Preparación del pulmón de ratón para la citometría de flujo: generación de suspensión celular a partir de tejido pulmonar para el análisis de citometría de flujo

- Comience por tomar un ratón sacrificado y asegúrelo en una tabla de disección con cinta de laboratorio. Usa unas tijeras para cortar la piel. Hacer una incisión vertical a través del diafragma y cortar las costillas para llegar a la cavidad torácica, exponiendo el corazón y los pulmones. A continuación, haga una pequeña incisión en el ventrículo izquierdo del corazón. Posteriormente, localice el ventrículo derecho e inserte una jeringa que contenga PBS en la luz del ventrículo. Perfundir PBS a través del ventrículo derecho, permitiendo que la sangre fluya fuera de la incisión prefabricada en el ventrículo izquierdo hasta que los pulmones se vuelvan blancos. Extraiga el tejido pulmonar que contiene los nódulos tumorales y píquelo en pedazos pequeños.

Incubar los trozos en el tampón de digestión pulmonar. La colagenasa en el tampón de digestión pulmonar ayuda a aislar las células, y la ADNasa ayuda a eliminar el ADN de las células muertas. Cuele la suspensión resultante a través de un colador de celdas para eliminar los grumos y hacer que la suspensión de celdas sea uniforme. Centrifugar y resuspender el pellet en el tampón de cloruro de amonio y potasio para lisar los eritrocitos