Name: Effiziente Reinigung von elastinähnlichen Polypeptiden (ELPs) aus E. coli mittels einer organisch-lösungsmittelbasierten Extraktions- und Ausfällungsmethode (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Lernen Sie eine schnelle organische Lösungsmittelextraktion zur Reinigung von Elastin-ähnlichen Polypeptiden aus E. coli. Diese skalierbare Methode liefert reine Fusionsproteine mit niedrigem Endotoxingehalt und erhaltener Aktivität.

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<ol><li>Despanie, J., Dhandhukia, J. P., Hamm-Alvarez, S. F., MacKay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides%3A+therapeutic+applications+for+an+emerging+class+of+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides: therapeutic applications for an emerging class of nanomedicines.</a> J Control Release. 240, 93-108 (2016).</li>
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<li>Jenkins, I. C., Milligan, J. J., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+encoded+elastin-like+polypeptides+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Genetically encoded elastin-like polypeptides for drug delivery.</a> Adv Healthc Mater. 10 (13), e2100209(2021).</li>
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<li>Guo, Y., Liu, S., Jing, D., Liu, N., Luo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+construction+of+elastin-like+polypeptides+and+their+applications+in+drug+delivery+system+and+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">The construction of elastin-like polypeptides and their applications in drug delivery system and tissue repair.</a> J Nanobiotechnology. 21, 418(2023).</li>
<li>Yi, A., Sim, D., Lee, S. -B., Sarangthem, V., Park, R. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+bioengineered+elastin-like+polypeptide-based+system+for+targeted+gene+delivery+in+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Biosyst%22%5BJournal%5D)">Application of bioengineered elastin-like polypeptide-based system for targeted gene delivery in tumor cells.</a> Biomater Biosyst. 6, 100050(2022).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0710</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>30 % Acrylamid/Bis-Acrylamid</td><td>TCI</td><td>A3218</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Fisher Scientific</td><td>A949</td><td>Organisches Lösungsmittel</td></tr><tr><td>Acetonitril</td><td>Fisher Scientific</td><td>A996</td><td>Organisches Lösungsmittel</td></tr><tr><td>Ampicilin</td><td>Gold Bio – Gold Biotechnologie</td><td>A-301-25</td><td>Antibiotikum</td></tr><tr><td>APS (Ammoniumpersulfat)</td><td>Bio-Rad</td><td>1610700</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>Butanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>L13171</td><td>Organisches Lösungsmittel</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher-Bioreagenzien</td><td>BP118-500</td><td>Lysis-Pufferkomponente</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>UN1170</td><td>Organisches Lösungsmittel</td></tr><tr><td>Ethylacetat</td><td>Fisher Scientific</td><td>E195</td><td>Organisches Lösungsmittel</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Research Products International</td><td>G22020-0.5</td><td>Großartige Brühe (TB) Medienkomponente</td></tr><tr><td>Salzsäure</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144SI-212</td><td>Lysis-Pufferkomponente</td></tr><tr><td>Sofortiger Coomasie-Fleck</td><td>Abcam</td><td>ab119211</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Gold Bio – Gold Biotechnologie</td><td>12481C25</td><td>Proteinexpressionskomponente</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A451-1</td><td>Organisches Lösungsmittel</td></tr><tr><td>K2HPO4 (Kaliumphosphat monobasisch)</td><td>Wards' Science</td><td>470302-246</td><td>Teil 2 Pufferkomponente</td></tr><tr><td>KH2PO4 (Potasiumphosphat-Dibasisk)</td><td>Wards' Science</td><td>470302-254</td><td>Teil 2 Pufferkomponente</td></tr><tr><td>L-Prolin</td><td>Research Products International</td><td>P5200-500,0</td><td>Großartige Brühe (TB) Medienkomponente</td></tr><tr><td>Lysozym</td><td>Gold Bio – Gold Biotechnologie</td><td>L-040-1</td><td>Lysis-Pufferkomponente</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A452</td><td>Organisches Lösungsmittel</td></tr><tr><td>Nativer Samplepuffer</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0738</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>Proteinleiter</td><td>Gold Bio – Gold Biotechnologie</td><td>P008-500</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>Auflösen des Gelpuffers</td><td>Bio-Rad</td><td>1610798</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>Sodim-Dodecylsulfat (SDS)</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>J18220-36</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>Natriumhydroxid</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-500</td><td>Lysis-Pufferkomponente</td></tr><tr><td>Stapelgel-Puffer</td><td>Bio-Rad</td><td>1610799</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>1610801</td><td>SDS-PAGE-Komponente</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher-Bioreagenzien</td><td>BP-152</td><td>Lysis-Pufferkomponente</td></tr><tr><td>Trypton</td><td>Research Products International</td><td>T60065-1000.0</td><td>Großartige Brühe (TB) Medienkomponente</td></tr><tr><td>Hefeextrakt</td><td>Research Products International</td><td>Y20025-1000.0</td><td>Großartige Brühe (TB) Medienkomponente</td></tr></tbody></table>

