Fijación de etanol y tinción con DAPI: un método para visualizar el ADN en C. elegans

- Comience con una gota de solución tampón en un portaobjetos de microscopio y transfiera los gusanos intactos a la gota. Una vez que los gusanos estén en su lugar, use un pañuelo sin pelusa para absorber y eliminar el tampón. Fije la muestra bañando las muestras con etanol al 90% varias veces, permitiendo que se evapore después de cada aplicación.

Una vez que el etanol se haya evaporado después del enjuague final, agregue una solución que contenga el colorante de ácido nucleico, DAPI, a la muestra. DAPI se une preferentemente a las bases de adenina y timina en el surco menor del ADN. Cuando se une, el complejo DAPI-ADN absorbe la luz ultravioleta y emite luz azul visible.

A continuación, agregue un conservante anti-decoloración para prolongar la vida útil de la muestra. Aplique un cubreobjetos y séllelo al portaobjetos. A continuación, utilice un microscopio fluorescente con un filtro azul para visualizar los cuerpos DAPI, que, dependiendo de la célula y su estado de ciclo, pueden representar cromosomas individuales, pares de cromátidas hermanas o núcleos completos. En este experimento, contaremos pares de cromátidas hermanas teñidas con DAPI en ovocitos, para identificar cepas te