfähige Inselchen pro Maus ergeben.

Ein einfaches Hocheffizienzprotokoll für die Isolierung von Pankreas-Isleten von Mäusen

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Maus pankreatische Inselzellen für das screening von ROS Induktionen durch die XENOBIOTIKA Ermittlung der potenziellen diabetogene XENOBIOTIKA Chemikalien zu isolieren.

Ein murinen Pancreatic Islet Cell-basierte Screening für diabetogene Umweltchemikalien

Hier stellen wir ein Protokoll zur Abbildung und Quantifizierung der Calciumdynamik in heterogenen Zellpopulationen wie Pankreas-Isletzellen vor. Fluoreszierende Reporter werden in die periphere Zellschicht innerhalb der Islet geliefert, die dann immobilisiert und abgebildet wird, und es wird eine pro-Zell-Analyse der Dynamik der Fluoreszenzintensität durchgeführt.

Bildgebende Calciumdynamik in Subpopulationen von Maus-Pankreas-Islet-Zellen

Dieses Protokoll beschreibt eine standardisierte Methode zur chirurgischen Entnahme, enzymatischen Verdauung und Dichtegradientenreinigung von Lewis-Rattenpankreasinseln, die ertragreiche, hochreine Präparate für den direkten Einsatz bei Transplantationen oder in vitro-Studien ermöglicht.

Isolierung und Reinigung von Pankreasinseln bei Lewis-Ratten mittels enzymatischer Verdauung und Dichtegradiententrennung

Erfahren Sie eine vereinfachte Methode zur gleichzeitigen Isolierung primärer Inselzellen und Pankreas-Acinarzellen von Mäusen. Diese Technik ermöglicht Diabetes-Forschung ohne spezialisierte Perfusionserfahrung.

Eine einfache und schnelle Methode zur gleichzeitigen Isolierung von primären Inselchen und primären Pankreas-Acinarzellen von Mäusen (Video) | JoVE Journal

Eine einfache und schnelle Methode zur gleichzeitigen Isolierung von primären Inselchen und primären Pankreas-Acinarzellen von Mäusen

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