effiziente reinigung von elastinähnlichen polypeptiden (elps) aus e. coli mittels einer organisch-lösungsmittelbasierten extraktions- und ausfällungsmethode

Efficient Purification of Elastin-Like Polypeptides (ELPs) from E. coli Using an Organic Solvent-based Extraction and Precipitation Method

Nach Durchlaufen der letzten Phasen des Protokolls ist der nächste Schritt die Visualisierung des Extraktions-Niederschlagsergebnisses mittels SDS-PAGE-Analyse und Coomassie-Blaufärbung. Wenn vor der organischen Extraktion ein Lyseschritt erfolgt, sollte ein markantes ELP-Band sichtbar sein. Im Fall von ELP-I-Cm2 erscheint dieses Band bei 100 kDa (Abbildung 3A).
Das Screening verschiedener organischer Lösungsmittelkombinationen zeigte variable Extraktionseffizienz...

Effiziente Reinigung von elastinähnlichen Polypeptiden (ELPs) aus E. coli mittels einer organisch-lösungsmittelbasierten Extraktions- und Ausfällungsmethode

Elastin-like polypeptides (ELP) are engineered biopolymers built from repetitive pentapeptide sequences that mimic motifs found in mammalian tropoelastin. ...

efficient-purification-elastin-like-polypeptides-elps-from-e-coli

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Forschung

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Biochemistry

Biochemie

Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Reinigung von hochaktiven Hsp104, ein hexameren AAA +-Protein aus Hefe, die Paare ATP-Hydrolyse, um Protein Disaggregation. Dieses Schema nutzt eine His6-markierten Konstruktes zur Affinitätsreinigung...

Reinigung von Hsp104, ein Protein Disaggregase

In diesem Video demonstrieren wir die Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie zur Aufreinigung von Peptiden aus einer verdauten Proteinlysatmischung. Diese aufgereinigten Peptide werden dann lyophilisiert und für nachgelagerte Anwendungen gelagert. Die Analyse von Peptiden kann helfen, die Mechanismen zu verstehen, die an der zellulären Signalübertragung und Krebs beteiligt sind.

Peptidaufreinigung: Eine RP-HPLC-basierte Technik zur Extraktion von Peptiden aus verdauten Proteinlysaten

Elastin-ähnliche Polypeptide sind stimuliresponsiven Biopolymeren mit Anwendungen von rekombinanten Proteinreinigung zu Drug Delivery. Dieses Protokoll beschreibt die Reinigung und Charakterisierung von Elastin-ähnliche Polypeptide und deren Peptid-oder Protein-Fusionen aus Escherichia coli unter Verwendung der unteren kritischen Lösungstemperatur Phasenübergangsverhalten, wie eine einfache Alternative zur Chromatographie.

Nicht-chromatographischen Reinigung von rekombinantem Elastin-ähnliche Polypeptide und deren Fusionen mit Peptiden und Proteinen aus<em&gt; Escherichia coli</em

Rekombinante Technologien haben es Materialdesignern ermöglicht, neuartige künstliche Proteine mit maßgeschneiderten Funktionalitäten für Tissue-Engineering-Anwendungen zu schaffen. Zum Beispiel können künstliche extrazelluläre Matrixproteine so gestaltet werden, dass sie strukturelle und biologische Domänen enthalten, die von nativen EZMs abgeleitet sind. Hier beschreiben wir den Aufbau und die Reinigung von aECM-Proteinen, die Elastin-ähnliche Wiederholungen enthalten.

Planung und Bau von künstlichen extrazellulären Matrix (aECM) Proteine ​​aus<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Zum Haut Tissue Engineering

Das Protokoll sieht eine Methodik aerobe granulare Schlamm löslich zu machen, um Alginat-ähnliche extrazelluläre Polymere (ALE) zu extrahieren.

Die Extraktion von Strukturextrazellulären polymeren Substanzen aus Aerobic Granular Sludge

Rekombinantes Protein-Engineering Hydrogele sind für 3D Zellkultur von Vorteil, da sie für komplette Einstellbarkeit der Polymer-Rückgrat und sich somit die Zelle Mikroumgebung ermöglichen. Hier beschreiben wir den Prozess der rekombinante Elastin-wie Proteinreinigung und ihre Anwendung in 3D Hydrogel Zelle Kapselung.

Produktion von Elastin-Like Protein Hydrogele für Kapselung und Immunostaining Zellen in 3D

Hier werden Protokolle zur Herstellung von peptidbasierten kleinen unilamellalaren Vesikeln vorgestellt, die wachstumsfähig sind. Um die Vesiculo-Produktion des Membranpeptids zu erleichtern, sind diese Vesikel mit einem Transkriptions-Translation-System und dem Peptid-kodierenden Plasmid ausgestattet.

In Vesiculo Synthese von Peptid Membran Vorläufer für autonomeve Vesikelwachstum

An der Schnittstelle von organischen und wässrigen Lösungsmitteln fügen sich maßgeschneiderte amphiphile Elastin-ähnliche Proteine zu komplexen supramolekularen Strukturen wie Vesikeln, Fasern und Koacervaten zusammen, die durch Umweltparameter ausgelöst werden. Die beschriebenen Montageprotokolle ergeben Proteinmembran-basierte Fächer (PMBCs) mit abstimmbaren Eigenschaften, die die Verkapselung verschiedener Ladungen ermöglichen.

Gerichtete Montage von Elastin-ähnlichen Proteinen in definierte supramolekulare Strukturen und Cargo-Verkapselung In Vitro

Bakterien sezernieren nanometergroße extrazelluläre Vesikel (EVs), die bioaktive biologische Moleküle tragen. Die EV-Forschung konzentriert sich auf das Verständnis ihrer Biogenese, ihrer Rolle bei Mikroben-Mikroben- und Wirt-Mikroben-Interaktionen und Krankheiten sowie ihrer potenziellen therapeutischen Anwendungen. Ein Workflow für die skalierbare Isolierung von EVs aus verschiedenen Bakterien wird vorgestellt, um die Standardisierung der EV-Forschung zu erleichtern.

Skalierbare Isolierung und Reinigung extrazellulärer Vesikel aus Escherichia coli und anderen Bakterien

Das vorliegende Protokoll beschreibt die lösungsmittelbasierte Proteinfällung unter kontrollierten Bedingungen für eine robuste und schnelle Gewinnung und Reinigung von Proteomproben vor der Massenspektrometrie.

Proteinfällung auf organischer Lösungsmittelbasis für eine robuste Proteomreinigung vor der Massenspektrometrie

In diesem Artikel wird eine Methode zur Überexpression von rekombinantem Nsp15, einer toxischen Nuklease, in einem C41(DE3)-Expressionssystem beschrieben, gefolgt von der Aufreinigung des markierten Proteins mittels Affinitäts- und Größenausschlusschromatographie. Diese Protokolle können für andere anspruchsvolle toxische Proteine angepasst werden.

Überexpression und Reinigung einer toxischen Nuklease aus Escherichia coli

Lernen Sie eine schnelle organische Lösungsmittelextraktion zur Reinigung von Elastin-ähnlichen Polypeptiden aus E. coli. Diese skalierbare Methode liefert reine Fusionsproteine mit niedrigem Endotoxingehalt und erhaltener Aktivität.

Effiziente Reinigung von elastinähnlichen Polypeptiden (ELPs) aus E. coli mittels einer organisch-lösungsmittelbasierten Extraktions- und Ausfällungsmethode (Video) | JoVE Journal

Effiziente Reinigung von elastinähnlichen Polypeptiden (ELPs) aus E. coli mittels einer organisch-lösungsmittelbasierten Extraktions- und Ausfällungsmethode

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